专利名称：脂质化氧代腺嘌呤衍生物的制作方法脂质化氧代腺嘌呤衍生物本发明涉及新型佐剂化合物、它们的制备方法、含有它们的组合物和它们作为疫苗佐剂的用途。微生物疫苗的精制和简化以及合成和重组亚单位抗原用于改进疫苗可制造性和安全性的应用已造成疫苗效力降低。这导致研究佐剂与抗原的共同给药以强化疫苗活性及合成和重组表位(recombinant epitopes)的弱免疫原性。佐剂是增强体液和/或细胞介导的对疫苗抗原的免疫应答的添加剂。但是，由于免疫系统功能中涉及的分子机制的复杂性质，疫苗佐剂的设计一直是困难的。尽管早知微生物组分的添加提高适应性免疫应答，但仅到最近才表明，免疫监视中涉及的细胞，如上皮和树突状细胞上的铎样受体(toll-like receptors) (TLR)通过所谓的“病原体相关模式”或PAMP牵涉许多这些微生物产物。许多疫苗佐剂和独立的免疫调节剂看起来与TLR家族的成员相互作用。在人体中已确认的10种已知TLR中，五种与细菌组分的识别相关联(TLR 1、2、 4、5、6)，另外四种(TLR 3、7、8、9)看起来局限于胞质区室(cytoplasmic compartment) 并涉及病毒RNA的检测(TLR 3、7、8)和非甲基化DNA的检测(TLR9) (Iwasaki, A.，Nat Immunol 2004, 5，987)。TLR的活化调节细胞内信号通路并通过与细胞内衔接分子，如 MyD88、TRIF、TIRAP 和 TRAM 的相互作用造成基因表达(Akira, S. Nat Rev Immunol 2004， 4，499 ；Takeda, K. Semin Immunol 2004, 16，3)。这些衔接分子可不同地调节炎性细胞因子/趋化因子和I型干扰素(IFNα / β )的表达，这可导致抗原特异性体液和细胞介导的免疫应答的优先增强(Zughaier，S. Infect Immun 2005, 73，四40)。体液免疫是对细菌病原体的主要防御路线，而在病毒疾病和癌症的情况下细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的诱导看起来对保护性免疫至关重要。在TLR7和TLR8活化的情况下，已识别出天然(富U和/或富G)病毒ssRNA配体的几种不同种类的小分子模拟物。这些包括主要与TLR7相互作用的与氧化鸟苷代谢产物 (氧代鸟苷(oxoguanosines))相关的某些抗病毒化合物(Heil，F. Eur J Immunol 2003， 33，2987 ；Hemmi, 2002)和涉及TLR7和/或TLR8的腺嘌呤衍生物。这些化合物的免疫刺激能力已归因于TLR/MyD88-依赖性信号通路和细胞因子的生成，包括IL-6和I (特别是干扰素- α )和II型干扰素。TLR7或TLR8活化造成在树突状细胞(DC)上的共刺激分子(例如CD-40、CD-80、CD-86)和I和II类MHC分子的上调(upregulation)。DC是抗原吸收和呈递给T淋巴细胞中涉及的免疫系统的主细胞。优先表达TLR7的类浆细胞(plasmacytoid) 树突状细胞(PDC)是专业的干扰素-α产生细胞；而mDC仅表达TLR8。mDC上的TLR8活化造成促炎细胞因子，如IL-12、TNF-α和IFN-γ的优先生成和细胞介导免疫(CMI )。已经表明，TLR7激动剂在生成IFN-α和INF-调节的细胞因子方面更有效，而造成⑶4+调节 (Treg)细胞功能逆转的TLR8激动剂在诱导促炎细胞因子，如TNF- α和IL-12方面更有效， 表明TLR7活化对抗体应答(Th2-型应答)更重要，而TLR8活化应诱导CMI或Thl-型免疫应答(Gordon J Immunol 2005, 1259)。已受到相当大量关注的一类TLR-活性腺嘌呤衍生物是氧代腺嘌呤(oxoadenine)。氧代腺嘌呤通常含有在腺嘌呤环的8_位的羟基(常以8_酮基/氧代互变异构形式显示)、在2-和9-位的各种取代基和在4-位的未取代芳族氨基。与其它IFN-诱导的腺嘌呤衍生物，如咪唑并喹啉一样，未取代芳族氨基被认为对IFN诱导活性而言是必需的。 为克服与咪唑并喹啉相关的某些副作用而最初开发的许多氧代腺嘌呤已表明，在体外和体内IFN诱导活性方面明显比原型咪唑并喹啉如咪喹莫特和雷西莫特更有力，但没有催吐活性——咪唑并喹啉的主要临床副作用。