专利名称：化合物的制作方法图1和附图2中可看出，在这两个测定的参数方面，化合物2比妥卡雷琐更有效。本发明化合物的免疫刺激作用也可用于与其它抗病毒治疗例如抗病毒药物或疫苗联合施用来治疗一些病毒疾病。初次感染后，许多类型病毒与细胞核惨合，并长时间不活动。致癌基因病毒例如乙肝病毒和丙肝病毒、一些逆转录病毒和一些乳头状瘤病毒可引起癌症。在这些潜伏期，非常难以治愈病毒感染。这些病毒经常被免疫反应引发以引起病毒血症，并且在该阶段，可以清除病毒感染。苯甲醛衍生物引发免疫反应的能力可用于与抗病毒药物或疫苗联合使用以治疗这些疾病。本发明的主要目的是提供预防和/或治疗癌症的新化合物。本发明的另一目的是提供用于预防或治疗癌症且无毒性副作用的化合物。本发明的第三个目的是提供有效且有益于预防和/或治疗肝癌(原发性及由其它癌症如结肠直肠癌的肝转移)的化合物。预防治疗对阻止乙肝或丙肝患者发展为肝癌也很重要。本发明的第四个目的是提供有效且有益于预防和/或治疗具有对相应的糖部分有亲和性的受体的组织和细胞中的癌症的化合物。本发明的第五个目的是提供能有效且有益地预防和/或治疗肾癌的化合物。本发明的第六个目的是提供有效且有益于预防和/或治疗肺癌的化合物。
本发明的第七个目的是提供有效且有益于预防和/或治疗胰腺癌的化合物。
本发明的这些和其它目的可通过权利要求书实现。
本发明化合物是4，6-O-(亚苄基-d1)-D-吡喃葡萄糖(化合物2)、4，6-O-亚苄基-L-吡喃葡萄糖(化合物3)和4，6-O-(亚苄基-d1)-L-吡喃葡萄糖(化合我4)或其可药用盐。
化合物3和4是新化合物。
发明详述在下文中通过实施例和表格及附图进一步解释本发明。
附图描述附图1数据代表这样的实验，其中在37℃用化合物2(Δ)或妥卡雷琐(●)将NHIK 3025-细胞处理20小时，同时附着在塑料Petri培养皿上。存活分数表示处理后能形成肉眼可见集落的细胞的分数。每一点代表5个平行培养皿的集落数目的平均值。当标准误差大于符号的大小时标出。
附图2在37℃用化合物2(■)或妥卡雷琐(▲)将NHIK 3025-细胞处理1小时相对于未处理的NHIK3025细胞的蛋白合成速度。通过药物处理开始后第一个小时期间掺入的[3H]-缬氨酸的量测定蛋白合成速度。蛋白合成速度是相对于细胞中总蛋白量测定的。数据是以一式四份进行的一个实验的代表数据。标准误差在超过符号大小时显示。
附图3用化合物2(■)或亚苄维C(2H)(▲)处理的相对于未处理的Panc-1细胞的蛋白合成速率。蛋白的合成速率是通过在开始处理后第一个小时期间掺入的[3H]-缬氨酸的量来测定的。蛋白合成速率是相对于细胞中总蛋白量测定的。标准差小于符号的大小。
附图4暴露于不同苯甲醛衍生物的细胞的中值粘着力。将细胞暴露于1 mM浓度的化合物1和2中。
附图5将在Ex Vivo 10培养基中的外周血液单核细胞和超级抗原暴露于苯甲醛、氘代苯甲醛、化合物2或亚苄维C(2H)中。通过测定在不同药物浓度下掺入的含氚胸腺嘧啶脱氧核苷来测定外周血液单核细胞的增殖。
附图6通过腹膜内注射使脾侵入Friend红白血病病毒来感染NMRI小鼠。通过每天腹膜内施用5mg/kg化合物2来治疗感染和未感染的小鼠。治疗19天后，切下并取出脾脏进行称重。
附图7尸体解剖时具有肝肿瘤组织动物的分数。
附图8在显示肿瘤反应的动物中每一肝脏的平均肿瘤物量。
附图9对于每一组每只动物的平均体重增长曲线。时间坐标代表动物的年龄。为使曲线清晰仅表示出了几次测量的标准偏差。
附图10在该图中，在大小轴上用对数标度将肝脏肿瘤的发生率和大小绘在同一曲线上。
附图11表示的是化合物1和2对肝脏侵入的人结肠直肠肿瘤C170HM2的作用。
