专利名称：特异性结合epha2受体的抗体的制作方法特异性结合EPHA2受体的抗体本发明涉及特异性结合EphA2受体的抗体或其表位结合片段。它进一步涉及包含与抗体共价结合的细胞毒剂的缀合物及用于制备此类缀合物的方法。癌症是一种以源自异常信号转导的不受控制的增殖为特征的疾病。最危险的癌症形式是恶性细胞，其具有通过经由侵入而直接生长入相邻组织中，或者通过转移而植入远距离部位中，从而扩散的能力。转移细胞已经获得了从原发性肿瘤脱离，经由血流或淋巴系统移位到远距离部位并在远距离的且无关的微环境形成集落的能力。现在清楚的是，Eph分子牵涉疾病状态诸如癌症。Eph受体是一种在基因组中最大的独特的受体酪氨酸激酶(RTK)家族，其由与8种膜结合肝配蛋白配体相互作用 的 14 种受体组成，分成两组 A 和 B(Pasquale, E. B.等，2005，Nature Reviews Mol. CellBiol. ,6:462-475)。Eph受体对其配体的结合诱导受体聚簇，激活激酶活性，随后对酪氨酸残基进行胞质域的反式磷酸化，为许多信号传导蛋白质创建对接位点(docking site)(Kullander,K 和Klein, R.，2002，Nature Reviews Mol. Cell Biol.,3:475-486;Noren, N.K.和 Pasquale, E. B.，2004，Cell signal.，16:655-666)。已经在卵巢、乳腺、前列腺、肺、结肠、食管、肾细胞、宫颈癌和黑素瘤中报告了EphA2受体的过表达。提示了 EphA2是恶性细胞的细胞生长和存活的正调节物(Landen，C.N.等,2005, Expert. Opin. Ther. Targets, 9 (6) : 1179-1187)。还已经描述了 EphA2 在癌症中的作用，因为单独的EphA2过表达足以将乳腺上皮细胞转化成恶性表型(Zelinski等，2001，Cancer Res.，61:2301-2306),而且提高对远距离部位的自发转移(Landen, C.N.等,2005, Expert. Opin. Ther. Targets, 9 (6) : 1179-1187)。此外，越来越多的证据提不了 EphA2 牵涉肿瘤血管生成(Ogawa 等，2000，Oncogene, 19:6043-6052; Cheng 等2002, Mol. Cancer Res. , 1:2-11;Cheng 等,2003,Neoplasia, 5(5):445-456;Dobrzanski等，2004，Cancer Res.，64:910-919)。已经显示了 EphA2的磷酸化与其丰度相关联。酪氨酸磷酸化的EphA2被快速内在化，并且注定要进行降解，而未磷酸化的EphA2被证明翻转(turnover)降低，并且因此在细胞表面积累。目前认为此种模型可以促成癌症中高频率的EphA2过表达(Landen，C.N.等，2005, Expert. Opin. Ther. Targets, 9 (6) : 1179-1187)。然而，事实可能更复杂，因为最近的数据似乎指示EphA2激酶依赖性和不依赖性功能在肿瘤进展中的作用(Fang ff. B.，2005, Oncogene, 24:7859-7868)。已经开发出激动性抗体，其促进EphA2酪氨酸磷酸化和内在化，最终导致对肿瘤细胞生长的抑制(Dodge-Zantek 等,1999, Cell Growth&Differ, 10:629-638;WO01/12172,WO 03/094859, WO 2004/014292, WO 2004/101764,WO 2006/023403, WO2006/047637, WO 2007/030642)。申请WO 2006/084226披露了既不提高也不降低EphA2激酶活性，但是能够阻碍肿瘤细胞增殖的抗体。然而，其中没有指示这些抗体阻止肝配蛋白Al结合受体，并且抑制肝配蛋白Al诱导的EphA2磷酸化。WO 2004/092343中已经提出了使用拮抗性抗体，但是其中没有披露实际的抗体。WO 2008/010101中已经描述了作为真实的拮抗剂的识别EphA2的抗体及其人源化变体和缀合物。这些抗体及其衍生物抑制EphA2激酶依赖性肿瘤细胞生长。然而，仍需要可以在癌症疗法中使用的新的且有效的药物。发明概述本发明的一个目的是提供新的药剂，其特异性结合A类Eph受体家族成员，诸如EphA2,并且通过拮抗受体来抑制受体的细胞活性。如此,本发明包括识别EphA2受体,优选地人的，并且发挥所述受体的拮抗剂功能的抗体或其片段。这些抗体缺乏任何激动剂活性。在一个实施方案中，本发明的抗体或其表位结合片段包含至少一条重链和至少一条轻链，所述重链包含三个连续的具有以SEQ ID NO: 1、2、和3代表的氨基酸序列的互补决定区，且其中所述轻链包含三个连续的具有以SEQ ID N0:4、5、和6代表的氨基酸序列的互补决定区。在一个优选的实施方案中，所述抗体或其表位结合片段是人源化的或重修表面 的(resurfaced)。在一个甚至更优选的实施方案中,所述抗体或其表位结合片段的重链包含由SEQ ID NO: 12组成的氨基酸序列，且所述抗体或其表位结合片段的轻链包含由SEQ IDNO: 14组成的氨基酸序列。在又一个实施方案中，所述抗体的重链具有氨基酸序列SEQ ID NO: 18，且所述抗体的轻链具有氨基酸序列SEQ ID NO: 16。在另一个实施方案中，所述抗体或其表位结合片段与细胞毒剂缀合。因此，本发明的一个方面提供了本发明的抗体或其表位结合片段的缀合物，其中所述缀合物包含选自下组的结合的细胞毒剂式(XIII)的化合物本公开内容涉及特异性结合EPHA2受体的抗体或其表位结合片段。它进一步涉及包含与抗体共价结合的细胞毒剂的缀合物及用于制备此类缀合物的方法。