专利名称：抗凝血蚕蛹壳聚糖衍生物的制备方法在抗血栓和体外抗凝血治疗中一般使用肝素，其广泛存在于肺、肝、脾等器官中， 原料来源有限，价格昂贵、制备工艺复杂，而且有致出血的副作用。壳聚糖具有良好的生物相容性，可自然降解，无毒、无刺激。由于壳聚糖分子结构 中含有活性的氨基和羟基，极易对其改性，在生物医药领域已有广泛应用。壳聚糖硫酸酯是 目前研究较多的壳聚糖衍生物类抗凝剂，但有轻微毒性，因此制备新型的壳聚糖基抗凝衍 生物具有很重要的意义。
本发明的目的在于提供一种抗凝血蚕蛹壳聚糖衍生物的制备方法。我国蚕业资源 丰富，蚕蛹易于制备高纯度、高脱乙酰度的医药级壳聚糖；另外，钙离子在多个凝血环节上 都具有促凝血作用，是很多凝血因子的激活剂。基于以上两点，对用蚕蛹提取的壳聚糖分子 进行修饰，把具有增加壳聚糖溶解性的基团一羧基等引入壳聚糖分子，并使引入的基团与 壳聚糖自身的活性基团相互增效，达到增加溶解性，同时增强壳聚糖分子对钙离子的螯合 性能，降低血液中钙离子含量从而达到抗凝的效果。本发明的主要技术路线是首先将氨基酸制成含活性卤的反应中间体，然后再和蚕 蛹壳聚糖反应，制得对钙离子具有螯合性能的壳聚糖氨基酸类衍生物。此类衍生物的通式 为CS-B-R，其中，CS为从蚕蛹中提取的含有一 NH2和一 OH等活性基团的壳聚糖分子；B为 羟丙基、乙基等连接基；R为含有-NH、-COOH等能与钙离子络合的分子链段。本发明一种抗凝血蚕蛹壳聚糖衍生物的制备方法，通过以下步骤实现(1)卤代氨基酸活性中间体的制备用适量的碱溶液调节氨基酸PH至9. (Γ10. 0制备氨基酸盐溶液，向氨基酸盐溶液中逐 滴滴加环氧氯丙烷或1，2 - 二卤乙烷，保持4(T60 °C充分搅拌至反应液由乳浊液变为淡 黄色澄清状，用盐酸中和至中性，经乙醇、丙酮重结晶后得到卤代氨基酸活性中间体；(2)蚕蛹壳聚糖氨基酸类衍生物的制备将壳聚糖分散于质量比浓度为50%的氢氧化钠溶液中，壳聚糖与质量比浓度为50%的 氢氧化钠溶液的质量体积比为Ig :20mL，于-18 °C条件下碱化M h，滤去氢氧化钠，将碱化 壳聚糖分散于大极性溶剂中，加入步骤(1)所得中间体的饱和水溶液，于5(T80 °C条件下 搅拌反应3飞h，过滤除去未反应的中间体，乙醇洗涤，真空干燥得蚕蛹壳聚糖的氨基酸衍 生物；上述方法步骤(1)所述的氨基酸为CH2 (NH2) C00H、CH3CH (NH2) COOH或HOCH2CH (NH2) COOH ；所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾或其任意组合任意比例的混合物；氨基酸与环氧氯丙烷或1，2 - 二卤乙烷的摩尔比为1 广1 2，以1 1为佳。上述方法步骤(2)所述的壳聚糖为蚕蛹壳聚糖，也可为虾、蟹壳壳聚糖；所述大极 性溶剂为水或异丙醇或其任意比混合物；所述中间体与壳聚糖的摩尔比为1 广1 5，以 1 1为佳。本发明合成的抗凝剂生物粗品可直接用于生物止血，也可经提纯后应用。本发明的优点是，以蚕蛹提取的壳聚糖为原料，通过接枝对钙离子具有螯合作用 的氨基(或胺基)和羧基，制备的壳聚糖氨基酸衍生物，可改善壳聚糖在水中的溶解性，避 免壳聚糖在酸中溶解对人体造成的二次伤害，使抗凝剂对血液的抗凝率得到进一步提高。 该方法原料来源广泛、价格低廉、制备简单，制备的产品无毒副作用。

