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专利名称
抗-cd100抗体和其使用方法
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发明者
E·S·史密斯, T·L·费希尔
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公开日
2012年5月16日
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申请日期
2010年5月7日
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优先权日
2009年5月8日
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申请人
瓦西尼斯公司
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文档编号
A61K39/395GK102458468SQ201080029914
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关键字
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权利要求
1.一种分离的结合分子，其特异性结合与选自2503或67的参比单克隆抗体相同的 CD100表位2.一种特异性结合CD100的分离的结合分子，所述结合分子竞争性抑制选自2503或 67的参比单克隆抗体与⑶100的特异性结合3.如权利要求1或2所述的结合分子，其特征在于，包括抗体或其抗原结合片段4.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其片段是单克隆抗体2503或675.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的重链可变区(VH)包含与SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10至少90%相同的氨基酸序列6.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的轻链可变区(VL)包含与SEQ ID N017或SEQ ID NO 18至少90%相同的氨基酸序列7.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的 VH包含除20个或更少保守性氨基酸取代外，与SEQ ID NO 9或SEQ ID N010相同的氨基酸序列8.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的 VL包含除20个或更少保守性氨基酸取代外，与SEQ ID NO 17或SEQ ID NO 18相同的氨基酸序列9.如权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其片段的VH 包括氨基酸序列SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 1010.如权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其片段的VL 包括氨基酸序列SEQ ID NO 17或SEQ ID NO 1811.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VH和VL包含分别与SEQ ID NO 9和SEQ ID NO 10，或分别与SEQ ID NO 17和SEQ ID NO 18至少90%相同的氨基酸序列12.—种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VH和VL包含除各自的20个或更少保守性氨基酸取代外，分别与SEQ ID NO 9和SEQ ID NO 10，或分别与SEQ ID N017和SEQ IDNO 18相同的氨基酸序列13.如权利要求11所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其片段的VH和VL包含分别与SEQ ID NO 9禾口 SEQ ID NO 10，或者分别与SEQ ID N017禾口 SEQ ID NO 18相同的氨基酸序列14.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VH包含Chothia-Kabat重链互补决定区_1 (VH-⑶Rl)氨基酸序列，该氨基酸序列除两个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID NO 6相同15.如权利要求14所述的抗体或其片段，其特征在于，所述VH-CDRl氨基酸序列是SEQ ID NO 616.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VH包含Kabat重链互补决定区_2 (VH-⑶R2)氨基酸序列，该氨基酸序列除4个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID N07相同17.如权利要求16所述的抗体或其片段，其特征在于，所述VH-CDR2氨基酸序列是SEQID NO 718.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VH包含Kabat重链互补决定区_3 (VH-⑶R3)氨基酸序列，该氨基酸序列除2个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID NO 8相同19.如权利要求18所述的抗体或其片段，其特征在于，所述VH-CDR3氨基酸序列是SEQ ID NO 820.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VL包含Kabat轻链互补决定区_1 (VL-⑶Rl)氨基酸序列，该氨基酸序列除4个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID N014相同21.如权利要求20所述的抗体或其片段，其特征在于，所述VL-CDRl氨基酸序列是SEQ ID NO 1422.—种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VL包含Kabat轻链互补决定区_2 (VL-CDR2)氨基酸序列，该氨基酸序列除2个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID NO 15相同23.如权利要求22所述的抗体或其片段，其特征在于，所述VL-CDR2氨基酸序列是SEQ ID NO 1524.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VL包含Kabat轻链互补决定区_3 (VL-CDR3)氨基酸序列，该氨基酸序列除2个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID NO 16相同25.如权利要求M所述的抗体或其片段，其特征在于，所述VL-CDR3氨基酸序列是SEQ ID NO 1626.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VH包含VH-CDRl、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序列，在一个或多个所述VH-CDR中，除4个或更少氨基酸取代外，它们分别包含SEQID NO 6、7和827.如权利要求26所述的分离的抗体，其特征在于，所述VH-⑶R1、VH-⑶R2和VH-⑶R3 氨基酸序列分别是SEQ ID NO 6、7和828.