附图12通过测定从加入测试化合物后立即开始(实心符号)或2小时后开始(空心符号)的1小时脉冲期间掺入的[3H]-缬氨酸的量，来测定用化合物1或化合物3处理的人子宫颈癌细胞NHIK 3025的蛋白合成速度。
附图13通过测定从加入测试化合物后立即开始(实心符号)或2小时后开始(空心符号)的1小时脉冲期间掺入的[3H]-缬氨酸的量，来测定用化合物2或化合物4处理的人子宫颈癌细胞NHIK 3025的蛋白合成速度。
附图14表示的是，用化合物1(●)或化合物3(○)处理20小时后，通过测定人子宫颈癌细胞NHIK 3025的集落形成能力来测定细胞存活。
附图15表示的是，用化合物2(○)或化合物4(▲)处理20小时后，通过测定人子宫颈癌细胞NHIK 3025的集落形成能力来测定细胞存活。
附图16表示的是，用L-葡萄糖(●)或化合物3(○)处理20小时后，通过测定人乳腺癌细胞T47-D的集落形成能力来测定细胞存活。
表格描述表2正常和癌组织中的组织观察。第一组未治疗对照。
表3正常和癌组织中的组织观察。第二组安慰剂。
表4正常和癌组织中的组织观察。第三组每公斤每天85mg化合物2。 制备众所周知，醛在酸促下与醇进行缩合反应产生醛缩醇。同时形成副产品水。该反应是可逆的，并且在溶液中形成平衡的醛/醇和醛缩醇/水混合物。平衡的位置主要取决于每一物质的活性和浓度。为了使反应完全，通常从反应混合物中除去一种产物(醛缩醇或水)。
在本专利申请中，D(+)或L(-)葡萄糖与苯甲醛或与苯甲醛等价物缩合形成相应的亚苄基葡萄糖醛。特别优选的是再缩醛化作用策略，其中使用被保护的苯甲醛作为其缩二甲醇代替苯甲醛本身。然后形成副产物甲醇。将反应混合物在减压下适度加热以除去所形成的甲醇。在多种情况下，这些反应条件将驱使平衡平稳地向醛缩醇产物方向进行。
糖的缩醛化作用通常导致产生区域异构体和立体异构体的混合物。还可以发生缩环转化，得到吡喃糖和呋喃糖的混合物，并且在某些情况下形成二-缩醛化加合物。结果是，除非采用保护策略，通常会得到复杂的反应混合物。然而，经过适当地处理后，用液相色谱分离，或者在大量合成中优选用结晶技术，出人意料地制备了纯的产物级分。用GC-MS-光谱和各种NMR技术对产品进行了鉴定。
具体的反应条件、溶剂和催化剂可根据实验者的偏爱进行改变。催化剂可以是无机酸例如硫酸，有机酸例如对甲苯磺酸，酸性离子交换树脂例如大孔树脂15、路易斯酸矿物粘土例如蒙脱石K-10或载于树脂上的酸例如Nafion NR 50。反应可以方便地在偶极非质子传递溶剂如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮或二甲氧基乙烷等中进行。在二甲基甲酰胺中的对甲苯磺酸是优选的并且是最多使用的反应条件。
氘代化合物可以如上所述进行制备，不同的是由苯甲醛-d1的缩二甲醇开始。氘代苯甲醛的制备可以使用氘气在氘代溶剂中通过修改的罗森蒙德反应进行，如在EP 0 283 139 B1中所述。
下列实施例用于说明如何制备本发明化合物。化合物1∶4，6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖如对化合物2所述，由未氘代苯甲醛缩二甲醇开始，制备现有的化合物。通过在DMSO-d6中进行的1H NMR光谱进行结构确定δrel.to TMS7.58-7.29(5H，m，Ar-H)，6.83(0.4H，d，OH-1-β)，6.60(0.6H，d，OH-1-α)，5.61(1H，s+s，acetal-H)，5.25(0.4H，d，OH-3-β)，5.21(0.4H，d，OH-2-β)，5.62(0.6H，d，OH-3-α)，5.00(0.6H，H-1-α)，4.82(0.6H，d，OH-2-α)，4.49(0.4H，t，H-1-β)，4.18-4.02(1H，m，H-6-α+β)，3.89-3.77(0.6H，m，H-5-α)，3.75-3.57(1.6H，m，H-6＂-α+βand H-3-α)，3.45-3.27(2.5H，m，H-3-β，H-4-α+β，H-5-βand H-2-α)and 3.11-3.00(0.4H，m，H-2-β).