大鼠用复方麻醉剂及其制备方法[0002] 在动物实验中，选择适宜、安全、有效的麻醉方法是实验安全性及数据可靠性的重 要基础。大鼠常用于药物营养代谢、内分泌、行为学、老年病学、肿瘤、感染性疾病、心血管疾 病等方面的研究及手术模型的制备，而麻醉方法的不当可能引起鼠类动物机体的一系列病 理生理变化，甚至致其死亡，影响整个实验的结果。[0003] 目前国内常用的大鼠麻醉制剂有水合氯醛、乌拉坦、戊巴比妥、氯胺酮、速眠新等。 水合氯醛是短效麻醉剂，10%水合氯醛的相对安全范围较小，麻醉深度较浅，肌肉松弛及镇 痛效果不佳，一般不能用于复杂和耗时较长的手术过程中，单独使用时死亡率相对较高，且 常需要追加剂量。乌拉坦为长效麻醉剂，在麻醉深度达外科手术要求时，对呼吸和循环无明 显的抑制作用，但此药毒性大，有研究表明20%乌拉坦麻醉能使大鼠红细胞聚集性增加，故 不宜用于血液流变学的相关实验，已证实乌拉坦对大鼠的血液有显著影响，本身有致癌性， 故在实验动物的全身麻醉中不推荐使用该类麻醉药。戊巴比妥钠麻醉维持时间2h左右，但 对视觉电生理的各种波形影响较大，同时腹腔注射对动物机体心血管、神经系统具有一定 的抑制作用，机体损害较大。氯胺酮为短效麻醉剂，120mg/kg腹腔注射大鼠，麻醉维持时间 仅45min左右，适用范围窄。虽然速眠新可通过控制剂量来调节麻醉维持时间，但麻醉过程 中对大鼠视网膜电图的b波影响较大。[0004] 大鼠的吸入性麻醉虽然在麻醉深度上实现了有效控制，但使用时需要通过专用麻 醉设备，配以专一的吸入麻醉挥发罐。不仅手续十分繁琐，而且设备和药品十分昂贵，增加 麻醉费用，目前在国内大多数实验室很难推广应用。[0005] 目前动物麻醉发展趋势是平衡麻醉，也就是多种药物联合应用，不但可以比较好 的控制麻醉深度，达到手术的需要，还可以减少单种药物的用量，减少药物蓄积，减轻药物 浓度过大导致的副作用。因此，针对各种注射麻醉药物的作用特点，配制动物专用复方制剂 是平衡麻醉的主要发展趋势。另外，由于动物具有野性和非驯化性，操作烦琐难免造成人畜 损伤。因此，急需能一针奏效的复方麻醉剂。而最具发展前景的是平衡麻醉复方麻醉剂的 研究，是动物医学麻醉领域内新的生长点，目前已有产品用于犬、鹿等动物的麻醉过程中。[0006] 现有大鼠麻醉和保定仍然停留在上述单一药物的使用、剂量的探讨及几种药物的 相互比较阶段，亟需一种新的复方麻醉制剂，解决现有的大鼠麻醉剂在镇静、镇痛、诱导时 间、麻醉维持时间等方面存在的不足以及大鼠应激性过大引起的心率过快、血压过高等突 出问题。
[0007] 本发明的目的之一是提供一种大鼠用复方麻醉剂；[0008] 本发明的目的之二是提供一种大鼠用复方麻醉剂的制备方法。[0009] 本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
[〇〇1〇] 本发明首先提供了一种大鼠用复方麻醉剂，包括：右旋美托咪啶、咪达唑仑、羟考 酮、缓冲液及注射用水；
[0011] 其中，所述的缓冲液优选为PH7. 0的磷酸盐缓冲液。
[0012] 本发明首先将应用于动物的多种具有麻醉效果的组分进行随机组合，通过对大鼠 麻醉的对比试验，综合分析各种组合的麻醉诱导期、麻醉期、苏醒期、镇静、镇痛、肌松效果 以及呼吸、脉搏、体温等生理指标；通过大量的筛选实验结果发现，由右旋美托咪啶、咪达唑 仑和羟考酮组成的复方制剂的麻醉效果明显优于其它各种组合的麻醉效果。因此，本发明 确定了以右旋美托咪啶、咪达唑仑和羟考酮作为大鼠用的复方麻醉制剂的主要组分。