一种特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VL包含VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，在一个或多个所述VL-CDR中，除4个或更少氨基酸取代外，它们分别包含SEQID NO 14,15和1629.如权利要求28所述的分离的抗体，其特征在于，所述VL-⑶R1、VL-⑶R2和VL-⑶R3 氨基酸序列分别是SEQ ID NO 14,15和1630.如权利要求4、6、8、11至13中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，所述VH构架区具有5个或更少的氨基酸取代31.如权利要求5、7、9和10至13中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，所述VL 构架区具有5个或更少的氨基酸取代32.如权利要求3-31中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，其结合线性表位33.如权利要求3-31中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，其结合非线性构象表位34.如权利要求3-33中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，它具有多特异性35.如权利要求34所述的抗体或其片段，其特征在于，它具有双特异性36.如权利要求3-35中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，它是Fab片段37.如权利要求3-35中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，它是F(ab)2片段38.如权利要求3-35中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，它是Fv片段39.如权利要求3-35中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，它是单链抗体40.如权利要求3-35中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，它是多价的且包含至少两条重链和至少两条轻链41.如权利要求3-35、39和40中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，其包含选自人κ恒定区和人λ恒定区的轻链恒定区42.如权利要求3-35和39-41中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，其包含重链恒定区或其片段43.如权利要求42所述的抗体或其片段，其特征在于，所述重链恒定区或其片段是人 IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAU IgA2、IgE 或 IgD044.如权利要求3-43中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，其结合人和鼠 CDlOOo45.如权利要求3-44中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，其特异性结合CDlOO 多肽或其片段或者⑶100变体多肽的亲和力的特征是解离常数(Kd)不大于5X10-2M、10l、5x101、1(Γ9Μ、5χ1(Γ10Μ、IO^10M,5χ10_11Μ, 1(ΓηΜ、5χ1(Γ12Μ、5· 7χ1(Γ12Μ、8· 4χ1(Γ12Μ、1(Γ12Μ、 5叉10 ] 、10 ]1、5110-14]1、10-14]1、5110-1%或 1(Γ15Μ46.如权利要求45所述的抗体或其片段，其特征在于，所述CD100多肽或其片段或者 ⑶100变体多肽是人或鼠的47.如权利要求46所述的抗体或其片段，其特征在于，所述CD100多肽或其片段或者 ⑶100变体多肽是人的，且所述Kd约为hlO_9M至6x10—148.如权利要求46所述的抗体或其片段，其特征在于，所述CD100多肽或其片段或者 ⑶100变体多肽是鼠的，且所述KD约为IxlO-9M至MlO-^L49.如权利要求3-48中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，其抑制CDlOO与 ⑶100受体结合50.如权利要求49所述的抗体或其片段，其特征在于，所述CDlOO受体是丛蛋白Bi51.如权利要求3-50中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段是人源化、灵长化或嵌合的52.如权利要求51所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段是人源化的53.如权利要求3-52中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，其还包含与其融合的异源多肽54.如权利要求3-53中任一项所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段偶联于选自下组的药剂细胞毒剂、治疗剂、细胞生长抑制剂、生物毒素、前药、肽、蛋白质、 酶、病毒、脂质、生物反应修饰剂、药物、淋巴因子、异源抗体或其片段、可检测标记、聚乙二醇(PEG)和任何上述药剂中两种或多种的组合55.如权利要求M所述的抗体或其片段，其特征在于，所述细胞毒剂选自放射性核素、生物毒素、酶活性毒素或任何所述细胞毒剂中两种或多种的组合56.如权利要求M所述的抗体或其片段，其特征在于、所述可检测标记选自酶、荧光标记、化学发光标记、生物发光标记、放射性标记或任何所述可检测标记中两种或多种的组I=I ο57.一种组合物，其包含权利要求1-56中任一项所述的抗体或其片段和运载体58.如权利要求57所述的组合物，其特征在于，所述运载体选自盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油和其组合59.一种分离的多核苷酸，其包含编码抗体VH多肽的核酸，其中所述VH多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO 19或SEQ ID NO 20至少90%相同；且包含所述VH多肽的抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10060.如权利要求59所述的多核苷酸，其特征在于，优化编码所述VH多肽的核苷酸序列以提高表达而不改变所述VH多肽的氨基酸序列61.如权利要求60所述的多核苷酸，其特征在于，所述优化包括鉴定和除去剪接供体和剪接接受体位点62.如权利要求60所述的多核苷酸，其特征在于，所述优化包括根据表达所述多核苷酸的细胞优化密码子使用63.如权利要求59-62中任一项所述的多核苷酸，其特征在于，所述核酸包含含有SEQ ID NO 19或SEQ ID NO 20的核苷酸序列64.如权利要求63所述的多核苷酸，其特征在于，所述核酸包含由SEQIDN019或SEQ ID NO 20组成的核苷酸序列65.一种分离的多核苷酸，其包含编码抗体VL多肽的核酸，其中所述VL多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO 21或SEQ ID NO 22至少90%相同；且包含所述VL多肽的抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10066.如权利要求65所述的多核苷酸，其特征在于，优化编码所述VL多肽的核苷酸序列， 以提高表达而不改变所述VL多肽的氨基酸序列67.如权利要求66所述的多核苷酸，其特征在于，所述优化包括鉴定和除去剪接供体和剪接接受体位点68.