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白树总生物碱及多羟基生物碱化合物的提取、分离及用途制作方法

  • 专利名称
    白树总生物碱及多羟基生物碱化合物的提取、分离及用途制作方法
  • 发明者
    刘泉, 孙素娟, 晏仁义, 王洪庆, 申竹芳, 陈若芸
  • 公开日
    2012年5月23日
  • 申请日期
    2010年11月4日
  • 优先权日
    2010年11月4日
  • 申请人
    中国医学科学院药物研究所
  • 文档编号
    A61K36/47GK102462726SQ201010535060
  • 关键字
  • 权利要求
    1.一种白树总生物碱的制备方法,其特征在于包括以下步骤(1)白树药材经干燥并适当粉碎,用溶剂提取,过滤,得滤液;其中所述溶剂选自水、醇类溶剂或水与醇类溶剂的混合物;(2)将步骤(1)中的滤液在常压或减压下加热浓缩,得浓缩液;(3)向上述浓缩液中加入醇类溶剂进行沉淀,离心或过滤除去不溶物,将得到的上清液浓缩至无醇,得浓缩物;(4)将步骤(3)中的浓缩物上阳离子交换树脂柱进行纯化,用碱性水溶液进行洗脱,洗脱液经减压浓缩得阳离子树脂洗脱物;(5)将步骤(4)中的阳离子树脂洗脱物用适量水溶解,上阴离子交换树脂柱进行纯化, 用水进行洗脱,收集洗脱液,并将其浓缩、干燥得干粉,即为白树总生物碱2.根据权利要求1所述的制备方法,其中的醇类溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇或它们的混合物3.根据权利要求2所述的制备方法,其中所述的醇类溶剂优选为乙醇4.根据权利要求1所述的制备方法,其中提取溶剂优选为水5.根据权利要求1所述的制备方法,其中提取溶剂的用量为白树药材重量的5至15倍6.根据权利要求1至5任一项所述的制备方法,其中的提取方式为冷浸提取、温浸提取、回流提取、超声提取或微波提取7.根据权利要求1所述的制备方法,其中步骤(1)的提取过程可以重复1至4次,然后合并所得滤液8.根据权利要求1所述的制备方法,其中所述提取是在60°C至溶剂的回流温度的范围内进行9.根据权利要求1所述的制备方法,其中步骤(3)中加入的醇类溶剂的量为使醇的体积百分比为40%至80%10.根据权利要求1所述的制备方法,其中步骤(4)中的阳离子交换树脂为交联聚苯乙烯系的强酸型树脂,其型号选自 001X4、001X7、001X14、Amberlite IR 120,Dowex 50X422511.根据权利要求1所述的制备方法,其中步骤(4)中所述的碱性水溶液选自氨水或二乙胺、吡啶、2-甲基吡啶、三甲基吡啶或N-乙基吗琳的水溶液,浓度为0. 2至2N12.根据权利要求11所述的制备方法,其中步骤(4)中所述的碱性水溶液优选为IN的氨水13.根据权利要求1所述的制备方法,其中步骤( 中所述的阴离子交换树脂为交联聚苯乙烯系的强碱型树脂,其型号选自201X4、201X7、Amberlite IRA-401和Dowex 1X414.根据权利要求1至13任一项所述的制备方法得到的白树总生物碱15.一类多羟基生物碱化合物,其为16.权利要求15所述的多羟基生物碱的制备方法,其包括将权利要求14所述的白树总生物碱用Dowex 50X4强酸性阳离子树脂分离,0. 5Ν氨水洗脱,分离得到五个部分; 然后,将每个部分依次经强碱性阴离子树脂Dowexl X 2,用蒸馏水洗脱;羧甲基葡聚糖凝胶 C-25(CM Sephadex C-25),0. OlN氨水洗脱;弱酸型阳离子交换树脂Amberlite CG-50,水洗脱;可分离得到权利要求15所述的化合物1-1717.一种具有糖苷酶或糖基转移酶抑制活性的药物组合物,其特征在于含有有效剂量的权利要求14所述的白树总生物碱以及药学上可接受的载体18.一种具有糖苷酶或糖基转移酶抑制活性的多羟基生物碱药物组合物,其包含至少一种选自权利要求15所述的化合物以及药学上可接受的载体19.权利要求14所述的白树总生物碱在制备预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、 病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用20.权利要求15所述的多羟基生物碱化合物在制备预防治和/或疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用