化合物24，6-O-(亚苄基-d1)-D-吡喃葡萄糖如EP 0 283 139 B 1所述制备苯甲醛-d1并转化为苯甲醛缩二甲醇-d1。在EP 0 283 139 B 1中也描述了4，6-O-(亚苄基-d1)-D-吡喃葡萄糖的制备，不同的是此时优先按照另一种得到高纯度的方法制备该化合物
将D(+)-葡萄糖(706g，3.92mol)、苯甲醛缩二甲醇-d1(571g，3.73mol)、无水DMF(1.68kg)和对甲苯磺酸(4.5g，24mmol)在通过冷却回流冷凝器部分连有真空泵的干馏装置中混合。在30托，将机械搅拌的混合物温热至最高69℃以蒸馏出甲醇，2小时后，收集235g。然后关闭回流冷凝器，并使温度升至最高73℃以蒸馏出DMF。再过2小时后，收集得到另外的1385g馏分，并中断蒸馏。
使残余物冷却至约40℃，并用5分钟加入冰/水(2.9L)。温度降至低于0℃，并且形成沉淀，部分为大块状。将该混合物转入烧杯中，并再加入8-9L冰/水以使块状物分散形成悬浮液。该悬浮液经二个凹口滤器过滤，并使两个滤饼在连有喷水真空的滤器上保留过夜，经反转漏斗，用氮气清洗每一滤饼。将滤饼涂布在两个板上，并在32℃、于真空炉中干燥20小时。真空开始设置为13mbar，然后下调至1mbar。
将粗产物重结晶(用以除去二亚苄基缩醛)并用水洗涤(以除去DMF和葡萄糖)，直至除去这些污染物。因此，将粗产物(500g)溶解在热的二噁烷(800ml)中，并通过折叠滤器将该溶液加入煮沸的氯仿(9L)中。首先使该溶液冷却至室温，然后在冰浴中过夜。滤出沉淀，在滤器上干燥2小时(如上所述用氮气清洗)，并在旋转蒸发器中、于31℃和真空下进一步干燥过夜。将产物(142g)悬浮在冰/水(1L)中，经上下真空滤器过滤(用200ml冰/水洗涤)，并如上所述在滤器上干燥过夜。然后研磨，过筛(0.5mm栅格尺寸)，并在旋转蒸发器中、于31℃真空干燥5小时。将产物(96g)再一次悬浮在冰/水(500ml)中，过滤(用150ml冰/水洗涤)并干燥(用氮气清洗7小时)。最后在研钵中研磨，过筛(0.5mm)并在真空炉中干燥。
产物为白色，经HPLC分析表明，产物为细分散的高纯度粉末。产量为95g，是理论值的10％。在DMSO-d6中进行的NMR表明α与β端基异构体的比例约为7∶3。1H-and13C NMR(DMSO-d6)，δrel.to TMS7.55-7.28(5.00H，m，Ar-H)，6.85(0.27H，d，OH-1-β)，6.58(0.71H，d，OH-1-α)，5.24(0.27H，d，OH-3-β)，5.19(0.28H，d，OH-2-β)，5.61(0.71H，d，OH-3-α)，4.99(0.72H，H-1-α)，4.82(0.71H，d，OH-2-α)，4.48(0.29H，t，H-1-β)，4.20-4.04(1.04H，m，H-6′-α+β)，3.88-3.73(0.78H，m，H-5-α)，3.73-3.56(1.72H，m，H-6＂-α+β and H-3-α)，3.46-3.21(2.61H，m，H-3-b，H-4-α+β，H-5-βand H-2-α)and3.09-2.99(0.28H，m，H-2-β)；137.881，128.854，128.042，126.435(Ar-C).100.462(aαetal-C)，97.642(C-1-β)，93.211(C-1-α)，81.729(C-4-α)，80.897(C-4-β)，75.796(C-2-β)，72.906(C-2-αand C-3-β)，69.701(C-3-α)，68.431(C-6-α)，68.055(C-6-β)，65.810(C-5-β)and 62.032(C-5-α).