如权利要求66所述的多核苷酸，其特征在于，所述优化包括根据表达所述多核苷酸的细胞优化密码子使用69.如权利要求65-68中任一项所述的多核苷酸，其特征在于，所述核酸包含含有SEQ ID NO 21或SEQ ID NO 22的核苷酸序列70.如权利要求69所述的多核苷酸，其特征在于，所述核酸包含由SEQIDN021或SEQ ID NO 22组成的核苷酸序列71.一种分离的多核苷酸，其包含编码抗体VH多肽的核酸，其中所述VH多肽的氨基酸序列除20个或更少的保守性氨基酸取代外，与SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10相同；且包含所述VH多肽的抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10072.—种分离的多核苷酸，其包含编码抗体VL多肽的核酸，其中所述VL多肽的氨基酸序列除20个或更少的保守性氨基酸取代外，与SEQ ID N017或SEQ ID N018相同；且包含所述VL多肽的抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10073.一种分离的多核苷酸，其包含编码VH-CDRl氨基酸序列的核酸，所述氨基酸序列除两个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID NO 6相同；其中包含所述VH-CDRl的抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10074.如权利要求73所述的多核苷酸或其片段，其特征在于，所述VH-CDRl氨基酸序列是 SEQ ID NO675.一种分离的多核苷酸，其包含编码VH-CDR2氨基酸序列的核酸，所述氨基酸序列除 4个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID N07相同；其中包含所述VH-CDR2的抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10076.如权利要求75所述的多核苷酸或其片段，其特征在于，所述VH-CDR2氨基酸序列是 SEQ ID NO 777.一种分离的多核苷酸，其包含编码VH-CDR3氨基酸序列的核酸，所述氨基酸序列除两个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID N08相同；其中包含所述VH-CDR3的抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10078.如权利要求77所述的多核苷酸或其片段，其特征在于，所述VH-CDR3氨基酸序列是 SEQ ID NO879.一种分离的多核苷酸，其包含编码VL-CDRl氨基酸序列的核酸，所述氨基酸序列除 4个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID NO 14相同；其中包含所述VL-CDRl的抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10080.如权利要求79所述的多核苷酸或其片段，其特征在于，所述VL-CDRl氨基酸序列是 SEQ ID NO 1481.一种分离的多核苷酸，其包含编码VL-CDR2氨基酸序列的核酸，所述氨基酸序列除 2个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID N015相同；其中包含所述VL-CDR2的抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10082.如权利要求81所述的多核苷酸或其片段，其特征在于，所述VL-CDR2氨基酸序列是 SEQ ID NO 15ο83.一种分离的多核苷酸，其包含编码VL-CDR3氨基酸序列的核酸，所述氨基酸序列除 2个或更少的氨基酸取代外，与SEQ ID Ν016相同；其中包含所述VL-CDR3的抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10084.如权利要求83所述的多核苷酸或其片段，其特征在于，所述VL-CDR3氨基酸序列是 SEQ ID NO 1685.一种分离的多核苷酸，其包含编码抗体VH多肽的核酸，其中所述VH多肽包含 VH-⑶Rl、VH-⑶R2和VH-⑶R3氨基酸序列，所述氨基酸序列分别含有SEQ ID NO 6、7和8 ； 其中抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10086.一种分离的多核苷酸，其包含编码抗体VL多肽的核酸，其中所述VL多肽包含 VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述氨基酸序列分别含有SEQ ID NO 14、15和 16 ；其中抗体或其抗原结合片段特异性结合CD10087.如权利要求59-64、71、73-78和85中任一项所述的多核苷酸，其特征在于，还包含编码融合于抗体VH多肽的信号肽的核酸88.如权利要求65-69、72、79-84和86中任一项所述的多核苷酸，其特征在于，还包含编码融合于抗体VL多肽的信号肽的核酸89.如权利要求59-64、71-78、85和87中任一项所述的多核苷酸，其特征在于，还包含编码融合于抗体VH多肽的重链恒定区CHl结构域的核酸90.如权利要求59-64、71-78、85、87和89中任一项所述的多核苷酸，其特征在于，还包含编码融合于抗体VH多肽的重链恒定区CH2结构域的核酸91.如权利要求59-64、71-78、85、87、89和90中任一项所述的多核苷酸，其特征在于， 还包含编码融合于所述VH多肽的重链恒定区CH3结构域的核酸92.如权利要求59-64、71-78、85、87和89-91中任一项所述的多核苷酸，其特征在于， 还包含编码融合于所述VH多肽的重链绞链区的核酸93.如权利要求91-92中任一项所述的多核苷酸，其特征在于，所述重链恒定区是人 IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAU IgA2、IgE 或 IgD094.如权利要求65-70、72、79-84、86和88中任一项所述的多核苷酸，其特征在于，还包含编码融合于所述VL多肽的轻链恒定区结构域的核酸95.如权利要求94所述的多核苷酸，其特征在于，所述轻链恒定区是人κ96.如权利要求59-95中任一项所述的多核苷酸，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合人和鼠CD10097.一种包含权利要求59-96中任一项所述多核苷酸的载体98.如权利要求97所述的载体，其特征在于，所述多核苷酸操作性连接于启动子99.一种包含权利要求97或98所述载体的宿主细胞100.一种产生特异性结合CD100的抗体或其片段的方法，其包括培养权利要求99所述的宿主细胞，和回收所述抗体或其片段101.一种通过权利要求100所述方法产生的分离的多肽102.一种分离的多肽，其中所述多肽由权利要求59-96中任一项所述的多核苷酸编码103.一种分离的抗体或其片段，其包含权利要求101或102所述的多肽104.一种组合物，其包含分离的VH编码多核苷酸和分离的VL编码多核苷酸，其特征在于，所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸包含编码分别与SEQ ID NO 9和SEQ ID NO 17、或者分别与SEQ ID NO 10和SEQID NO 18至少90%相同的氨基酸序列的核酸；并且其中所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其片段特异性结合CD100105.