一种银杏叶粉针剂及其制备方法

张平

2003年1月8日

2002年6月11日

2002年6月11日

张平

A61P9/00GK1389240SQ02115359

银杏叶 粉针剂

1.一种银杏叶粉针剂，该粉针剂可由下述方法制备获得取银杏叶，用40～80％乙醇回流提取，减压回收尽乙醇，浓缩，静置，去除上层不溶物，用等量醋酸乙酯提取并回收，残留物真空干燥，粉碎成细粉，将细粉置超临界萃取器中，用液态二氧化碳为流体提取，得银杏叶提取物，将银杏叶提取物加注射用水溶解，再加入附加剂混匀，调pH值至6.0～7.5，过滤，滤液再用微孔滤膜过滤，滤液无菌分装于灭菌西林瓶中，冷冻干燥，压塞，压盖，即得2.一种银杏叶粉针剂的制备方法，该方法包括下述顺序的步骤(1)取银杏叶，用40～80％乙醇回流提取，减压回收尽乙醇，浓缩，静置，去除上层不溶物，用等量醋酸乙酯提取并回收，残留物真空干燥，粉碎成细粉；(2)取上述细粉，置超临界萃取器中，用液态二氧化碳为流体提取，得银杏叶提取物；(3)取上述提取物，加注射用水溶解，再加入附加剂混匀，调pH值至6.0～7.5，过滤，滤液再用微孔滤膜过滤，滤液无菌分装于灭菌西林瓶中，冷冻干燥，压塞，压盖，即得3.根据权利要求2所述的银杏叶粉针剂的制备方法，其特征在于步骤(1)中回流提取物减压回收尽乙醇后浓缩至密度为1.02～1.104.根据权利要求2所述的银杏叶粉针剂的制备方法，其特征在于步骤(3)中用碳酸氢钠溶液调pH值至6.0～7.55.根据权利要求2所述的银杏叶粉针剂的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述的附加剂为葡甲胺、亚硫酸氢钠和甘露醇6.根据权利要求2所述的银杏叶粉针剂的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述的微孔滤膜分别为0.65μm、0.22μm微孔滤膜