化合物34.6-O-亚苄基-L-吡喃葡萄糖在蒸馏装置内将L-(-)-葡萄糖(5.0g，27.8mmol)、苯甲醛缩二甲醇(4.66g，30.6mmol)和对甲苯磺酸(32mg，0.17mmol)在无水DMF(20ml)中混合。将水泵经由短路径连接在真空下除去甲醇和DMF。该无色悬浮液在55℃于0.5小时内溶解，将所得溶液在120mbar下搅拌0.5小时，同时将温度逐渐增加至65℃。将真空增加至最大，并将该反应混合物进一步蒸发45分钟。在蒸馏结束时将温度增加至75℃。残余物是淡黄色糖浆状物，通过加入NaHCO3(29mg)将其中和，并冷却。
将粗产物溶于甲醇(10ml)中，并在反相RP-8柱上纯化，用甲醇/水1∶1洗脱。合并产物级分，并蒸发以除去甲醇。将残余溶液用水进一步稀释，并冷冻干燥。收集得自3批单独操作的白色蓬松固体，总共获得了2.42g产物，为理论值的32.5％。
硅烷化样品的GC色谱分析表明产物由比例为35/65的两种异构体(α和β异头物)组成。DMSO-d6中的1H NMR位移与4，6-O-亚苄基-D-吡喃葡萄糖类似
7.51-7.30(5H，m，Ar-H)，6.86(0.6H，broad s，OH-1-β)，6.58(0.3H，broad s，OH-1-α)，5.58(0.9H，s+s，acetal-H-α+β)，5.23(0.7H，d，OH-3-β)，5.20(0.6H，d，OH-2-β)，5.11(0.4H，d，OH-3-α)，5.00(0.4H，H-1-α)，4.82(0.3H，d，OH-2-α)，4.47(0.7H，d，H-1-β)，4.21-4.08(1H，m，H-6′-α+β)，3.87-3.73(0.4H，m，H-5-α)，3.73-3.59(1.3H，m，H-6＂-α+β and H-3-α)，3.46-3.22(3.7H，m，H-3-β，H-4-α+β，H-5-βand H-2-α)and 3.09-2.99(0.6H，m，H-2-β).化合物44.6-O-(亚苄基-d1)-L-吡喃葡萄糖将L-葡萄糖(5.14g，28.6mmol)在DMF(20ml)中加热至95℃直至形成澄清溶液。然后将该反应瓶转移到65℃的水浴中，并加入对甲苯磺酸(33mg，0.17mmol)。然后在80mbar的调控水泵真空下，用20分钟以上通过注射器将亚苄基缩二甲醇d1(4.7ml，31mmol)滴加到该搅拌着的葡萄糖溶液中。然后将DMF在真空下(2mbar)于65℃蒸发，获得颜色非常浅的黄色油状物，向其中加入NaHCO3(345mg)，然后搅拌5分钟。在65℃、搅拌(磁珠)下将温水(67℃，15ml)加到该油状物中，并在温水浴中振摇烧瓶直至油状物看上去溶解。然后将该反应瓶在冷水流下放置大约5分钟。仅1或2分钟后形成了无定形物。将该含水混合物置于冰水浴中，并静置40分钟。通过真空过滤分离出所形成的白色沉淀(从无定形物质倾出)，用冷的泉水(25ml)洗涤，然后用冷的异丙醇(5℃，2×5ml)洗涤，并在氮气流下干燥，获得1.85g干燥的白色粉末。将该产物硅烷化，并通过气相色谱分析，结果表明目的产物的纯度是99％。