如权利要求104所述的组合物，其特征在于，所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸包含编码分别由SEQ ID NO 9和SEQ ID NO 17，或者分别由SEQ ID NO 10禾口 SEQ ID NO 18组成的氨基酸序列的核酸106.一种组合物，其包含分离的VH编码多核苷酸和分离的VL编码多核苷酸，其特征在于，所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸包含编码除少于20个保守性氨基酸取代夕卜，分别与 SEQ ID NO 9 和 SEQ ID NO 17、或者分别与 SEQ ID NO 10 和 SEQ ID NO 18 相同的氨基酸序列的核酸；并且其中所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其片段特异性结合CDlOOo107.如权利要求106所述的组合物，其特征在于，所述VH和VL氨基酸序列分别是SEQ ID NO 9 和 SEQ ID NO 17，或者分别是 SEQ ID NO 10 和 SEQ ID NO 18108.一种包含分离的VH编码多核苷酸和分离的VL编码多核苷酸的组合物，其特征在于，所述VH编码多核苷酸编码含有VH-⑶Rl、VH-⑶R2和VH-⑶R3氨基酸序列的VH多肽，这些氨基酸序列分别由SEQ ID N06、7和8组成；其中所述VL编码多核苷酸编码包含 VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的VL多肽，这些氨基酸序列分别由SEQ ID NO 14、 15和16组成；且其中所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其片段特异性结合CD100109.如权利要求104-108中任一项所述的组合物，其特征在于，所述VH编码多核苷酸还包含编码融合于所述抗体VH多肽的信号肽的核酸110.如权利要求104-108中任一项所述的组合物，其特征在于，所述VL编码多核苷酸还包含编码融合于所述抗体VL多肽的信号肽的核酸111.如权利要求104-110中任一项所述的组合物，其特征在于，所述VH编码多核苷酸还包含编码融合于所述VH多肽的重链恒定区CHl结构域的核酸112.如权利要求104-111中任一项所述的组合物，其特征在于，所述VH编码多核苷酸还包含编码融合于所述VH多肽的重链恒定区CH2结构域的核酸113.如权利要求104-112中任一项所述的组合物，其特征在于，所述VH编码多核苷酸还包含编码融合于所述VH多肽的重链恒定区CH3结构域的核酸114.如权利要求104-113中任一项所述的组合物，其特征在于，所述VH编码多核苷酸还包含编码融合于所述VH多肽的重链绞链区的核酸115.如权利要求113或114所述的组合物，其特征在于，所述重链恒定区是人IgGl、 IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAU IgA2、IgE 或 IgD0116.如权利要求104-115中任一项所述的组合物，其特征在于，所述VL编码多核苷酸还包含编码融合于所述VL多肽的轻链恒定区结构域的核酸117.如权利要求116所述的组合物，其特征在于，所述轻链恒定区是人κ118.如权利要求104-117中任一项所述的组合物，其特征在于，所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸位于单一载体上119.如权利要求104-117中任一项所述的组合物，其特征在于，所述VH编码多核苷酸位于第一载体而所述VL编码多核苷酸位于第二载体，所述第二载体与所述第一载体不同120.如权利要求118或119所述的组合物，其特征在于，所述VH编码多核苷酸操作性连接于第一启动子而所述VL编码多核苷酸操作性连接于第二启动子121.如权利要求120所述的组合物，其特征在于，所述第一和第二启动子是同一个启动子的拷贝122.如权利要求120所述的组合物，其特征在于，所述第一和第二启动子不同123.如权利要求118-122中任一项所述的组合物，其特征在于，所述第一载体和所述第二载体包含于单一宿主细胞中124.如权利要求118-122中任一项所述的组合物，其特征在于，所述第一载体和所述第二载体包含于单独的宿主细胞中125.如权利要求104-124中任一项所述的组合物，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合人和鼠CD100126.如权利要求118所述的载体127.如权利要求119所述的第一载体128.如权利要求119所述的第二载体129.如权利要求1 所述的载体，其特征在于，所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸框内融合，由操作性相连的单一启动子共同转录，并共同翻译成单链抗体或其抗原结合片段130.如权利要求1 所述的载体，其特征在于，所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸由操作性相连的单一启动子共同转录，但单独翻译131.如权利要求1 所述的载体，其特征在于，所述载体还包含位于所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸之间的IRES序列132.如权利要求1 所述的载体，其特征在于，所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸是单独转录的，各自操作性连接于单独的启动子133.—种产生特异性结合CD100的抗体或其片段的方法，其包括培养权利要求121所述的宿主细胞，和回收所述抗体或其片段134.一种产生特异性结合CD100的抗体或其片段的方法，其包括共同培养权利要求 123所述的单独的宿主细胞，和回收所述抗体或其片段135.—种产生特异性结合CD100的抗体或其片段的方法，其包括单独培养权利要求 124所述的单独的宿主细胞、合并所述VH和VL编码多肽和回收所述抗体或其片段136.—种宿主细胞，其包含权利要求1 或129-132中任一项所述的载体、权利要求 127所述的第一载体或权利要求1 所述的第二载体137.—种产生特异性结合CD100的抗体或其片段的方法，其包括培养权利要求136所述的宿主细胞，和回收所述抗体或其片段138.—种由权利要求137所述方法产生的特异性结合CD100的抗体或其片段139.—种在动物内中和CD100的方法，包括将包含以下成分的组合物给予所述动物a)权利要求3-56、103和138中任一项所述的分离的抗体或其片段；和b)药学上可接受的运载体140.一种在需要治疗的动物中治疗自身免疫病症或炎性疾病的方法，所述方法包括给予所述动物一种组合物，该组合物包含a)权利要求3-56、103和138中任一项所述的分离的抗体或其片段；和b)药学上可接受的运载体141.如权利要求140所述的方法，其特征在于，所述自身免疫病或所述炎性疾病是多发性硬化142.如权利要求140所述的方法，其特征在于，所述自身免疫病或所述炎性疾病是关节炎143.如权利要求142所述的方法，其特征在于，所述自身免疫病或所述炎性疾病是类风湿性关节炎144.一种在需要治疗的动物中治疗癌症的方法，所述方法包括给予所述动物一种组合物，该组合物包含a)权利要求3-56、103和138中任一项所述的分离的抗体或其片段；和b)药学上可接受的运载体145.—种在需要治疗癌症的动物中抑制血管新生的方法，所述方法包括给予所述动物一种组合物，该组合物包含a)权利要求3-56、103和138中任一项所述的分离的抗体或其片段；和b)药学上可接受的运载体146.如权利要求139-145中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗体或其片段抑制 ⑶100与⑶100受体的结合147.如权利要求146所述的方法，其特征在于，所述⑶100受体是丛蛋白-Bi148.如权利要求139-147中任一项所述的方法，其特征在于，所述动物是哺乳动物149.如权利要求148所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物是人
