专利名称：含有难溶性喜树碱类药物的脂质体制剂及其制备方法喜树碱或其衍生物，也称为喜树碱类药物，是DNA合成抑制剂，用于多种癌症疾病的治疗。目前市场上喜树碱类药物的品种有喜树碱、9-轻基喜树碱、9-氨基喜树碱、10-轻基喜树碱、硝基喜树碱、7-(β-三甲基甲硅烷基)こ基喜树碱、7-(叔丁氧基)亚氨甲基喜树碱、7-こ基-10-羟基喜树碱(SN-38)、9_硝基喜树碱(9-NC)等，主要通过静脉、ロ服、喷雾等方式给药。喜树碱类药物以拓扑异构酶为作用部位，通过靶抑制DNA的合成而发挥抗癌作用，适用于不同生长速度的肿瘤，细胞毒性强，对于胃癌、肝癌、骨癌、白血病、膀胱癌等多种恶性肿瘤的治疗效果明显。其作用机制是选择性抑制DNA拓扑异构酶I (Τ0Ρ0 I)。在作用过程中，喜树碱类药物内酯环打开，酰基与TOPO II的亲核部分相互作用，并通过与TOPOI-DNA的可裂解复合物可逆结合形成喜树碱类药物-T0P0I-DNA三元复合物，从而稳定TOPOI-DNA复合物，抑制DNA解旋，导致DNA磷酸ニ酯键断裂，进而出现程序性细胞凋亡和死亡。喜树碱类药物在体内具有抗肿瘤活性必须保持六元α -羟基内酯环(环Ε)的完整性，即保持内酷环的闭合，内酯环打开则活性大大降低或无活性。但水难溶性喜树碱类药物的α -羟基内酯环对水性环境具有敏感性，在血液等PH高的水性环境中可以水解开环，使其失去抗肿瘤活性。而目前临床上是通过将喜树碱类药物碱化开环制成钠盐水针剂使用的，该方法虽增加了水溶性，但活性只有原来的1/10甚至更低。为了提高难溶性喜树碱类药物的稳定性和药效，可以考虑将难溶性喜树碱类药物制备成脂质体制剂。脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层，其内部为水相的闭合囊泡，主要具有以下特点脂质体是一种脂质双分子层小囊，结构与细胞生物膜类似，因此具有良好的细胞相容性；膜材可在体内生物降解且无毒性和免疫原性；既可包裹水溶性药物，又可包裹脂溶性药物，为脂溶性药物的静脉给药提供了可能；脂质体可具备靶向功能，降低药物的毒性。因此，将难溶性喜树碱类药物制备成脂质体制剂可以保护其内酯环，維持其活性，降低其毒副作用。目前，已有多种喜树碱类药物的脂质体制剂的报道，公开号为CN1537534A的专利报道了ー种含有磷脂、胆固醇、冻干保护剂以及10-羟基喜树碱的脂质体及其制备方法；公开号为CN1980671A的专利公开了ー种含有磷脂、脂肪酸以及水难溶性喜树碱的脂质体制剂；公开号为CN101003556A的专利公开了ー种10-羟基喜树碱衍生物、其脂质体制剂及制备方法；公开号为CN1650864A、CN1582932A、CN101019834A的专利均公开了ー种喜树碱或其类似物的脂质体的专利。但由于水难溶性喜树碱类药物通常为水不溶、脂难溶性，与磷脂等脂质的亲和カ较差，因此采用上述方法制备的脂质体包封率通常较低，不超过50%。为此，专利CN1562021A公开了ー种通过调节外相pH来提高包封率的方法，该方法首先是将该类药物在碱性溶液中溶解，然后以溶液(开环)形式包封入脂质体后再调节外相pH使喜树碱类药物成沉淀(闭环)形式包裹于脂质体内部，由此可以提高药物的包封率，但该方法仍限于将包封率由现有技术的10% -30%提高到高于75%。如果能进一歩提高难溶性喜树碱类药物脂质体的包封率，将有利于其作为抗肿瘤药物在临床中的应用。