1H NMR，δ(DMSO-d6)rel.to TMS7.55-7.25(m，5H，Ar-H)，6.85(s，0.48H，OH-1-β)，6.55(s，0.33H，OH-1-α)，5.25(d，0.48H，OH-3-β)，5.20(d，0.49H，OH-2-β)，5.10(d，0.35H，OH-3-α)，4.98(d，0.35H，H-1-α)，4.82(d，0.34H，OH-2-α)，4.48(d，0.51H，H-1-β)，4.20-4.05(m+m，0.53H+0.42H，H-6′α+β)，3.85-3.73(m，0.44H，H-5-α)，3.72-3.57(m，1.27H，H-6＂-α+βand H-3-α)，3.45-3.20(m，7.8H，H-3-β，H-4-α+β，H-5-βand H-2-α)and3.10-2.98(m，0.56H，H-2-β).生物实验从附图1中可看出，化合物2比妥卡雷琐引起较多的细胞灭活。
从附图2中可看出，化合物2比妥卡雷琐引起较强的蛋白合成抑制。
从图3中可以看出化合物2产生的蛋白合成抑制作用比亚苄维C(2H)强。在这一实验中所用的细胞是源于在E2a介质中长成的人类胰腺癌Panc-1细胞(Lieber等，Int.J.Cancer，15741-747，1975)。
将施加在每个细胞上的最大力作为从把细胞接种在基质上开始的时间的函数记录。附图4显示的是，对于暴露于化合物1或化合物2中的细胞，一组19次测定的中值力，以及没有暴露于这些化合物中中的细胞的粘着力对平均时间的函数关系。化合物2在该浓度下在降低粘着力上显示强的作用，而化合物1没有表现出显著反应。化合物的作用主要是降低细胞粘着力，而不是影响粘着时间。
粘着在基质上的能力的下降可能与阻断了整联蛋白介导的细胞固定有关。已经表明这样的阻断可在肝细胞瘤和黑素瘤癌中诱导细胞程序死亡(Paulsen JE，Hall KS，Rugstad HE，Reichelt KL和ElgjoK，合成的肝肽焦谷氨酰基谷氨酰基甘氨酰基丝氨酰天冬酰胺和焦谷氨酰基谷氨酰基甘氨酰基丝氨酰天冬氨酸抑制移植到buffalo大鼠和无胸腺大鼠中的MH1C1大鼠肝细胞瘤细胞的生长.Cancer Res.52(1992)1218-1221.和Mason MD，Allman R和Quibell M“Adhesionmo1ecules in melanoma-more than just superglue？”J.Royal Soc.Med.89(1992)393-395.)。
将在化合物1和2的溶液中的细胞预培养后，测定NHIK 3025细胞与基质之间的粘着力。甚至在1 mM浓度下，也表现出令人惊奇的D-同位素效应。令人惊讶的是，化合物2将粘着力显著降低至对照的1/3，而化合物1没有显著降低粘着力。本发明者们认为，化合物2可能干扰整联蛋白的生物合成，降低细胞粘着在基质上的能力。整联蛋白是结构跨膜蛋白，其对于细胞粘着到细胞外基质上和细胞-细胞相互作用是至关重要的。因此抑制整联蛋白的功能可直接影响癌细胞的转移能力。该实验表明整联蛋白对蛋白合成抑制尤其敏感。因此，化合物2可很好地用于阻止癌恶化中的转移过程。
实验设计如下10只未感染的对照小鼠10只感染的对照小鼠用化合物2治疗的5只未感染小鼠用化合物2治疗的10只感染小鼠每天给小鼠腹膜内注射一次，注射19天。从6月1日开始直到6月16日它们被处死时，没有给予任何治疗。在6月16日，将小鼠处死。取出血液(用于将来分析)。取出脾并称重(参见下表1)。将一小片脾在氮中冷冻以切成薄的切片，并且用福尔马林将一小片脾固定。表1
结果还参见附图6。
我们可以看到，感染小鼠与未感染对照小鼠的脾重量有显著差异。用化合物2治疗的未感染小鼠的脾重量比未感染对照小鼠的脾重量大，虽然这种差异并不显著。我们注意到，与用化合物2治疗的未感染小鼠相比，用化合物2治疗的感染小鼠实际上具有更低的平均脾重量(对于此，我们假定这种结果是由于对照组中的一只小鼠具有比较大的脾所致)。