  • 技术领域
    本发明涉及从白树中提取分离得到的具有糖苷酶或糖基转移酶抑制活性的白树总生物碱以及一系列多羟基生物碱化合物,以该白树总生物碱或所述多羟基生物碱化合物为活性成分的药物组合物,以及它们在制备预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用
  • 背景技术
  • 专利详情
  • 全文pdf
  • 权力要求
  • 说明书
  • 法律状态
专利名称:白树总生物碱及多羟基生物碱化合物的提取、分离及用途的制作方法多羟基生物碱(polyhydroxy alkaloid)又称氮杂糖(azasugar)、亚氨基糖 (iminosugar)或糖型生物碱(sugar-mimic alkaloid),指糖环上氧原子被氮原子取代而形成的一类化合物,可看作糖的模拟物,其广泛存在于植物与微生物中(参见Watson,AA; Fleet, GffJ ;Asano, N ;Molyneux, RJ ;Nash, RJ Phytochemistry. 2001,56,265-295)。药理学研究已经证实多羟基生物碱具有高效的糖苷酶和糖基转移酶抑制活性,糖苷酶和糖基转移酶在肠道的消化、糖蛋白加工、溶酶体代谢等生理过程中起着十分重要的作用,因此多羟基生物碱具有抗糖尿病、抗癌、抗病毒、治疗溶酶体贮积症等多种药理活性(参阅^Uz, AE Iminosugars as Glycosidase Inhibitors :Nojirimycinand Beyond, ffiley-VCH, ffeinheim, New York,1999 ;Compain, P ;Martin, OR Iminosugars :From synthesis to therapeutic applications, John Wiley& Sons Ltd,2007)。Ye, XS 等最近发现氮杂糖类化合物具有较好的免疫抑制活性(参见Ye, XS ;Sun, F ;Liu, M ;Li, Q ;Wang,YH ;Zhang, GS ; Zhang,LH ;Zhang, XL J. Med. Chem. 2005,48,3688)。因此,这类化合物引起了各国学者的广泛兴趣。1996年米格列醇(miglitol)片上市,作为第二代α -葡萄糖苷酶抑制剂用于治疗 II型糖尿病,其具有胃肠道不良反应发生率更低等优点。2003年ZavescaTM上市,成为第一个口服治疗戈谢病(Gaucher disease,又称葡萄糖脑苷脂贮积病)的药物。与此前唯一的治疗方法-酶替代疗法相比,具有给药方便,价格便宜等优点。因此,研究开发新的氮杂糖类药物是非常必要的,且具有重要意义。白树,拉丁名为Suregada glomerulata(BL.),大戟科白树属植物。乔木,高2-13 米;小枝带灰黑色或褐色。叶片革质,宽或狭长椭圆形,或少倒卵形或倒披针形,长5-12厘米,宽3-6厘米,全缘,顶端急尖或钝或圆,稀凹缺,基部渐狭,中脉在两面突起,侧脉每边 5-10条;托叶靠近花序,宽三角形,较厚,长约1毫米,宽2毫米,顶端钝,下部的托叶早落; 叶柄长3-8毫米(海南植物志,陈焕镛主编第二卷,第一版1965年,P177)。中国医学科学院药物研究所在前期的研究中发现白树水提取物具有很好的 α-葡萄糖苷酶抑制活性。并申请了专利“白树提取物、其制备方法及其组合物与用途”,申请号为02155523,该专利已于2004年6月23日获得国家专利局授权。本发明是在前一专利的基础上进行的进一步创新