例如，氧代腺嘌呤SM360320目前处于针对HCV的临床前开发，并已表明通过I型IFN诱导以及通过不依赖于IFN的机制来抑制人肝细胞中的 HCV复制(Lee PNAS 2006, 103，1828)0但是，尽管事实上氧代腺嘌呤类看起来表现出比咪唑并喹啉更好的总体毒性/生物活性状况，但通过各种途径向小鼠施用SM360320造成部分由肥大细胞释放的炎性细胞因子介导的全身疾病响应(systemic sickness response) (Hayashi Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 2008， 295， R123)。实际上， TLR7激动剂的大免疫学“足迹”通常导致对毒性的关注和临床试验在许多情况下的暂停 (Strominger Brain Res Bull 2001，55，445 ；Schmidt Nat Biotech 2007，25，825)。由于目前正在开发的大多数TLR7/8激动剂常常表现出毒性，不稳定和/或具有非实质的免疫刺激作用，激活TLR7和/或TLR8的有效和安全的疫苗佐剂的发现和开发对改进现有和新型疫苗的安全性和效力而言是重要的。发明概述在本文中我们描述了包含氮杂环基-取代的氧代腺嘌呤分子的新型脂质化氧代腺嘌呤，该氮杂环基-取代的氧代腺嘌呤分子以促进在单独给药或在含抗原的贮库制剂(depot formulation)中给药时吸收到免疫细胞中并提高胞内体TLR7/8活化和抗原呈递的方式共价连接到磷脂或磷酸脂上。使用本发明的化合物的提高的免疫应答可能归因于式(I)的化合物与胞内体TLR7和/或TLR8或其它分子受体的直接相互作用和/或在酶促作用后的活性代谢产物与TLR7和/或TLR8或其它分子受体的相互作用。本发明的化合物已表明是干扰素-α和其它免疫刺激细胞因子的诱导剂，并在传染病和癌症的治疗性或预防性疗法中用作疫苗抗原的佐剂时与已知细胞因子诱导剂相比具有改进的活性-毒性状况。这些化合物本身也是新颖的。代表性实施方案详述在本申请全文中，提到关于化合物、组合物和方法的各种实施方案。所述的各种实施方案意在提供各种示例性实例并且不应被解释为备选物类的描述。相反，应该指出，本文中提供的各种实施方案的描述可具有重叠范围。本文公开的实施方案仅是示例性的并且无意限制本发明的范围。要理解的是，本文所用的术语仅用于描述具体实施方案且无意限制本发明的范围。在本说明书和随后的权利要求中，提到许多术语，它们应被定义为具有下列含义。“烷基”是指具有1至14个碳原子和在一些实施方案中1至6个碳原子的一价饱和脂族烃基。“(cx_cy)烷基”是指具有X至y个碳原子的烷基。该术语包括，例如，直链和支化烃基，如甲基(CH3-)、乙基(CH3CH2-)、正丙基(CH3CH2CH2-)、异丙基((CH3) 2CH_ )、 正-丁基(CH3CH2CH2CH2-X异丁基((CH3)2CHCH2-X 仲-丁基((CH3) (CH3CH2) CH-)、叔-丁基 ((CH3) 3C-)、正-戊基(CH3CH2CH2CH2CH2-)和新戊基((CH3) 3CCH2-)。“烷氧基”是指基团-0-烷基，其中烷基如本文中所定义。烷氧基包括，例如，甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异丙氧基、正-丁氧基、叔-丁氧基、仲-丁氧基和正-戊氧基。“酰基”是指基团h-c (0)-、烷基-c(o)和烯基-c(o)。“氨基”是指基团-nhr4，其中r4独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、杂芳基和杂环。“环烷基”是指具有3至14个碳原子且没有环杂原子的饱和或部分饱和的环状基团。除非另行指明，通过命名末端部分的官能团接着朝向连接点的相邻官能团，确定本文中没有明确定义的取代基的命名法。例如，取代基“芳基烷氧基羰基”是指基团(芳基)-(烷基)-o-c (0)-。要理解的是，上述定义无意包括不允许的取代型式(例如被5个氟基取代的甲基)。此类不允许的取代型式是技术人员公知的。本发明的化合物是包含共价连接到磷脂或磷酸脂基团上的氮杂环基-取代的氧代腺嘌呤分子的佐剂分子。本发明的化合物大致由式(i)描述包含共价连接到磷脂或磷酸脂上的氮杂环基-取代的氧代腺嘌呤分子的新型脂质化氧代腺嘌呤表明是干扰素-a和其它免疫刺激细胞因子的诱导剂。该化合物可用作免疫刺激剂和佐剂。