按1 :1的摩尔比称取甘氨酸和环氧氯丙烷，用适量的氢氧化钠溶液中和甘氨酸至PH = 9. 0，制得甘氨酸钠溶液加入到三角瓶中，向三角瓶中缓慢滴加环氧氯丙烷，同时充分搅拌， 此时溶液为水油混合的乳浊液状，控制反应在50°C下进行，继续搅拌至溶液变为淡黄色澄 清状，用盐酸中和至中性。经过乙醇、丙酮重结晶，旋转蒸发后得到中间体。称取2. 0 g蚕蛹壳聚糖，置于200 mL烧杯中，加入质量比浓度为50%的氢氧化钠 溶液40 mL，在-18 °C冰箱碱化对h，滤去氢氧化钠，将碱化壳聚糖分散于60 mL水中，加入 4.2 g上述中间体的饱和水溶液，60 °C搅拌4 h，过滤除去未反应的中间体，用乙醇洗涤，真 空干燥得壳聚糖甘氨酸衍生物。实施例2
按1:2的摩尔比称取α-氨基丙酸和1，2 -二卤乙烷，用适量的氢氧化钾溶液中和 α-氨基丙酸至PH = 9. 5，制得α-氨基丙酸钠溶液加入到三角瓶中，向三角瓶中缓慢滴加 1，2 -二卤乙烷，同时充分搅拌，此时溶液为水油混合的乳浊液状，控制反应在60°C下进 行，继续搅拌至溶液变为淡黄色澄清状，用盐酸中和至中性。经过乙醇、丙酮重结晶，旋转蒸 发后得到中间体。称取2.0 g蚕蛹壳聚糖，置于200 mL烧杯中，加入质量比浓度为50%的氢氧化钠溶 液40 mL，在-18 °C冰箱碱化对h，滤去氢氧化钠，将碱化壳聚糖分散于40 mL水和20 mL 异丙醇的混合溶剂中，加入3. 4 g上述中间体的饱和水溶液，80 °C搅拌3 h，过滤除去未反 应的中间体，用乙醇洗涤，真空干燥得壳聚糖的α -氨基丙酸衍生物。实施例3:
按1 :1的摩尔比称取丝氨酸和环氧氯丙烷，用适量的碳酸钠溶液中和甘氨酸至PH = 10.0，制得丝氨酸钠溶液加入到三角瓶中，向三角瓶中缓慢滴加环氧氯丙烷，同时充分搅 拌，此时溶液为水油混合的乳浊液状，控制反应在40°C下进行，继续搅拌至溶液变为淡黄色 澄清状，用盐酸中和至中性。经过乙醇、丙酮重结晶，旋转蒸发后得到中间体。称取2. 0 g蚕蛹壳聚糖，置于200 mL烧杯中，加入质量比浓度为50%的氢氧化钠溶液40 mL，在-18 °C冰箱碱化对h，滤去氢氧化钠，将碱化壳聚糖分散于60 mL水中，加入 5.6 g上述中间体的饱和水溶液，50 °C搅拌6 h，过滤除去未反应的中间体，用乙醇洗涤，真 空干燥得壳聚糖的丝氨酸衍生物。


本发明涉及一类具有抗凝血活性蚕蛹壳聚糖衍生物CS-B-R的制备方法，其中，CS为从蚕蛹中提取的含有－NH2和－OH等活性基团的壳聚糖分子；B为羟丙基、乙基等连接基；R为含有-NH、-COOH等能与钙离子络合的分子链段。先以相应的氨基酸与环氧氯丙烷或1,2–二卤乙烷制备具有卤代活性基的中间体，再与从蚕蛹中提取的壳聚糖反应得到产物。这类衍生物制备工艺简单，能直接溶于水中，有优良的抗凝血效果，而且生物相容性好，具有广阔的医用应用前景。