一种可载药的低分子量水溶性壳聚糖纳米粒子的制备方法 [0001][0003]壳聚糖是自然界中唯一的天然的碱性多糖，其基本单位为葡萄糖胺，不溶于水、碱性溶液或普通有机溶剂，但可溶于盐酸、硝酸、甲酸、乙酸等稀酸，壳聚糖以其优良特性，例如生物相容性、降解性、无毒性、吸附性、来源丰富等，已在医药、食品、化工、农业、环保等领域得到广泛应用，并于1991年被日本、美国、欧洲等地的医学界和营养食品研究机构认定为在碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素、矿物质之后的第六大生命要素。[0004]壳聚糖具有生物相容性、无毒性和生物粘附性，可使药物在局部保持高浓度，且可打开上皮粘膜的紧密连接，增强药物在粘膜的渗透作用。壳聚糖纳米粒子比微米粒子具有更多优越性，可使大分子顺利通过上皮组织，促进药物的渗透吸收，适当的表面修饰使它对特定器官或病灶具有靶向作用。尤其适用于口服或粘膜等更为方便的给药途径，可延长药物在体内的循环时间，有效地提高药物的生物利用度，减少副作用。[0005]由于常用的壳聚糖分子量大、粘度高，无法在生理pH条件下溶解，限制了壳聚糖作为疫苗载体的应用。而低分子量的壳聚糖及其纳米粒的细胞毒性较低，纳米粒子可显著增加A549细胞的摄取作用。[0006]目前在制备纳米粒子过程中必须将乙酸作为增溶剂，而乙酸环境对生物活性药物产生了严重的影响。这些缺点主要与壳聚糖的N-乙酰化度、分子量等物化性质有关。
[0007]本发明的目的是提供一种工艺简单可行、所得的纳米粒子平均粒径小的可载药的低分子量水溶性壳聚糖纳米粒子的制备方法，
本发明提供的一种可载药的低分子量水溶性壳聚糖纳米粒子的制备方法，该方法包括如下步骤:
a、将水溶性壳聚糖溶于去离子水中配置浓度2-10mg/ml的水溶性壳聚糖溶液；
b、依次加入浓度0.1-0.3mg/ml的牛血清蛋白水溶液和浓度0.1-0.3mg/ml的三聚磷酸钠水溶液，室温搅拌条件下，自发生成载药纳米粒子；
其中，水溶性壳聚糖溶液、牛血清蛋白水溶液和三聚磷酸钠水溶液的体积比为1:(0.1-0.3):(0.1-0.3)。
[0008]在上述中，牛血清蛋白水溶液的浓度优选为0.2mg/ml，三聚磷酸钠水溶液的浓度优选为0.2mg/ml。水溶性壳聚糖溶液、牛血清蛋白水溶液和三聚磷酸钠水溶液的体积比优选为 1:0.2:0.2。
[0009]本发明具有的有益效果:在中性条件下获得水溶性壳聚糖纳米颗粒，对牛血清蛋白等药物存在缓释效果，因此，该壳聚糖颗粒有望成为一些药物的缓释载体，在医药研究中用于制备缓释药物制剂。

[0010]下述实施例中，水溶性壳聚糖的分子量为6.3 kDa、脱乙酰度为90.7%;配制牛血清蛋白水溶液的牛血清蛋白的分子量为68kDa。
[0011]实施例1
将水溶性壳聚糖溶于去离子水中配成5 ml的2mg/ml的水溶性壳聚糖溶液。在室温和磁力搅拌条件下，依次加入浓度0.2mg/ml的牛血清蛋白水溶液Iml和浓度0.2mg/ml的三聚磷酸钠水溶液lml，室 温搅拌条件下，自发生成载药纳米粒子。所得的载药纳米粒子的平均粒径为 135.5 ±10.2 nm。
[0012]实施例2
将水溶性壳聚糖溶于去离子水中配成5 ml的2.8mg/ml的水溶性壳聚糖溶液。在室温和磁力搅拌条件下，依次加入浓度0.2mg/ml的牛血清蛋白水溶液Iml和浓度0.2mg/ml的三聚磷酸钠水溶液lml，室温搅拌条件下，自发生成载药纳米粒子。所得的载药纳米粒子的平均粒径为99.7 ±9.4 nm。
[0013]实施例3
将水溶性壳聚糖溶于去离子水中配成5 ml的3.6mg/ml的水溶性壳聚糖溶液。在室温和磁力搅拌条件下，依次加入浓度0.2mg/ml的牛血清蛋白水溶液Iml和浓度0.2mg/ml的三聚磷酸钠水溶液lml，室温搅拌条件下，自发生成载药纳米粒子。所得的载药纳米粒子的平均粒径为110.2± 11.3 nm。
[0014]实施例4
将水溶性壳聚糖溶于去离子水中配成5 ml的4mg/ml的水溶性壳聚糖溶液。在室温和磁力搅拌条件下，依次加入浓度0.2mg/ml的牛血清蛋白水溶液Iml和浓度0.2mg/ml的三聚磷酸钠水溶液lml，室温搅拌条件下，自发生成载药纳米粒子。所得的载药纳米粒子的平均粒径为55.1 ±8.7 nm。
[0015]实施例5
将水溶性壳聚糖溶于去离子水中配成5 ml的6mg/ml的水溶性壳聚糖溶液。在室温和磁力搅拌条件下，依次加入浓度0.2mg/ml的牛血清蛋白水溶液Iml和浓度0.2mg/ml的三聚磷酸钠水溶液lml，室温搅拌条件下，自发生成载药纳米粒子。所得的载药纳米粒子的平均粒径为 127.3 ±10.7nm。
[0016]实施例6
将水溶性壳聚糖溶于去离子水中配成5 ml的7mg/ml的水溶性壳聚糖溶液。在室温和磁力搅拌条件下，依次加入浓度0.2mg/ml的牛血清蛋白水溶液Iml和浓度0.2mg/ml的三聚磷酸钠水溶液lml，室温搅拌条件下，自发生成载药纳米粒子。所得的载药纳米粒子的平均粒径为124.7 ±9.9nm。
[0017]实施例7
将水溶性壳聚糖溶于去离子水中配成5 ml的8mg/ml的水溶性壳聚糖溶液。在室温和磁力搅拌条件下，依次加入浓度0.2mg/ml的牛血清蛋白水溶液Iml和浓度0.2mg/ml的三聚磷酸钠水溶液lml，室温搅拌条件下，自发生成载药纳米粒子。所得的载药纳米粒子的平均粒径为111.7 ±8.7nm。
[0018] 实施例8
将水溶性壳聚糖溶于去离子水中配成5 ml的10mg/ml的水溶性壳聚糖溶液。在室温和磁力搅拌条件下，依次加入浓度0.2mg/ml的牛血清蛋白水溶液Iml和浓度0.2mg/ml的三聚磷酸钠水溶液1ml，室温搅拌条件下，自发生成载药纳米粒子。所得的载药纳米粒子的平均粒径为135.5 ±10.2nm。