本发明涉及一种银杏叶粉针剂，同时本发明还涉及该银杏叶粉针剂的制备方法中风病是中老年人最常见的疾病之一，具有发病率高，致死率高，致残率高的特点我国近年统计表明脑卒中在死因排位中高居第二位，仅次于恶性肿瘤据国内流行病学调查结果表明，我国脑卒中发病率为120～180/10万人，患病人数约500～600万人每年死于脑卒中者约100万人，幸存者约3/4不同程度丧失劳动能力，重度致残者占40％以上，每年新发病约130～150万人，其中60万以上的病例为脑梗塞患者因此，如何提高脑血管病在恢复期的治愈率，改善患者的生存质量，已成为国内外医学研究的重要课题西医学治疗缺血性脑卒中的方法主要有以下增加脑血流量，包括颅内外动脉旁路搭桥术，能使卒中的死亡率和再发率减少20％由于缺血性脑卒中80％以上是由血栓或栓塞造成的，因此，链激酶和尿激酶等溶栓剂常作为脑栓塞的常规治疗，能改善病人的神经系统症状促进神经功能的恢复，并减少长期功能障碍的发生，但此类药物有极高的颅内出血并发症；血管扩张剂能扩张半球周围的正常血管床，但往往不能增加缺血区血的流量；抗血小板和抗凝治疗经证明是有临床疗效的方法，抗血小板药物临床主要有ASP、潘生丁、噻氯吡啶等，此类药物可显著降低脑卒中的复发率甘露醇、速尿、肾上腺糖皮质激素是脑卒中脱水疗法的主要措施之一，迅速使用脱水剂能减轻症状或拯救生命钙离子拮抗剂，阿片受体拮抗剂，血小板激活因子拮抗剂对缺血性脑损伤有保护治疗作用上述治疗对于急性期挽救病人的生命起到了积极的作用但西医往往重治疗，轻康复，忽略了病人恢复期功能的治疗，且从西医角度来看，目前对恢复期尚无积极有效的治疗方法，中医治疗本病强调标本兼治，结合中医的针灸、推拿、药浴等方法，对于降低脑卒中后的致死率，致残率、复发率起到了显著的作用目前，用于治疗脑卒中恢复期的中草药近百种，现代药学研究和临床研究均证实对该病有确切的疗效，且新药不断出现，但是随着我国人口老龄化问题的日趋严重，脑中风病人急剧上升，治疗脑中风恢复期的药物远远不能满足病人的需求本发明的另一个目的还在于提供上述银杏叶粉针剂的制备方法本发明提供的银杏叶粉针剂，该粉针剂可由下述方法制备获得取银杏叶，用40～80％乙醇回流提取，减压回收尽乙醇，浓缩，静置，去除上层不溶物，用等量醋酸乙酯提取并回收，残留物真空干燥，粉碎成细粉，将细粉置超临界萃取器中，用液态二氧化碳为流体提取，得银杏叶提取物，将银杏叶提取物加注射用水溶解，再加入附加剂混匀，调pH值至6.0～7.5，过滤，滤液再用微孔滤膜过滤，滤液无菌分装于灭菌西林瓶中，冷冻干燥，压塞，压盖，即得本发明提供了一种银杏叶粉针剂的制备方法，该方法包括下述顺序的步骤(1)取银杏叶，用40～80％乙醇回流提取，减压回收尽乙醇，浓缩，静置，去除上层不溶物，用等量醋酸乙酯提取并回收，残留物真空干燥，粉碎成细粉；(2)取上述细粉，置超临界萃取器中，用液态二氧化碳为流体提取，得银杏叶提取物；(3)取上述提取物，加注射用水溶解，再加入附加剂混匀，调pH值至6.0～7.5，过滤，滤液再用微孔滤膜过滤，滤液无菌分装于灭菌西林瓶中，冷冻干燥，压塞，压盖，即得在本发明的方法中，步骤(1)中回流提取物减压回收尽乙醇后浓缩至密度为1.02～1.10；步骤(3)中用碳酸氢钠溶液调pH值至6.0～7.5；步骤(3)中所述的附加剂为葡甲胺、亚硫酸氢钠和甘露醇；步骤(3)中所述的微孔滤膜分别为0.65μm、0.22μm微孔滤膜银杏在我国有漫长的药用、食用史，素有活化石之称据《食疗本草》记载，其可用于心悸怔忡，肺虚咳喘等症现代医学研究证明银杏叶中含有黄酮类化合物，萜类化合物等生物活性成分，这些成份具有相当强烈的抗氧化作用，能清除生物体内过剩的自由基，阻止体内脂质过氧化，提高机体的免疫力等其黄酮类成份，能扩冠，改善心、脑血液循环，降低血清胆固醇，松驰支气管近数十年来，国内外对银杏叶提取物(GBE)进行了较深入的研究，其中银杏内酯已被列入治疗心脑血管疾病的重要药物银杏内酯是从银杏叶中发现的具有特殊结构的二萜内酯和倍半萜内酯目前，已从银杏叶中分离出银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯C等，系当今医药界所公认的一种最有应用前景的特异有效的血小板激活因子受体的拮抗剂，其专一性高最新药理研究结果证明银杏萜内酯对缺血性损伤和中枢神经系统具有保护作用，有阻止血小板聚集和血栓形成的神奇功能，此外，还有抗过敏，抗休克、抗器官移植排斥反应等作用，是首选的治疗心脑血管疾病的天然药物本发明银杏叶粉针剂具有活血化瘀、通经活络的功效，对瘀血阻络引起的中风中经络之证，具有良好的治疗效果下面结合实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明银杏叶粉针剂iv能明显增加小鼠急性不完全性脑缺血后2h内的存活数，表明该药对小鼠急性不完全性脑缺血有保护作用，iv的ED50为1.90g/kg(95％可信限为1.43-2.53g/kg；ig