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技术领域
本发明涉及CD100中和抗体，如人源化单克隆抗体，所述抗体的使用方法，和治疗 CD100表达细胞相关病症和疾病的方法发明概述提供治疗CD100相关疾病的组合物和方法，包括某些类型的自身免疫病、炎性疾病、癌症和侵袭性血管新生具体说，已经开发了抗-CD100单克隆抗体来中和CD100小鼠MAb67在体外显示出阻断CD100活性的能力，并在小鼠模型中减轻实验性变应性脑脊髓炎(EAE)、胶原诱导性关节炎(CIA)和癌症的临床征象的严重性MAb 2503是人源化的MAb 67，已证明它与人和鼠⑶100的亲和力提高，并且与MAb 67具有相似的⑶100阻断活性在一个实施方式中，本发明提供分离的结合分子，其与选自2503、67或76的参比单克隆抗体相同的CD100表位特异性结合在另一实施方式中，本发明提供特异性结合CD100的分离的结合分子，所述结合分子竞争性抑制选自2503、67或76的参比单克隆抗体特异性结合CD100在另一实施方式中，本发明提供特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其片段是单克隆抗体2503、67或76在某些实施方式中，本发明所述特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)，该重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID N09、SEQ ID NO 10或SEQ ID NO 25至少90%相同在本发明的另一方面，所述抗体或其片段的VH包含除20个或更少保守性氨基酸取代外，与SEQ IDNO 9、SEQ ID NO 10或SEQ ID NO 25相同的氨基酸序列在本发明的另一方面，所述抗体或其片段的VH包含氨基酸序列SEQ ID N09、SEQ ID NO 10或SEQ ID N025，或由其组成在某些实施方式中，本发明所述特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区的氨基酸序列与SEQ ID N017、SEQ ID NO 18或 SEQ ID NO 至少90%相同在本发明的另一方面，所述抗体或其片段的VL包含除20个或更少保守性氨基酸取代外，与SEQ IDNO 17,SEQ ID N018或SEQ ID NO 相同的氨基酸序列在本发明的另一方面，所述抗体或其片段的VL包含氨基酸序列SEQ ID NO 17,SEQ12ID NO 18 或 SEQ ID N029，或由其组成在另一实施方式中，本发明提供特异性结合CDlOO的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VH包含以下CDR中至少一个除2个或更少氨基酸取代夕卜，与SEQ ID NO 6相同的Chothia-Kabat重链互补决定区_1 (VH-CDRl)氨基酸序列；除 4个或更少氨基酸取代外，与SEQ ID NO 7相同的Kabat重链互补决定区_2 (VH-⑶R2)氨基酸序列；或者除2个或更少氨基酸取代外，与SEQ ID NO 8相同的Kabat重链互补决定区-3(VH-raR;3)氨基酸序列在另一实施方式中，本发明提供特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VL包含以下CDR中至少一个除4个或更少氨基酸取代外，与 SEQ ID NO 14相同的Kabat轻链互补决定区_1 (VL-⑶Rl)氨基酸序列；除2个或更少氨基酸取代外，与SEQ ID NO 15相同的Kabat轻链互补决定区_2 (VL-OTM)氨基酸序列；或者除2个或更少氨基酸取代外，与SEQ ID NO 16相同的Kabat轻链互补决定区-3 (VL-⑶R3) 氨基酸序列在另一方面，本发明抗体或其片段的VH包含VH-⑶R1、VH_⑶R2和VH-⑶R3氨基酸序列，在一个或多个所述VH-CDR中，除2个或更少氨基酸取代外，它们分别包含SEQ ID NO 6、7和8另一方面，所述VH-CDRl、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序列分别是SEQ ID NO 6、7 禾口 8在另一方面，本发明抗体或其片段的VL包含VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，在一个或多个所述VL-CDR中，除2个或更少保守性氨基酸取代外，它们分别包含SEQ ID NO 14,15和16另一方面，所述VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别是SEQ ID NO 14,15 和 16在另一实施方式中，本发明提供特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VH包含以下CDR中至少一个除2个或更少氨基酸取代外，与 SEQ ID NO 26相同的Kabat重链互补决定区_1 (VH-⑶Rl)氨基酸序列；除4个或更少氨基酸取代外，与SEQ ID NO 27相同的Kabat重链互补决定区_2 (VH-⑶R2)氨基酸序列；或者除2个或更少氨基酸取代外，与SEQ ID NO 28相同的Kabat重链互补决定区_3 (VH-⑶R3) 氨基酸序列在另一实施方式中，本发明提供特异性结合CD100的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段的VL包含以下CDR中至少一个除4个或更少氨基酸取代外，与 SEQ ID NO 30相同的Kabat轻链互补决定区_1 (VL-⑶Rl)氨基酸序列；除2个或更少氨基酸取代外，与SEQ ID NO 31相同的Kabat轻链互补决定区_2 (VL-OTM)氨基酸序列；或者除2个或更少氨基酸取代外，与SEQ ID NO 32相同的Kabat轻链互补决定区_3 (VL-⑶R3) 氨基酸序列在另一方面，本发明抗体或其片段的VH包含VH-⑶R1、VH_⑶R2和VH-⑶R3氨基酸序列，在一个或多个所述VH-CDR中，除4个或更少氨基酸取代外，它们分别包含SEQ ID NO 26、27和28另一方面，所述VH-CDRl、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序列分别是SEQ ID NO 26,27 和 28在另一方面，本发明抗体或其片段的VL包含VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，在一个或多个所述VL-CDR中，除4个或更少氨基酸取代外，它们分别包含SEQ ID NO30、31和32另一方面，所述VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别是SEQ ID NO 30,31 和 32在另一方面，本发明抗体或其片段结合人和鼠CD100在另一方面，本发明抗体或其片段特异性结合CD100多肽或其片段或者CD100变体多肽的亲和力特征是解离常数(Kd) 不大于 5Χ1(Τ2Μ、1(Τ2Μ、5Χ1(Γ3Μ、1(Γ3Μ、5Χ1(Γ4Μ、1(Γ4Μ、5Χ1(Γ5Μ、1(Γ5Μ、5Χ1(Γ6Μ、1(Γ6Μ、5Χ1(ΓΜ、 10_7M,5x10_8MU0_8M,5X10_9MU0_9M,5X10_10MU0_1°M,5X10_11MU0_11M,5X10_12M,5. 7Χ1(Γ12Μ、 8. 