[0013] 右旋美托咪啶是一种新型高选择性α 2肾上腺素能受体激动剂，其激活蓝斑核α 2 受体，而蓝斑核是脑内α2Α受体最密集的区域，是大脑内负责调解觉醒与睡眠的关键部位， 因而产生自然非动眼睡眠（NREM)，发挥镇静、抗焦虑作用。而右旋美托咪啶对呼吸抑制轻 微，其代谢受肾功能影响小，代谢产物没有活性。右旋美托咪啶有中度的镇痛作用，同时其 具有的镇静、减少应激反应、与阿片类药物的协同作用等，可以减少围术期阿片类药物的用 量。快速给予负荷剂量的1 μ g/kg右旋美托咪啶，直接激活血管平滑肌内的α2Α受体，产 生血管收缩，可引起短暂的高血压，反射性地降低心率。右旋美托咪啶可迅速加深全身麻 醉，麻醉速度加快，有其特异性拮抗药，便于调节全身麻醉深度，可控性好于大多数全身麻 醉药。咪达唑仑麻醉诱导后，心率变异性（HRV)各成分均降低，血浆中去甲肾上腺素（ΝΑ)的 浓度明显降低，在针对其应激性与右旋美托咪啶具有较好的协同作用。静注咪达唑仑可导 致血压下降，直接抑制心肌、扩张外周血管及影响自主神经。右旋美托咪啶对心率、血压的 影响也较明显。二者在减缓麻醉期实验动物心率的影响中具有协同作用。羟考酮是从生物 碱蒂巴因（Thebaine)中提取的半合成阿片类药物，作为强效镇痛药在临床上应用已有80 多年的历史。由于羟考酮生物利用度高，给药途径多，因而在医学临床上应用广泛，在动物 麻醉方面很少使用该药。
[0014] 在确定了以右旋美托咪啶、咪达唑仑和羟考酮作为大鼠用复方麻醉制剂的主要组 分的基础上，本发明对右旋美托咪啶、咪达唑仑和羟考酮的用量以及复方麻醉剂的缓冲盐 体系进行进一步的优化和筛选。
[0015] 本发明对右旋美托咪啶、咪达唑仑和羟考酮的用量筛选获得麻醉效果较好的3个 用量组合，作为组方1、2和3。
[0016] 其中，组方1中各组分及含量为：每100mL所述复方麻醉剂中，右旋美托咪啶的含 量为15mg，咪达唑仑的含量为135mg，羟考酮的含量为6. 5mg。
[0017] 组方2中各组分及含量为：每100mL所述复方麻醉剂中，右旋美托咪啶的含量为 15mg，咪达唑仑的含量为145mg，羟考酮的含量为7. 5mg。
[0018] 组方3中各组分及含量为：每100mL所述复方麻醉剂中，右旋美托咪啶的含量为 15mg，咪达唑仑的含量为135mg，羟考酮的含量为7mg。
[0019] 实验结果发现，虽然组方3在镇静和肌松方面与组方1和2没有明显的差别，但在 镇痛效果方面组方3显著优于组方1和2。由此确定最佳处方为组方3,即每100mL所述复 方麻醉剂中，右旋美托咪啶的含量为15mg，咪达唑仑的含量为135mg，羟考酮的含量为7mg。
[0020] 因此，为了达到更佳的麻醉效果，每lOOmL所述复方麻醉剂中，各组分的含量优选 为：每100mL复方麻醉剂中，右旋美托咪啶15mg，咪达唑仑135mg，羟考酮7mg ;或者每100mL 复方麻醉剂中，各组分的含量为：右旋美托咪啶15mg，咪达唑仑135mg，羟考酮6. 5mg;或 者每lOOmL复方麻醉剂中，各组分的含量为：右旋美托咪啶15mg，咪达唑仑145mg，羟考酮 7. 5mg〇
[0021] 在配制复方麻醉剂时，采用不同缓冲盐体系，其麻醉效果（包括镇静、肌松、镇痛 等）存在较大的差异，本发明优化、筛选了不同的缓冲液，最终发现，采用PH7. 0的磷酸盐缓 冲液配制的麻醉剂在镇静、肌松或镇痛等麻醉效果上要明显优于其它的缓冲液。因此，本发 明采用PH7. 0的磷酸盐缓冲液配制复方麻醉剂；其中，所述的pH7. 0的磷酸盐缓冲液包括： 磷酸二氢钾和氢氧化钠；优选的，每lOOmL复方麻醉剂中：磷酸二氢钾的含量为680mg，氢氧 化钠的含量为116. 4mg。
[0022] 本发明还对是否加入阿托品及加入时间进行了实验，结果发现，与复方麻醉剂的 主要组分同时注射阿托品后可增强麻醉过程中的镇痛效果，还可以有效地改善复方麻醉制 剂对大鼠心率和血压的不良影响。最终确定阿托品和复方麻醉剂的主要组分同时加入，剂 量为0. 14mg/kg，即每lOOmL复方麻醉剂中阿托品的含量为14mg。