组织学检查表明，未感染对照具有正常的脾解剖学。在感染的未治疗组中，所有动物都在红髓中发生了病理性白血病细胞的侵袭。未感染的化合物2治疗动物的脾具有肥大的生发中心，这意味着免疫刺激的表达。从化合物2治疗的感染组中没有发现脾的白血病变化。
结果促使我们考虑小鼠中FLV的攻击性质，并且也在用叠氮基胸腺嘧啶脱氧核苷和其它抗病毒治疗获得的结果与该作用进行比较时。实施例5外周血液单核细胞的增殖本发明者们进行了实验，其中是将外周血液单核细胞暴露于超级抗原以及苯甲醛、氘代苯甲醛、化合物2或亚苄维C(2H)中。超级抗原用作T细胞增殖的强活性标准，并经由抗原呈递细胞呈递给T细胞。
该实验证明(见附图5)通过加入苯甲醛、氘代苯甲醛、或化合物2，外周血液单核细胞的增殖以钟形剂量依赖方式显著增加，而对于亚苄维C(2H)则观察到了非常小的作用。我们能够增加超级抗原的增殖信号的事实表明这些化合物通过另外的共刺激作用作用于T细胞。
将56只动物随机分成4组，每组14只动物，并按下列每日静注药物剂量进行治疗第一组对照组，不注射第二组安慰剂组，只注射盐水第三组85mg/kg的化合物2第四组100mg/kg的亚苄维C(2H)治疗按5周周期循环头三周每天静脉注射，然后停2周。总共进行9次完整的5周循环治疗。从第一次治疗到治疗结束和尸体解剖的整个周期为11个月。
在尸体解剖时，大约估计肝脏肿瘤的体积，但不彻底切除肝物质。在福尔马啉中固定后，John M.Nesland教授(Norwegian Radium医院病理学科主任)首先通过切除和目测检查组织精确估计肿瘤块，然后对肿瘤组织(主要呈现在肝脏中)及来自所有相关器官和组织的正常组织进行组织学检查。
在每一动物中从组织学上检查了多病灶及恶化前的结的发生率。结果通过在尸体解剖时患肝肿瘤的动物的频率分析肿瘤药物作用，结果表明，与安慰剂治疗组相比在化合物2治疗组中患肝肿瘤的动物的频率明显降低。通过单侧Fischers准确试验分析得出p-值为0.05。如果将两对照组合并到一起共28只对照动物，其中25只发展为肝癌，而14只化合物2治疗动物中7只发展为肝癌。在这种情况下动物数量对于卡方检验足够高，该检验表明差异是显著的，P＝0.015。在亚苄维C(2H)治疗组中14只动物中的11只发展为肝癌。只比对照组少一只，差异不显著。
肝脏肿瘤的大小从图7和图8很容易分析。其中可以看出化合物2发挥了有说服力的作用在安慰剂对照组中50％的动物具有总共大于10cm3的肝癌，而化合物2组中的动物没有这样大的癌(卡方检验p＝0.0038)。此外，在化合物2组中只有3只动物(即21％)具有总共大于1cm3的癌，而在安慰剂组中有10只动物(即71％)超过了这一限度(Fischers准确检验P＝0.0002)。因此，对化合物2而言，考虑肿瘤体积比只分析癌发展的频率更能清楚地看出抗癌作用。
图9表示每组动物从部分肝切除和亚硝胺处理(时间0)开始整个过程的平均体重测定。体重测量和正常组织的组织学评价都清楚的表明无副作用。体重增长曲线的牙边型(图9)无疑是由于治疗，而不是由于药物。相反注射本身影响动物，因为只用盐水治疗的动物具有与用盐水和药物治疗的动物完全相同的体重变化特征。
在11个月中静脉注射210次治疗的动物显示出体重的影响并不令人惊奇对于每一次注射将动物在电热灯泡下稍稍温热，此后固定在一个特别制造的夹子中以能够注射。尽管这一过程在一个安静的房间进行并由受过训练使动物平静的专业人员实施，但并不令人惊奇这将在动物中产生一种生物反应。
涉及副作用研究的一个方面是源于身体各器官的正常组织的组织学评价。这一相当深入的研究很容易从表2到表4(已附)总结出。没有发现任何与药物治疗有关的异常。值得注意的是即使是大鼠尾巴，在此局部区域每天进行静脉注射达如此长的时间，也没有受到治疗的伤害。