的ED50为3.25g/kg(95％可信限为2.68-51.7g/kg)Iv后10min即开始起效，达峰时间20min左右，持续时间可达90min以上；而ig起效时间20-30min，达峰时间45min左右，持续时间可达120min以上同一剂量组iv的效应强于ig还能明显延长小鼠在缺氧状态下的存活时间，表明该能提高小鼠耐缺氧的能力银杏叶粉针剂iv给药对麻醉犬的脑血流量，脑血管阻力，血压，心率和心电均无明显影响银杏叶粉针剂对PAF诱导家兔体外血小板聚集有明显抑制作用对ADP诱导家兔体外血小板聚集抑制作用较弱该药iv对PAF诱导兔体内血小板聚集也有明显抑制作用；该药对血小板无明显影响iv时可降低兔红细胞压积和全血粘度，尤其是对高切变速率的全血粘度改善作用更明显，高剂量组对低、高切变速率时全血粘度均有改善作用iv可明显抑制大鼠和家兔动一静脉旁路血栓形成iv可明显延长小鼠凝血时间一般药理研究的试验家犬麻醉(戊巴比妥钠i.v30mg/kg)状态下，静脉滴注银杏叶粉针剂大、中、小三个剂量(2.7、0.9、0.3g/kg生药三剂量)，总体积10ml/kg，对给药5、10、15、30、60、90、120分钟测定的血压(SBP、DBP、BP)、呼吸频率、振幅、体温、心率、心电图(P、QRS、ST、T波间期、振幅)参数，均无明显变化银杏叶粉针剂大、中、小三个剂量组(9.0、4.5、1.5g/kg生药三剂量)，按0.1ml/10g体重小鼠腹腔注射，药后30分钟，对小鼠腹腔注射45mg/kg戊巴比妥钠，动物的睡眠时间与生理盐水对照组比较均无统计学差异(P＞0.05)；对小鼠腹腔注射25mg/kg戊巴比妥钠动物入睡个数大剂量组与对照组比较有统计学差异(P＜0.05)；对小鼠10分钟内自发活动次数，大、中剂量组与对照组比较P＜0.05综上所述银杏叶粉针剂上述剂量对犬血压、呼吸、体温、心电图无影响；高剂量与戊巴比妥钠有协同作用，能增加小鼠入睡个数；对小鼠自主活动有一定抑制作用动物急性毒性试验银杏叶粉针剂小鼠静脉注射的，最大给药量小鼠死亡率为30％，iv急性毒性试验无法测出LD50，小鼠iv最大耐受量为21.3g生药/kg，相当于的临床用药的128倍(临床拟用量为10g生药/60kg/日，即0.167g生药/kg)银杏叶粉针剂小鼠腹腔注射最大给药量小鼠死亡率为15％，ip给药无法LD50，经试验结果表明银杏叶粉针剂小鼠腹腔注射LD50大于53.4g生药/kg，相当于临床拟量的320倍动物长期毒性试验1、大白鼠长期毒性实验取Sprague-Dawley大鼠80只，试验分高(600mg提取物/kg)、中(190mg提取物/kg)、低(60mg提取物/kg)剂量组及5％葡萄糖注射液对照组，每组动物20只，雌雄各半腹腔注射，每天一次，每周给药6天，试验周期为13周各试验组留1/2动物以观察4周恢复期变化结果表明，大鼠的行为活动、皮毛色泽及粪便均属正常摄食量未发现明显的与药物作用有关的异常变化高、中、低剂量组动物的体重增长与对照组相比无显著差异主要的脏器重量及其系数与对照组比较未见显著性差异血液学和血液生化学实验表明，高、中、低剂量组大鼠血液所检测的各项指标与对照组比较未见明显由于药物所致的异常变化病理切片结果显示，个别主要脏器均有不同程度轻度改变，通过Ridit分析，非药物本身所引起的病理改变，肺脏的改变可能系病毒或细菌感染所致，在临床试验中应注意肝脏指标的变化据此推测，高中低剂量连续腹腔注射给予该药13周，大鼠未表现出明显的毒性反应在本试验条件下，该药连续ip给药13周，对大鼠的无毒剂量为600mg提取物/kg若人以60kg计，银杏注射液对大鼠的无毒剂量(600mg提取物/kg)约相当于人用剂量的120倍(人用剂量为300mg提取物/天/60kg人)2、狗长期毒性实验本试验观察该药连续静脉注射(iv)给药13周对Beagle犬所发生的各种反应，以评估该药的安全性Beagle犬24只，试验分药物高(300mg提取物/kg)、中(95mg提取物/kg)、低(30mg提取物/kg)组及空白对照组(5％葡萄糖注射液)每组动物6只，雌雄各半静脉注射，每日一次，每周6次，试验周期为13周各试验组准备2只动物观察4周恢复期变化结果表明，静脉注射该药13周后对犬的血常规、血清生化、尿常规和摄食量等均未发现明显的与药物作用有关的异常变化动物的活动状况在给药后一切正常与对照组相比，各给药组的犬体重及体重增长正常且在同周内无显著差异犬心电图各项指标正常组织切片检查表明，在所有受检脏器中均未见明显的病理改变在本试验条件下，银杏叶粉针剂iv给药13周对犬的无毒剂量为300mg提取物/kg，约相当于人用剂量的60倍(人用剂量为300mg提取物/天/60kg人)安全性试验银杏叶粉针剂对Beagle犬肢静脉血无溶血及红细胞凝集，对健康豚鼠和Beagle犬无过敏反应，对家兔肌肉注射未见注射部位肌肉组织有异常改变对家兔耳静脉滴注无明显血管刺激反应，对家兔无致热原反应经以上试验，结果表明该制剂是安全的