4χ1(Γ12Μ、10 Μ、5Χ10 Μ、10 Μ、5Χ1(Γ14Μ、1(ΓμΜ、5Χ1(Γ15Μ 或 10 Μ在某些方面，所述 CD100多肽或其片段或者CD100变体多肽是人或鼠的在其它方面，CD100多肽或其片段或者⑶100变体多肽是人的，所述Kd为约切10_1至6x10—^在另一方面，⑶100多肽或其片段或者⑶100变体多肽是鼠的，所述Kd为约1x10_9M至在另一方面，本发明抗体或其片段是人源化的、灵长化的或嵌合的在另一实施方式中，本发明提供包含本发明抗体或其片段以及运载体的组合物在另一实施方式中，本发明提供一种分离的多核苷酸，其包含编码本发明抗体VH 或VL多肽的核酸在另一方面，本发明多核苷酸包含编码本发明抗体或其片段的核酸或者由其组成另一方面，本发明提供包含本发明多核苷酸的载体在另一方面，本发明提供包含本发明载体的宿主细胞在另一方面，本发明提供一种产生本发明抗体的方法在另一实施方式中，本发明提供一种在需要治疗的动物中治疗自身免疫病症或炎性疾病的方法，所述方法包括给予所述动物一种组合物，该组合物包含本发明的分离的抗体或其片段和药学上可接受的运载体在其它实施方式中，所述自身免疫病或炎性疾病是多发性硬化或关节炎在另一实施方式中，本发明提供一种在需要治疗的动物中治疗癌症的方法，所述方法包括给予所述动物一种组合物，该组合物包含本发明的分离的抗体或其片段和药学上可接受的运载体在另一实施方式中，本发明提供一种在需要治疗癌症的动物中抑制血管新生的方法，所述方法包括给予所述动物一种组合物，该组合物包含本发明的分离的抗体或其片段和药学上可接受的运载体另一方面，本发明抗体或其片段抑制⑶100与⑶100受体的结合在本发明的另一方面，所述⑶100受体是丛蛋白-Bi附图简要说明
专利名称：抗-cd100抗体和其使用方法图1.⑶100阻断实验图示。⑶100-组氨酸显示与表达丛蛋白Bl的稳定细胞系 (四3/丛蛋白)细胞表面上丛蛋白Bl的结合。用生物素偶联的抗-组氨酸标签特异性单克隆抗体和链霉亲和素-APC检测结合于丛蛋白Bl的CD100-组氨酸。经流式细胞术检测，能够阻断⑶100-组氨酸与丛蛋白Bl结合的抗-⑶IOOMAb产生的与四3/丛蛋白细胞相关的荧光较低。图2.显示在图1所示的⑶100阻断实验中检测兔抗-组氨酸+链霉亲和素-APC (Rb 抗-组氨酸 +sAPC)、小鼠 CD100 (只有 muCDIOO)、小鼠 CD100+0. 625 μ g/ml MAb (MAb 67、MAb 76 禾口 mlgG 同种型)和小鼠 CD100+0. 156 μ g/ml MAb (MAb 67、MAb 76 禾口 mlgG同种型)的流式细胞分析结果。单克隆抗体67和76阻断小鼠CD100与丛蛋白Bl受体的结合。图3. MAb 67 (67-2)和76 (76-1)的吸光度比同种型对照增加说明，单克隆抗体67 和76阻断小鼠⑶100介导的四3/丛蛋白B细胞从纤连蛋白包被平板上解离。图4.临床评分降低说明，与小鼠IgG对照的治疗相比，在SJL小鼠中用30mg/kg 抗-CDlOOMAb 76 (IX/周或2X/周)或MAb 67 (IX/周或2X/周)治疗能减轻复发缓解型 EAE(4A)。通过各个MAb治疗的小组平均分(GMS)的降低百分数在第21天和研究结束之间的比较，进一步说明该结果GB)。图5.临床评分降低说明，与小鼠IgG对照的治疗相比，在SJL小鼠中用30mg/kg 抗-⑶IOOMAb 76 (IX/周)或MAb 67 (IX/周)治疗能减轻复发缓解型EAE (5A)。通过两个 MAb治疗的小组平均分(GMS)的降低百分数在第18天和研究结束之间，，进一步说明该结果 (5B)。图6.临床评分降低说明，与小鼠IgG对照的治疗相比，在SJL小鼠中从免疫后第 7天开始用30mg/kg抗-CDlOOMAb 67 (IX/周)治疗能减轻复发缓解型EAE。图7. ELISA结果显示由于MAb 2503、MAb 67或IgG对照的竞争性结合，生物素化的67与人CD100(7A)或小鼠CD100(7B)结合的阻断百分数(％ )。图8.显示在图1所示的⑶100阻断实验中检测的链霉亲和素-APC(只有sAPC)、 人 CD100 (huCDIOO)、狨 CD100 (marmCDIOO)、小鼠 CD100 (muCDIOO)、1. 0 μ g 同种型和 1. 0 μ g MAb (67或2503)的流式细胞分析结果。MAb 67和MAb2503阻断人CD100 (8A)、狨(8B)或小鼠(8C)⑶100与丛蛋白Bl受体的结合。图9.显示由于MAb 67、MAb 2503和IgG对照中和⑶100，⑶100造成吸光度降低被阻断。抗-CD100 MAb 67和MAb 2503阻断人CD100 (9A)和狨CD100 (9B)介导的四3/丛蛋白细胞从纤连蛋白包被平板上解离。图10.显示将50，000个CD6结肠肿瘤细胞注射入小鼠腿部肌肉后，野生型Balb/ c小鼠和⑶100-/-小鼠的肿瘤体积变化(mm3)。图11.显示将50，000个CD6肿瘤细胞注射入小鼠腿部肌肉后，用ImgMAb 67或 Img对照小鼠IgG治疗的野生型Balb/c小鼠和⑶100-/-小鼠(“K0")的平均腿体积变化(mm3)。图12.胶原诱导型关节炎(CIA)总体治疗方案的示意图。图13.显示在600 μ g MAb 67治疗组中，CIA模型中关节炎疾病发展减缓。600 μ g MAb 67治疗小鼠的关节炎指数(Al)与600 μ g阴性对照(IgGl)和600 μ g阳性对照依那西普(Enbrel )治疗小鼠的AI在第20天开始治疗时的比较(13A)。在第20天或AI彡3时开始治疗时，比较MAb 67治疗与阴性对照(IgGl)和阳性对照依那西普(Embrel )治疗的关节炎指数(Al)结果(13B)。图14.用铝(氢氧化铝/氢氧化镁)沉淀的(4-羟基-3-硝基苯基)乙酰基偶联的鸡Y球蛋白(“NP-CGG")对Balb/c小鼠进行初次免疫(14A)和二次免疫(14B)后， 600 μ g MAb 67治疗降低脾脏(SP)和淋巴结(LN)中生发中心(GC)B细胞(“B220+CD38 低PNA+〃 )的数量。也显示了使用或不用NP-CGG免疫的⑶100-/-小鼠和Balb/c小鼠的结果。图15.显示将50，000个CD6结肠肿瘤细胞注射入小鼠腿部肌肉后，野生型Balb/ c小鼠的肿瘤体积变化(mm3)。显示从第1天开始每周注射Img MAb 67的小鼠与注射IgG15对照的小鼠相比的结果。该研究进行至肿瘤生长延迟结束。图16.显示将50，000个BCA34成纤维细胞肿瘤细胞皮下注射到小鼠腹部区域后， 野生型BalbA^j、鼠和CDlOO-/-小鼠(〃 SEMA4D-/-")的肿瘤体积变化(mm3) (16A)。显示将50，000个BCA34成纤维细胞肿瘤细胞注射入小鼠腿部肌肉后，用Img MAb 67或Img 对照小鼠IgG治疗的野生型Balb/c小鼠的平均大腿体积变化(mm3) (16B)。图17.显示将50，000个EMT6小鼠乳腺癌肿瘤细胞注射入小鼠腿部肌肉后，野生型 BalbAHnI^PCD 100-/-小鼠(“SEMA4D-/-")的肿瘤体积变化(mm3)。图18.显示在无胸腺裸小鼠中，向小鼠的胁部肌肉内皮下注射两个HN12头颈肿瘤后的肿瘤体积变化(mm3)。显示从移植后第1天开始每周注射ImgMAb 2503的小鼠与注射 IgG4对照的小鼠相比的结果。图19.显示在无胸腺裸小鼠中，向小鼠的腿部肌肉内皮下注射两个HN6HIFla mODD头颈肿瘤后的肿瘤体积变化(mm3)。显示从移植后第1天开始每周注射Img MAb 2503 的小鼠与注射IgG4对照的小鼠相比的结果(19A)。来自IgG4对照和MAb 2503治疗的小鼠的代表性肿瘤照片(19B)。图20.大鼠中进行的MAb2503单次静脉内注射饱和分析的饱和百分数结果。通过静脉内单次注射将 0、0. 01,0. 1,1. OUO 和 100mg/kg 剂量 MAb 2503 给予 Sprague-Dawley 大鼠。对雄性(20A)和雌性(20B)大鼠在不同时间点的裂解全血进行基于流式细胞术的饱和实验，以确定细胞靶点(SEMA4D)被MAb 2503饱和的百分数。图21.猕猴中进行的MAb2503单次静脉内注射饱和分析的饱和百分数结果。通过单次静脉内注射将0、0.01、0. 1、1.0、10和100mg/kg剂量的MAb 2503给予猕猴。在对不同时间点的裂解全血进行基于流式细胞术的饱和实验，以确定细胞靶点(SEMA4D)被MAb 2503饱和的百分数(雄性和雌性数据合并)。发明详述I.定义需要注意，术语“一个”或“一种”物质指一种或多种该物质；例如，“一种抗-⑶100 抗体”应理解为代表一种或多种抗-⑶100抗体。