本发明的一方面提供了一种白树总生物碱,其具有糖苷酶或糖基转移酶抑制活性。本发明的另一方面提供了上述白树总生物碱的制备方法。本发明的另一方面提供了一系列多羟基生物碱化合物。本发明的又一方面提供了上述多羟基生物碱化合物的制备方法。本发明的又一方面提供了一种药物组合物,其包括有效剂量的作为活性成分的白树总生物碱及药学上可接受的载体。本发明的再一方面提供了一种药物组合物,其包括有效剂量的作为活性成分的多羟基生物碱及药学上可接受的载体。本发明的再一方面涉及白树总生物碱及其组合物在预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用。本发明的再一方面涉及上述多羟基生物碱化合物在预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用。为解决本发明的技术问题,本发明采用如下技术方案1、白树总生物碱的制备一种白树总生物碱的制备方法,其特征在于包括以下步骤(1)白树药材经干燥并适当粉碎,用溶剂提取,过滤,得滤液;其中所述溶剂选自水、醇类溶剂或水与醇类溶剂的混合物;(2)将步骤(1)中的滤液在常压或减压下加热浓缩,得浓缩液;(3)向上述浓缩液中加入醇类溶剂进行沉淀,离心或过滤除去不溶物,将得到的上清液浓缩至无醇,得浓缩物;(4)将步骤(3)中的浓缩物上阳离子交换树脂柱进行纯化,用碱性水溶液进行洗脱,洗脱液经减压浓缩得阳离子树脂洗脱物;(5)将步骤中的阳离子树脂洗脱物用适量水溶解,上阴离子交换树脂柱进行纯化,用水进行洗脱,收集洗脱液,并将其浓缩、干燥得干粉,即为白树总生物碱。其中,步骤(1)中将白树药材经干燥并适当粉碎,以利增大与溶剂的接触面积,提高效率;用于提取白树药材的溶剂可以为水、醇类溶剂或水与醇类溶剂的混合物;醇类溶剂包括但不仅限于甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇或它们的混合物;优选的醇类溶剂为乙醇;优选的提取溶剂为水与乙醇的混合溶剂,乙醇的体积百分比优选为40%至80% ;更优选,用水作为白树药材的提取溶剂。所述提取溶剂的用量为白树药材重量的5至15倍,优选为白树药材重量的10倍。提取方式可以为冷浸提取、温浸提取、加热提取、回流提取、超声提取和微波提取,优选加热提取,更优选回流提取;提取温度优选60°C至溶剂的回流温度。步骤 (1)的提取过程可重复1至4次,优选为3次。步骤O)中的浓缩过程优选在减压状态下进行。步骤(3)为醇沉淀过程,加入的醇类溶剂的量为使醇的体积百分比为40%至 80%,优选40%至60%;优选的醇类溶剂为乙醇。醇沉淀后,过滤或离心得上清液,然后,将该上清液减压浓缩至无醇,得浓缩物。步骤中的阳离子交换树脂优选为交联聚苯乙烯系的强酸型树脂,其型号包括但不仅限于 OOlX4、001 X7、001 X 14、Amberlite IR 120、Dowex50X4 和 krolit 225,优6选的型号为001X7。将步骤C3)中的浓缩物上样后,优选先用水洗去不吸附的杂质,然后用碱性水溶液进行洗脱;所述碱性水溶液包括但不仅限于氨水或二乙胺、吡啶、2-甲基吡啶、 三甲基吡啶或N-乙基吗琳的水溶液;优选为氨水;碱性水溶液的浓度为0. 2至2N,优选为 IN0洗脱液经减压浓缩,得阳离子树脂洗脱物,其为棕黄色膏状物。步骤(5)中的阴离子交换树脂优选为交联聚苯乙烯系的强碱型树脂,其型号包括但不仅限于 201 X4、201 X7、Amberlite IRA-401 和 Dowex 1 X4,优选的型号为 201 X7 ;洗脱溶剂为水,优选为蒸馏水或去离子水。收集到的洗脱液经减压浓缩、真空干燥或冷冻干燥成干粉,或者将收集液直接喷雾干燥成型制成干粉,即为白树总生物碱。2、多羟基生物碱化合物的制备前述制备得到的白树总生物碱经进一步的分离纯化,可以制备得到一系列多羟基生物碱化合物。其制备方法包括以下步骤将上面制得的白树总生物碱用Dowex 50X4强酸性阳离子树脂分离,0. 5N氨水洗脱,分离得到五个部分;然后,将每个部分依次经强碱性阴离子树脂Dowex IX 2,用蒸馏水洗脱;羧甲基葡聚糖凝胶C-25 (CM Sephadex 02 ,0. OlN氨水洗脱;弱酸型阳离子交换树脂Amberlite CG-50,水洗脱,即可分离得到17个新的多羟基生物碱化合物。在洗脱分离过程中采用薄层硅胶检测,展开剂为正丁醇-醋酸-水及异丙醇-醋酸-水。分离得到的17个多羟基生物碱化合物经波谱分析,特别是经过多种二维谱的分析,确定它们的化学结构和立体构型如下本发明涉及从白树中提取分离得到的具有糖苷酶或糖基转移酶抑制活性的白树总生物碱以及一系列多羟基生物碱化合物,以该白树总生物碱或所述多羟基生物碱化合物为活性成分的药物组合物,以及它们在制备预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用。

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