[0023] 阿托品属于节后抗胆碱药，阻断毒蕈碱型受体，有研究表明阿托品可以使烟碱对 心率增加的作用有所降低，其原因可能是阿托品阻断了烟碱刺激心脏交感神经末梢释放乙 酰胆碱。本发明选用阿托品作为辅助药，是因为该药对动脉压影响极微小，对心率的影响也 远较肾上腺素缓和。它最明显的作用是对心率的影响，此作用有时表现为"双相反应"，即给 药后最初可出现短暂的心率减慢，然后心率增速。其增速作用与原来的心率水平呈负相关， 利用此作用来缓和右旋美托咪啶对心率降低幅度，起到保护动物机体的作用。
[0024] 其中，本发明中所述的鼠类动物优选为大鼠。
[0025] 本发明提供了一种制备所述鼠类动物用复方麻醉剂的方法，该方法包括：将右旋 美托咪啶、咪达唑仑、羟考酮、缓冲液溶于注射用水中，稀释，过滤，灭菌，即得。
[0026] 本发明还提供了一种制备所述鼠类动物用复方麻醉剂的方法，该方法包括：将右 旋美托咪啶、咪达唑仑、羟考酮、阿托品、缓冲液依次溶于注射用水中，稀释，过滤，灌封于安 瓿瓶内，灭菌，即得。
[0027] 本发明的动物用复方麻醉剂能够应用于动物尤其是大鼠的制动和麻醉。
[0028] 本发明的动物用复方麻醉剂与现有的动物麻醉剂相比具有以下优点：
[0029] 1、麻醉诱导时间为6. 35±2. 28min，麻醉维持时间为130. 23±57. 22min，苏醒时 间为33. 28 ± 17. 05min。显示本复方麻醉剂麻醉诱导迅速平稳，麻醉维持时间长，苏醒平稳， 无异常表现（兴奋、复睡等）。
[0030] 2、对主要生理参数的影响：注射本复方麻醉剂对正常体温有一定影响，表现为注 射后体温开始下降并持续维持低温状态。心率在注药后7. 5min时与基础值相比，显著降 低，使用阿托品可以有效缓解心率的过度降低和心律不齐等。呼吸频率注药后呈轻微下降 趋势，单因素方差分析差异不显著，持续到麻醉120min后基本恢复正常水平。血氧饱和度 表现为初期下降，到注药后20min降至最低，后逐渐恢复并接近正常水平，整个麻醉过程中 血氧饱和度均在93%以上。血压在注药后开始升高，到10min以后维持高血压状态，40min 后逐渐降低，80min后血压与Omin差异性均不显著（p>0.05)。注射本复方麻醉剂对主要生 理指标影响在其生理耐受范围内。
[0031] 3、对肝肾功能的影响：ALT、AST、ALP、TBIL、BUN、CREA、CH0L等反映肝肾功能的主 要生化指标，在麻醉过程中未发生显著的变化（P>〇. 05)。
[0032] 4、操作简单，腹腔注射，用于快速诱导麻醉；麻醉维持时间较长，镇痛、镇静效果良 好，可用于复杂或时间长的手术，苏醒时间较快。


[0033] 图1为三种处理下心率平均数随时间变化趋势；纵轴代表心率（次/min)，横轴代 表时间点（min)。
[0034] 图2为三种不同处理下平均动脉压（MAP随时间变化趋势；纵轴代表血压变化，横 轴代表时间点（min)。
[0035] 图3为阿托品不同剂量下收缩压平均数随时间变化趋势；纵轴代表血压变化，横 轴代表时间点（min)。
[0036] 下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述 而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本 领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细 节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
[0037] 实施例1复方麻醉剂的制备
[0038] 复方麻醉剂中各组分及含量为：每100mL复方麻醉剂中各组分的含量为右旋美托 咪陡15mg，咪达唑仑135mg，轻考酮7mg，磷酸二氢钾680mg，氢氧化钠116. 4mg，余量为注射 用水。
[〇〇39] 复方麻醉剂的制备方法，包括以下步骤：将右旋美托咪啶、咪达唑仑、羟考酮、磷酸 二氢钾、氢氧化钠依次溶于注射用水中，再加入注射用水稀释，过滤，灌封于安瓿瓶内，经高 压灭菌，即得。