例如，术语“一个”(或“一种”)、“一个或多个”和“至少一个”在本文中可以互换使用。本文所用术语“肿瘤”是指无论恶性或良性的所有成瘤性细胞生长和增殖，以及所有的癌和癌前的细胞和组织。“侵袭性血管新生”指支持病理状况，包括恶性和非恶性肿瘤的血管形成以及黄斑变性中新血管的异常形成。术语“癌症”和“癌”是用于描述哺乳动物的生理病症，其典型特征是细胞生长失控。癌症的例子包括但不限于癌、淋巴瘤和白血病。本文所用术语“多肽”包括单数形式和复数形式，涵盖酰胺键(也称肽键)线性连接的单体(氨基酸)所组成的分子。术语“多肽”指两个或多个氨基酸的任何一条链或多条链，而非具体长度的产物。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或其它任何用于指两个或多个氨基酸的一条或多条链的术语均包含于“多肽”的定义内，术语“多肽”可与这些术语替代或互换使用。术语“多肽”还指多肽表达后修饰的产物，这些修饰包括但不限于糖基化，乙酰基化，磷酸化，酰胺化，通过已知保护/封闭基团衍生化，蛋白酶切割或非天然氨基酸修饰。多肽可能由天然生物来源衍生或由重组技术产生，但不一定由标明的核酸序列翻译而来。可以任何方式产生多肽，包括化学合成。本发明多肽的大小可以是约3个或更多个、5个或更多个、10个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、50个或更多个、75个或更多个、100个或更多个、200个或更多个、 500个或更多个、1，000个或更多个或者2，000个或更多个氨基酸。多肽可具有确定的三维结构，但它们不一定具有这种结构。具有确定三维结构的多肽称为折叠多肽，不具有确定的三维结构、但可采用大量不同构象的多肽称为非折叠多肽。本文所用术语“糖蛋白”指偶联于至少一个糖部分的蛋白质，所述糖部分通过某些氨基酸残基，如丝氨酸残基或天冬酰胺残基的含氧或含氮侧链连接于蛋白质。“分离的”多肽或其片段、变体或衍生物指不在其天然环境中的多肽。不要求特定的纯化水平。例如，可从其自然或天然环境中取出分离多肽。根据本发明目的，在宿主细胞中表达的重组产生的多肽和蛋白质被认为是分离的，通过任何合适技术分离、分级、部分或基本上纯化的天然或重组多肽也是如此。本发明多肽也包括上述多肽的片段、衍生物、类似物或变体，及其任何组合。提到本发明抗-CD100抗体或抗体多肽时，术语“片段”、“变体”、“衍生物”和“类似物”包括保持相应的本发明抗体或本发明抗体多肽的至少一部分抗原结合特性的任何多肽。除本文其它部分讨论的具体抗体片段外，本发明多肽的片段还包括蛋白酶水解片段，以及缺失片段。本发明抗-CD100抗体和抗体多肽的变体包括上述片段，以及具有因氨基酸取代、缺失或插入而改变氨基酸序列的多肽。变体可以是天然产生的或非天然产生的。可使用本领域所知的诱变技术产生非天然变体。变体多肽可包含保守的或非保守的氨基酸取代、缺失或添加。多肽变体本文中也称作“多肽类似物”。本文所用抗-CD100抗体或抗体多肽的“衍生物”指具有由官能性侧链基团反应化学衍生的一个或多个残基的对象多肽。“衍生物”还包括那些含有一个或多个20种标准氨基酸的天然氨基酸衍生物的肽。例如，4-羟基脯氨酸可取代脯氨酸；5-羟基赖氨酸可取代赖氨酸；3-甲基组氨酸可取代组氨酸；高丝氨酸可取代丝氨酸； 鸟氨酸可取代赖氨酸。本发明抗-CD100抗体和抗体多肽的衍生物可包括经改变具有本发明参比抗体或抗体多肽上不存在的额外特征的多肽。术语“多核苷酸”包括单个核酸和多个核酸，指分离的核酸分子或构建物，例如信使RNA(mRNA)或质粒DNA (pDNA)。多核苷酸可包含常规磷酸二酯键或非常规键(如酰胺键， 如肽核酸(PNA)中的酰胺键)。术语“核酸”指多核苷酸中存在的任何一种或多种核酸区段，如DNA或RNA片段。“分离的”核酸或多核苷酸指从其天然环境中取出的核酸分子，DNA 或RNA。例如，根据本发明目的，包含在载体中的编码抗-CD100结合分子，如抗体或其抗原结合片段的重组多核苷酸被认为是分离的。分离的多核苷酸的其它例子包括保持于异源宿主细胞的重组多核苷酸或纯化(部分或基本上纯化)在溶液中的多核苷酸。分离的RNA分子包括本发明多核苷酸的体内或体外RNA转录物。根据本发明，分离的多核苷酸或核酸还包括合成产生的此类分子。此外，多核苷酸或核酸可以是或可包括调控元件，如启动子、核糖体结合位点或转录终止子。本文所用术语“编码区”指由翻译成氨基酸的密码子组成的核酸部分。虽然“终止密码子”(TAG、TGA或TAA)不翻译成氨基酸，但它可被认为是编码区的一部分，而任何侧接序列，如启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子等均不是编码区的一部分。本发明的两个或多个编码区可安置在同一多核苷酸构建物中，例如在同一载体上，或者在单独的多核苷酸构建物中，例如在单独(不同)载体上。而且，任何载体可包含单个编码区，或者可包含两个或多个编码区，例如，单一载体可单独编码免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区。此外，本发明的载体、多核苷酸或核酸可编码与抗-CD100抗体或其片段、变体或衍生物的编码核酸融合或不融合的异源编码区。异源编码区包括但不限于专用的元件或基序，如分泌信号肽或异源功能结构域。在某些实施方式中，所述多核苷酸或核酸是DNA。当指DNA时，包含多肽编码核酸的多核苷酸通常包含启动子和/或其它转录或翻译控制元件，这些元件与一个或多个编码区可操作地连接。可操作地连接指，当基因产物如多肽的编码区与一个或多个调控序列以此方式连接时，将使该基因产物的表达受到该调控序列的影响或控制。如果启动子功能的诱导使编码所需基因产物的mRNA转录，且如果两个DNA片段间连接的属性不干扰表达调控序列指导基因产物表达或不干扰转录DNA模板的能力，则两个DNA片段(如多肽编码区及其相连的启动子)“可操作地连接”。因此，如果启动子能够影响核酸的转录，则启动子区域与多肽编码核酸可操作地连接。启动子可以是仅在预先确定的细胞中指导DNA实质转录的细胞特异性启动子。启动子以外的其它转录控制元件如增强子、操纵子、阻抑物和转录终止信号，可与多核苷酸可操作地连接以指导细胞特异性转录。本文公开了合适的启动子和其它转录控制区。许多转录控制区是本领域技术人员已知的。它们包括但不限于在脊椎动物细胞中发挥作用的转录控制区，例如但不限于，来自巨细胞病毒(立即早期启动子，与内含子-A 联用)、猿病毒40 (早期启动子)和逆转录病毒(如劳氏肉瘤病毒)的启动子和增强子区段。其它转录控制区包括衍生自脊椎动物基因，例如肌动蛋白、热激蛋白、牛生长激素和兔 β-珠蛋白的那些，以及能够在真核细胞中控制基因表达的其它序列。其它合适的转录控制区包括组织特异性启动子和增强子，以及淋巴因子诱导型启动子(如干扰素或白介素诱导的启动子)。类似地，本领域普通技术人员了解各种翻译控制元件。它们包括但不限于核糖体结合位点、翻译起始和终止密码子以及衍生自小核糖核酸病毒的元件(特别是内部核糖体进入位点或IRES，也称为CITE序列)。在其它实施方式中，本发明多核苷酸是RNA，例如，信使RNA(mRNA)形式。本发明的多核苷酸和核酸编码区可与编码指导本发明多核苷酸编码多肽分泌的分泌或信号肽的其它编码区联合。根据信号假说，哺乳动物细胞分泌的蛋白质具有信号肽或分泌前导序列，一旦生长的蛋白质链向粗面内质网外的输出过程启动，就将这些序列从成熟蛋白质上切掉。本领域普通技术人员了解，脊椎动物细胞分泌的多肽通常具有融合于所述多肽N末端的信号肽，它们从完整或“全长”多肽上切掉后产生分泌或“成熟”形式的多肽。在某些实施方式中，使用天然信号肽，例如免疫球蛋白重链或轻链信号肽，或者使用仍然能够指导与其操作性相连的多肽分泌的该序列的功能衍生物。或者，可采用异源哺乳动物信号肽或其功能衍生物。例如，野生型前导序列可以用人组织纤溶酶原激活物(TPA)或小鼠葡糖醛酸糖苷酶的前导序列代替。广义来说，本发明"结合分子"或"抗原结合分子"指特异性结合抗原决定簇的分子。