然而，从肝脏肿瘤发生前损害的频率得出一个有意义的结论表2到表4所有动物发展为多病灶。这种损害被认为是肝脏恶性发展过程中的一个早期阶段，并且未观察到受药物治疗的影响。此外，在所有组中都存在肝脏肿瘤发生前结的出现，虽然这局限于少数动物。因此，这些数据表明对这一损害没有任何药物作用，这进一步加深了化合物2在肝脏中真正发挥癌症特异性作用的印象。
在图10中用大小轴的对数标度将肝脏肿瘤的频率和大小绘制在同一曲线上。肝脏中发展为肿瘤的频率对照组和安慰剂组各14只动物中发展为癌症的动物的数量分别为13和12只(表2和3)。在第三组(85mg/kg化合物2)14只动物中仅有7只发展为肝癌(表4)。在统计学检验第二组(安慰剂组)和第三组的差别中例数对卡方检验太少。但是，可进行单侧Fishers准确检验，并表明两组关于肝肿瘤频率的表现显著不同(p＝0.05)。但如果我们将对照组(第一组)中未治疗的动物也包括在检验中，在统计学上这一差异更大。那样的话28只对照动物中的25只发展为肝癌，并且可进行卡方检验。在这种情况下第三组与对照组的差异是显著的，p＝0.015。
在第四组(100mg/kg亚苄维C(2H))中14只动物中的11只发展为肝癌。仅比安慰剂组少一只，没有显著差异。这样，通过分析发展为肝癌的频率我们得出结论用化合物2治疗能显著降低发展为肝癌的频率，而用亚苄维C(2H)治疗无这种效果。发展的肝癌的大小从图10中可以很容易的分析肝脏肿瘤的大小，但也在表2到表4中给出。在这里可以看出化合物2发挥了有说服力的作用在对照组和安慰剂组中50％的动物具有总共大于10cm3的肝癌，而在化合物2组中没有动物具有如此大的癌(卡方检验p＝0.0038)。此外，在化合物2组中仅有3只动物(即21％)具有总计大于1cm3的癌，而在安慰剂组和对照组中分别有10和13只动物(即71和93％)的癌高于此限度(Fishers准确检验分别为p＝0.0002和p＝0.011)。
因此，将肿瘤大小考虑在内比只分析癌症发展的频率更清楚的看出化合物2的抗癌作用。实际上，当只主要进行目测动物肝脏就可在尸体解剖时明显看出这一作用。
即使考虑肿瘤的大小，对于用亚苄维C(2H)治疗的动物，这一作用较用化合物2治疗的动物弱得多。用亚苄维C(2H)治疗的动物中具有大于1cm3的肝癌的动物数是7。如用化合物2治疗的动物所进行的检验，对于对照组和安慰剂组的显著性检验表明p值分别为0.036和0.44。因此，当与未治疗的对照比较时，差异是显著的，而当与安慰剂组比较时，很清楚差异是不显著的。在此应该考虑到安慰剂组中3只动物具有肿瘤恰刚好1cm3，如果比较的水平选为0.5cm3，将对安慰剂组也会有显著性差异(见图10)。然而，这一分析表明亚苄维C(2H)的作用弱，并且可能在显著性的限度上。此外，对于具有大于3大约5cm3肿瘤的动物，亚苄维C(2H)治疗组和对照或安慰剂组动物之间没有差异。
在另外的实验中，给大鼠给药亚苄维C(2H)和化合物2仅10天，肝脏肿瘤的组织学检验表明用亚苄维C(2H)治疗的动物无变化，而5只用化合物2治疗的动物中2只肿瘤坏死增加。表2正常组织和癌组织的组织学观察第一组未治疗对照组
缩写NF进行了组织学观察，所见正常MF多病灶no指无坏死*对一些动物的左腿前爪进行了显微镜检查.Normal findings were done in all cases.表3正常组织和癌组织的组织学观察第二组安慰剂组
缩写NF进行了组织学观察，所见正常MF多病灶no指无坏死*对一些动物的左腿前爪进行了显微镜检查。Normal findings were done in all cases.表4正常组织和癌组织的组织学观察第3组化合物285mg/kg天