[0040] 实施例2复方麻醉剂的制备
[0041] 复方麻醉剂中各组分及含量为：每100mL复方麻醉剂中各组分的含量为右旋 美托咪陡15mg，咪达唑仑135mg，轻考酮7mg，阿托品14mg，磷酸二氢钾680mg，氢氧化钠 116. 4mg，余量为注射用水。
[〇〇42] 复方麻醉剂的制备方法，包括以下步骤：将右旋美托咪啶、咪达唑仑、羟考酮、阿托 品、磷酸二氢钾、氢氧化钠依次溶于注射用水中，再加入注射用水稀释，过滤，灌封于安瓿瓶 内，经高压灭菌，即得。
[0043] 实施例3复方麻醉剂的制备
[0044] 复方麻醉剂中各组分及含量为：每100mL复方麻醉剂中各组分的含量为右旋美托 咪啶15mg，咪达唑仑135mg，羟考酮6. 5mg，余量为注射用水。
[0045] 复方麻醉剂的制备方法，包括以下步骤：将右旋美托咪啶、咪达唑仑、羟考酮依次 溶于注射用水中，再加入注射用水稀释，过滤，灌封于安瓿瓶内，经高压灭菌，即得。
[0046] 实验动物
[0047] SD大鼠180只，2-2. 5月龄，雌雄各半，体重258 ± 23g，由黑龙江省中医药大学实验 动物中心提供，在同一条件下饲养4周进行试验，整个试验过程中饲养管理条件保持一致。
[0048] SJL品系小白鼠60只，1月龄，雌性，体重22±3g，由哈尔滨医科大学实验动物中心 提供，同一条件下饲养2周后进行实验。
[0049] 白兔4只，1月龄，雌雄不限，体重分别为1. 8kg和2. 1kg，由黑龙江中医药大学实 验动物中心提供，同一条件下饲养2周后进行实验。
[0050] 实验例1复方麻醉剂的组分及用量筛选实验
[0051] 一、复方麻醉剂的药物种类初步筛选实验
[0052] ( -）实验方法
[0053] 1.镇静效果监测及评价标准
[0054] 大鼠麻醉后，分别观察用药后5min、10min、20min和30min时的镇静效果。观察眨 眼、耳动、躯体动、头颈动、尾动。
[0055] 对声音刺激反应明显，如给药前，记" + " ；对声音刺激反应迟钝，记" 土";对声音刺 激无反应，记"一"。
[0056] 评分方法：" + "计0分，" 土"计1分，"一"计2分。
[0057] 2.镇痛效果监测及评价标准
[0058] 主要通过针刺鼻唇部、躯干、四肢上部、爪部、尾部进行评价。
[0059] 针刺各部疼痛反应明显，记" + " ；疼痛反应迟钝，记" 土"；疼痛反应消失，记"一"。
[0060] 评分方法：" + "计0分，" 土"计1分，"一"计2分。
[0061] 3.肌松效果监测及评价标准
[0062] 观察头颈部、尾、四肢、咬肌和腹壁肌肉松弛程度。
[0063] 用镊子夹尾提起时如出现回头和转身反应、四肢出现明显滑动，刺激四肢尚能爬 行，记" + ";夹尾提起时出现转头、同时四肢轻度滑动，记" 土";无回头和转身反应，记"一"。
[0064] 夹耳提起时如尾可弯曲至水平位置或上翘时，记" + ";如尾出现弯曲反应，记" 土"； 尾自然下垂，记"一"。
[〇〇65] 用镊子夹住耳朵提起，如四肢出现挣扎，记" + " ；四肢轻度滑动，记" 土"；四肢自然 下垂，记" 一"。
[〇〇66] 夹耳提起时如后腹部无明显变化，记" + ";后腹部略有膨大松弛，记" 土";后腹部明 显膨大松弛，记"一"。
[〇〇67] 咬肌松弛轻拉上、下颌，口腔可顺利打开，记" + "； 口腔可打开，但很快可恢复者，记 " ± " ；不能够打开或打开后立即恢复者，记"一"。
[0068] 评分方法：" + "计0分，" 土"计1分，"一"计2分。
[0069] (二）实验结果
[0070] 表1中的实验结果为20min时（此时麻醉效果较为稳定）每组中所有试验动物的 得分总和（单项最高分值为20只X 10分=200分）。
[0071] 表1注药后20min大鼠麻醉效果观察（η = 20)
[0072]