为了进一歩提高难溶性喜树碱类药物脂质体制剂的包封率，发明人通过大量的实验，证明在脂质体的制备过程中加入高浓度的盐及糖能够使更多的药物包封于脂质体中，由此完成了本发明。由于本发明涉及的喜树碱类药物属于水不溶脂难溶性药物，在水和有机溶剂中的溶解度均较低，而组成脂质体的磷脂属于两亲性材料，在水相中加入高浓度的盐和糖导致溶液离子强度的增加，降低药物在水相中的溶解度，促使在水相中的药物向脂质体中的分布，从而提高药物的包封率。本发明的ー个方面涉及ー种脂质体制剂，其包含难溶性喜树碱类药物、磷脂、盐以及糖或多元醇，其特征在于所述盐的浓度为O. lmol/L I. Omol/L,优选为O. 3mol/L O. 8mol/L,在本发明的实施方案中，为O. 3,0. 5或O. 7mol/L ;所述糖或多元醇的浓度为200mg/ml 1000mg/ml,优选为300mg/ml 800mg/ml,在本发明的实施方案中，所述糖或多兀醇的浓度为 300mg/ml、400mg/ml 或 500mg/ml。其中所述的难溶性喜树碱类药物是指水不溶性脂难溶性喜树碱类药物，其包括但不限于喜树喊、9_轻基喜树喊、9_氨基喜树喊、10-轻基喜树喊、硝基喜树喊、7_ ( β - ニ甲基甲硅烷基)こ基喜树碱、7-(叔丁氧基)亚氨甲基喜树碱和7-こ基-10-羟基喜树碱，以及它们的药用盐。在本发明的实施方案中，所述难溶性喜树碱包括10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱及SN-38。所述的磷脂可以为饱和磷脂，也可以为不饱和磷脂，可以为天然磷脂，也可以为合成磷脂，可以为普通磷脂，也可以为修饰后的磷脂如亲水基修饰的磷脂或具有特殊性质的磷脂如具有长循环性质的磷脂和具有热敏特性的磷脂，所述磷脂包括但不限于蛋黄磷脂、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、ニ硬脂酰磷脂酰甘油、ニ硬脂酰磷脂酰こ醇胺、单硬脂酰磷脂酸胆碱、ニ棕榈酰磷脂酰胆碱、ニ硬脂酰磷脂酰胆碱、l，2-Dierucoyl-Sn-glyceiO-3-phosphocholine、ニ油酰磷脂酰胆碱、ニ硬脂酰磷脂酰こ醇胺、ニ棕榈酰磷脂酰こ醇胺、ニ油酰磷脂酰こ醇胺、ニ棕榈酰磷脂酰甘油、ニ硬脂酰磷脂酰甘油、神经鞘磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、溶血磷脂、单棕榈酰磷脂酰胆碱、单硬脂酰磷脂酰胆碱、不同分子量的聚こニ醇化的磷脂、脑磷脂、蛋磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱、磷脂酰こ醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、ニ肉豆蘧酰卵磷脂、磷脂酰こ醇胺、磷脂酰胆碱、ニ鲸蜡磷酸酷、ニ棕榈酰磷脂酸、二月桂磷脂酰胆碱、ニ硬脂酰磷脂酰胆碱、ニ芥酰基卵磷脂、ニ硬脂酰磷脂酰甘油、ニ癸酰基卵磷脂、ニ油酰基卵磷脂、I-肉豆蘧酰-2-棕榈酰卵磷脂、I-肉豆蘧酰-2-硬脂酰卵磷脂、I-棕榈酰-2-肉豆蘧酰卵磷脂、I-棕榈酰-2-硬脂酰卵磷脂、I-硬脂酰-2-肉豆蓮酰卵磷脂、I-硬脂酰-2-棕榈酰卵磷脂、I-肉豆蘧酰-2-油酰卵磷脂、I-棕榈酰-2-油酰卵磷脂、肉豆蘧酰溶血