在一个实施方式中，所述结合分子特异性结合CD100，如大约150kDa的跨膜CD100多肽或大约120kDa的可溶性⑶100多肽(通常称为s⑶100)。在另一实施方式中，本发明结合分子是抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方式中，本发明结合分子包括抗体分子的至少一个重链或轻链CDR。在另一个实施方式中，本发明结合分子包括来自一种或多种抗体分子的至少两个CDR。在另一个实施方式中，本发明结合分子包括来自一种或多种抗体分子的至少三个CDR。在另一个实施方式中，本发明结合分子包括来自一种或多种抗体分子的至少四个CDR。在另一个实施方式中，本发明结合分子包括来自一种或多种抗体分子的至少五个CDR。在另一个实施方式中，本发明结合分子包括来自一种或多种抗体分子的至少六个 CDR。本发明涉及某些抗-CD100抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物。除非特别提到完整大小的抗体，如天然产生的抗体，术语“抗-⑶100抗体”包括完整大小的抗体以及这种抗体的抗原结合片段、变体、类似物或衍生物，例如天然产生的抗体或免疫球蛋白分子，或以类似于抗体分子的方式结合抗原的工程改造的抗体分子或片段。本文所用术语“人”或“完全人”抗体包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，包括分离自人免疫球蛋白文库的抗体或不表达内源性免疫球蛋白的一种或多种人免疫球蛋白的转基因动物，如下文所述，例如，Kucherlapati等的美国专利5，939，598。“人”或 “完全人”抗体也包括至少包含重链可变区或至少包含重链和轻链可变区的抗体，其中所述可变区具有人免疫球蛋白可变区的氨基酸序列。“人”或“完全人”抗体还包括如上所述包含本文所述抗体分子(如VH区和/或VL 区)的变体(包括衍生物)或基本由其组成或由其组成的“人”或“完全人”抗体，所述抗体或其片段免疫学特异性结合于CD100多肽或其片段或变体。可利用本领域技术人员已知的标准技术在编码人抗-CD100抗体的核苷酸序列中引入突变，包括但不限于，导致氨基酸取代的定点诱变和PCR介导的诱变。优选地，相对于参比VH区、VHCDRU VHCDR2、VHCDR3、VL 区、VIXDRl、VIXDR2或VIXDR3，该变体(包括衍生物)编码少于50个氨基酸取代、少于40 个氨基酸取代、少于30个氨基酸取代、少于25个氨基酸取代、少于20个氨基酸取代、少于 15个氨基酸取代、少于10个氨基酸取代、少于5个氨基酸取代、少于4个氨基酸取代、少于 3个氨基酸取代或少于2个氨基酸取代。在某些实施方式中，氨基酸取代是保守性氨基酸取代，如下详述。或者，也可沿所有或一部分编码序列随机引入突变，例如通过饱和诱变引入，可筛选所得突变体的生物学活性，以鉴定保持活性(例如，结合CD100多肽，如结合人CD100、鼠CD100或同时结合人和鼠CD100的能力)的突变体。“人”或“完全人”抗体的这类变体(或其衍生物)也可称为 “优化”或“为抗原结合所优化”的人或完全人抗体，包括与抗原亲和力提高的抗体。术语“抗体”和“免疫球蛋白，，在本文中可互换使用。抗体或免疫球蛋白至少包括重链可变区，通常至少包括重链和轻链的可变区。脊椎动物系统中的基本免疫球蛋白结构是众所周知的。参见例如，Harlow等(1988) Antibodies :ALaboratory Manual (《抗体实验室手册》)(第2版；冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press))。正如下文中详细讨论的，术语“免疫球蛋白”包括可通过生化性质区分的各种类型的多肽。本领域技术人员应理解，重链分为gamma、mu、alpha、delta或印silon(Y，μ，α， δ，O，其中还有一些小类(如Υ1-Υ4)。该链的特性决定抗体分“类”为IgG、IgM、IgA、 IgG或IgE。免疫球蛋白小类(同种型)如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl等已被良好表征，19且已知能产生特殊功能特性。根据本文公开内容，本领域技术人员不难区分这些类和同种型的修饰形式，因此，它们涵盖在本发明范围内。所有免疫球蛋白类型明显属于本发明范围，以下讨论通常论及免疫球蛋白分子的IgG类。在IgG中，标准的免疫球蛋白分子包括分子量约为23，000道尔顿的两个相同的轻链多肽和分子量为53，000-70, 000的两个相同的重链多肽。这四条链通常通过二硫键结合起来形成“Y”构型，其中轻链从Y的口部开始夹叉重链，并延续通过可变区。轻链分类为kappa或lambda (κ、λ)。各重链类可与κ或λ轻链结合。通常， 通过杂交瘤、B细胞或遗传工程改造的宿主细胞产生免疫球蛋白时，轻链和重链互相共价结合，两条重链的“尾部”通过共价二硫键或非共价连接互相结合。在重链中，氨基酸序列从 Y构型的分叉末端的N末端走向每条链底部的C末端。轻链和重链都可以分成结构和功能同源的区域。术语“恒定”和“可变”从功能角度使用。在这方面，应理解轻链(VL或VK)和重链(VH)部分的可变区决定抗原识别和特异性。相反，轻链(CL)和重链(CH1、CH2或CH3)的恒定区产生重要的生物学特性，例如分泌、 跨胎盘移动、Fc受体结合、补体结合等。通常，恒定区结构域的编号越大，离抗体的抗原结合位点或氨基末端越远。N-末端部分是可变区，C-末端部分是恒定区；CH3和CL结构域实际上分别包括重链和轻链的羧基末端。如上所述，可变区允许抗体选择性识别和特异性结合抗原上的表位。也就是说，抗体的VL和VH结构域、或这些可变区内的互补决定区(CDR)亚组组合形成确定三维抗原结合位点的可变区。在Y的每条臂末端形成的这种四联抗体结构构成抗原结合位点。更具体说，所述抗原结合位点由各VH和VL链带有的三个CDR决定。在一些情况下，例如在衍生自羊驼或根据羊驼免疫球蛋白工程改造的某些免疫球蛋白分子中，完整的免疫球蛋白分子可仅由重链构成而不含轻链。参见例如，Hamers-Casterman等，Nature 363 :446-448 (1993)。在天然产生的抗体中，每个抗原结合域上出现的六个“互补决定区”或“⑶R”是短的非毗连氨基酸序列，随着抗体在水性环境中确定其三维构型时，它们特别定位以形成抗原结合域。抗原结合域中的其余氨基酸称为“构架”区，该区域的分子间变化较小。构架区主要采用片层构象，⑶R形成环连接β-片层结构，并在某些情况下构成β-片层结构的部分。因此，构架区通过链间非共价相互作用形成支架为CDR提供正确定位。通过定位的CDR形成的抗原结合域能确定与免疫反应性抗原上表位互补的表面。这种互补表面促进抗体与其关联表位的非共价结合。本领域普通技术人员不难鉴定任何给定的重链或轻链可变区中包含CDR和构架区的氨基酸，因为它们已被精确定义(见下)。除非另有明确说明，在本领域使用和/或接受某术语的两种或多种定义的情况下，本文所用的该术语的定义应包括所有这些含义。具体例子是使用术语“互补决定区”(CDR)描述在重链和轻链多肽的可变区内发现的非毗连抗原结合位点。这一特定区域的描述可参见通过引用全文纳入本文的Kabat等(198 美国健康和公共服务部 (U. S. Dept. of Health and Human Services), Sequences of Proteins of Immunological Interest ( “具有免疫学重要性的蛋白质序列”)，Chothia和Lesk, J. Mol. Biol. 196 901-917(1987) 0，互相比较时，所述定义包括重叠的氨基酸残基或氨基酸残基亚组。尽管如此，应用任一定义指代抗体或其变体的CDR均应落入本文所定义和使用的术语的范围。 合适氨基酸残基包括上文引用的各参考文献中定义的CDR，如下表1所示以作比较。包括特定CDR的准确残基编号取决于CDR的序列和大小。在给定抗体的可变区氨基酸序列的情况下，本领域技术人员可常规确定哪些残基包括哪个具体⑶R。表1.CDR 定义本发明提供治疗CD100相关疾病，包括某些自身免疫病、炎性疾病和癌症的组合物和方法。具体说，已经开发了抗-CD100单克隆抗体来中和CD100。