卵磷脂、棕榈酰溶血卵磷脂、硬脂酰溶血卵磷脂、二月桂酰磷脂酰甘油、ニ肉豆蘧酰磷脂酰甘油、ニ棕榈酰磷脂酰甘油、ニ硬脂酰磷脂酰甘油、ニ油酰磷脂酰甘油、ニ芥酰基磷脂酰甘油、I-棕榈酰-2-油酰磷脂酰甘油、ニ肉豆蘧酰磷脂酸、ニ棕榈酰磷脂酸、ニ硬脂酰磷脂酸、ニ肉豆蘧酰磷脂酰こ醇胺、ニ棕榈酰磷脂酰こ醇胺、ニ硬脂酰磷脂酰こ醇胺、ニ油酰磷脂酰こ醇胺、ニ芥酰基磷脂酰こ醇胺、I-棕榈酰-2-油酰磷脂酰こ醇胺、ニ肉豆蘧酰磷脂酰丝氨酸、ニ硬脂酰磷脂酰丝氨酸、ニ棕榈酰磷脂酰丝氨酸、ニ油酰磷脂酰丝氨酸、ニ硬脂酰こ醇胺-聚こニ醇或其两种或两种以上的混合物。在本发明的实施方案中，所述磷脂为ニ棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC和长循环磷脂ニ硬脂酰こ醇胺-聚こニ醇2000的混合物、不饱和磷脂蛋黄卵磷脂、或者蛋黄卵磷脂和ニ硬脂酰こ醇胺-聚こニ醇2000的混合物。在本发明中，所述的难溶性喜树碱类药物与磷脂的重量百分比为O. 0001 I I I ;优选为 O. 005 I O. I I。在本发明中，所述的盐为可溶性盐，例如为缓冲盐和/或可溶性无机盐中的ー种或多种，例如为磷酸盐、碳酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐或盐酸盐中的ー种或多种，优选为磷酸盐，在本发明的实施方案中，所述的盐为磷酸钠盐或者磷酸钾/钠 盐。在本发明中，所述的糖或多元醇选自单糖、双糖、可溶性多糖以及小分子多元醇中的ー种或多种，优选为单糖、双糖及小分子多元醇中的ー种或多种，例如为蔗糖、海藻糖、葡萄糖、山梨糖、乳糖、果糖、山梨醇和甘露醇中的ー种或数种，在本发明的实施方案中，所述的糖或多元醇为蔗糖或海藻糖。在本发明中，所述的脂质体制剂还含有添加剤，所述添加剂选自抗氧化剂、胆固醇、表面活性齐[J、磁性物质、抗体、配体、稳定齐U、荷电物质、PH调节剂和高分子聚合物中的一种或数种。在本发明的一个实施方案中，所述添加剂为抗氧化剂维生素E ;在本发明的ー个实施方案中，所述添加剂为胆固醇。所述的抗氧化剂如维生素E、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等具有抗氧化作用的物质；所述的表面活性剂如泊洛沙姆、吐温、司盘等具有表面活性作用的物质；所述的磁性物质如三氧化ニ铁、四氧化三铁等具有磁性物质；所述的抗体为可特异性作用于某些受体的物质，如抗HIV的抗体F105等；所述的配体是指可特异性作用于某些受体的小分子的物质如甘露醇、半乳糖等；所述的荷电物质为本身带有电荷的物质，如磷脂酸(PA)、磷脂酰丝氨酸(PS)、十八胺等；所述的pH调节剂为可以调节pH的物质，如柠檬酸、盐酸、磷酸、三こ胺等；所述的高分子聚合物可以为右旋糖酐、聚こニ醇等。本领域技术人员可以根据实际需要添加不同的添加剤，所得到的脂质体可以为普通脂质体、长循环脂质体、热敏脂质体、长循环热敏脂质体、磁性脂质体或免疫脂质体。在本发明中，所述脂质体制剂的包封率可达到85%以上，在经过反复冻融后，包封率可达到90%以上，甚至接近100%。本发明的另一方面涉及ー种药物组合物，其含有治疗有效量的本发明的脂质体制齐U，以及药学上可接受的载体或赋形剂。 本发明的还一方面涉及本发明的脂质体制剂的制备方法，其可以采用被动载药技术制备，包括薄膜分散法、有机溶剂冻干法、喷雾干燥法、流化床包衣法、単相溶液冻干法、反相蒸发法、二次乳化法、こ醇注入法或交叉流注射法；在本发明具体实施方案中，所述制备方法为薄膜分散法和喷雾干燥法，具体包括以下步骤(I)将难溶性喜树碱类药物、磷脂及添加剂溶解于有机溶剂，例如氯仿和/或甲醇中；(2)蒸发(I)中所得溶液以除去有机溶剂，得到混合粉或薄膜；或者将(I)所得溶液进行喷雾干燥，得到混合粉；(3)在(2)中所得混合粉或薄膜或者(I)中所得溶液加入含有盐及糖的溶液，水化或乳化后将悬液移出，超声或均质过膜，除菌，得到脂质体；任选地，在除菌前加入反复冻融的步骤。在本发明的一个实施方案中，所述的难溶性喜树碱类药物脂质体制剂采用薄膜分散法制备，即将药物、磷脂及其他添加剂溶解于有机溶剂中，超声溶解。旋转蒸发除去有机溶剂，置真空干燥箱中一定时间后加入含有高浓度盐及糖的溶液，水化后将悬液移出，超声或均质过膜，即得脂质体。在本发明的另一个实施方案中，所述的难溶性喜树碱类药物脂质体制剂采用喷雾 干燥法制备，即将药物、磷脂及其他添加剂溶解于有机溶剂中，超声溶解。喷雾干燥即得混合粉，置真空干燥箱中一定时间后加入含有高浓度盐及糖的溶液，水化后将悬液移出，超声或均质过膜，即得脂质体。所述的脂质体经不同方法制备后可以直接经过滤除菌后储存或使用，也可以反复冻融以进一步增加脂质体的包封率，然后经过滤除菌储存或使用。所述的脂质体可以进一步制成注射液、冻干粉针剂、大输液或喷雾剂。采用本方法，不仅可以制备普通脂质体，还可以制备成长循环脂质体、长循环热敏脂质体以及其他主动或被动靶向脂质体，可以增加药物的稳定性，提高药物活性，可以增加药物在靶区的释放，提高疗效，还可以减少药物在全身循环系统的分布，从而降低总的用药量，同时降低全身毒副作用。本发明的另一方面涉及本发明的脂质体制剂在制备抗肿瘤药物中的用途。发明的有益效果本发明在难溶性喜树碱类药物的脂质体制剂中，加入高浓度的盐和糖，使得在保证药物活性的同时，大大提高了含有难溶性喜树碱类药物脂质体制剂的包封率，其包封率可达到85%以上，且在经过反复冻融后，包封率可达到90%以上，接近100%。难溶性喜树碱类药物脂质体制剂包封率的大大提高将更有利于该类药物在临床治疗肿瘤中的应用。同时，该脂质体制剂制备方法简单、方便，无需将药物先转化成无活性的开环形式然后再包封于脂质体中或再转换成闭环形式，而是可以直接将该类药物以闭环形式包封于脂质体内，适合大规模生产。图I实施例I制备的脂质体的粒径分布图。其中纵坐标“cumulative distribution”表不累积分布，单位为“densitydistribution”表示密度分布；横坐标“particle size”表示粒度,单位为纳米(nm)。


本发明涉及一种含有难溶性喜树碱类药物的脂质体制剂及其制备方法。所述脂质体制剂包含难溶性喜树碱类药物、磷脂、盐以及糖或多元醇，所述盐选自缓冲盐和/或无机盐，其浓度为0.1mol/L～1.0mol/L，优选为0.3mol/L～0.8mol/L，所述糖或多元醇选自蔗糖、海藻糖、葡萄糖、山梨糖、乳糖、果糖、山梨醇和甘露醇，其浓度为200mg/ml～1000mg/ml，优选为300mg/ml～800mg/ml。本发明还涉及包含所述脂质体制剂的药物组合物，以及所述脂质体制剂用于制备抗肿瘤药物的用途。本发明的脂质体制剂包封率高，制备简单、方便，适合大规模生产。