缩写NF 进行了组织学观察，所见正常MF 多病灶DFF 弥散病灶变化OLIGL间胶质瘤GRANU肉芽瘤*动物编号15气管中具有鳞状细胞瘤。该瘤为囊性并在一定程度上囊性区域(+)呈坏死性外表。动物编号20肝脏中具有囊性变性变化。实施例7对裸鼠中肝脏侵袭性结肠直肠癌的作用材料和方法所评价的细胞系C170HM2是建立的人结肠直肠细胞系(S.A.Watson等人，Eur.J.Cancer 29A(1993)，1740-1745)，并且最初源自患者的原发肿瘤。在37℃、5％CO2以及湿润条件下，将C170HM2细胞在体外保持在含有10％(v/v)热灭活胎牛血清(Sigma，Poole，UK)的RPMI 1640培养基(Gibco，Paisley，UK)中。用0.025％EDTA从半融合单层中收集细胞，并在上述培养基中洗涤2次。
将从半融合细胞单层中收集的C170HM2细胞以1×106/ml的浓度重悬在无菌磷酸盐缓冲盐水pH7.4[PBS]中，并以1ml体积注射到20 MFI雄性裸鼠(在the University of Nottingh的Cancer StudiesUnit中心饲养的)的腹膜腔内。通过电子标记系统(RS BiotechDL2000 Datalogger)标识小鼠。细胞注射后第10天，将小鼠随机分配以改变安慰剂对照组(n＝2只小鼠)或实验组(n＝6/组)。
组1化合物15mg/kg(n＝2只小鼠)30mg/kg(n＝2只小鼠)90mg/kg(n＝2只小鼠)组2化合物25mg/kg(n＝2只小鼠)30mg/kg(n＝2只小鼠)90mg/kg(n＝2只小鼠)从第10天开始将药物静脉内(iv)给药直至治疗结束。在细胞移植后第40天终止实验。在整个实验期间定期称重小鼠。
终止治疗后，将肝脏暴露，计数可见的肝脏肿瘤数目，并测定其总的横断面面积。还给肿瘤照相。没有发生任何肿瘤液化，因此将其从正常肝脏组织上解剖下来，称重并固定在缩甲醛盐水中。解剖下来腹膜结，测定其横断面面积和重量。进行肿瘤的详细病理评定。
化合物1和2对人结肠直肠肿瘤C170HM2的肝脏侵袭作用如附图11所示。
附图13表示的是，通过测定从加入测试化合物后立即开始(实心符号)或2小时后开始(空心符号)的1小时脉冲期间掺入的[3H]-缬氨酸的量，来测定人子宫颈癌细胞NHIK 3025的蛋白合成速度。测试化合物，化合物2和化合物4从时间0到脉冲结束时都存在。用[14C]-缬氨酸将细胞预标记至少4天以使所有标记的细胞蛋白饱和。掺入的[3H]的量与掺入的[14C]的量有关，因此蛋白合成计算为细胞中蛋白总量的百分比。蛋白合成速度以占未处理对照的百分比来表示。蛋白合成的绘制曲线值代表4个同时且类似处理的孔的平均值。在所有情况下，当超过符号的大小时，标准误差由垂直棒表示。这些数据表明，化合物2和化合物4在大约相同水平上引起有效的蛋白合成抑制。如附图12所示，这两种氘代化合物都比其相应的未氘代化合物更有效。细胞存活附图14表示的是，用化合物1(●)或化合物3(○)处理20小时后，通过测定人子宫颈癌细胞NHIK 3025的集落形成能力来测定细胞存活。将细胞在敞口塑料Petri培养皿中在CO2恒温箱中于37℃处理。绘制曲线的存活值代表5个同时且类似处理培养皿的平均值。在所有情况下，当超过符号的大小时，标准误差由垂直棒表示。从该数据可知，这两种化合物的剂量回应曲线具有不同形状，这表明在以低浓度灭活细胞方面，化合物3比化合物1更有效。曲线形状的不同意味着这两种药物具有不同的细胞灭活机制。
附图15表示的是，用化合物2(○)或化合物4(▲)处理20小时后，通过测定人子宫颈癌细胞NHIK 3025的集落形成能力来测定细胞存活。将细胞在敞口塑料Petri培养皿中在CO2恒温箱中于37℃处理。绘制曲线的存活值代表5个同时且类似处理培养皿的平均值。在所有情况下，当超过符号的大小时，标准误差由垂直棒表示。在灭活细胞方面，尤其是在低剂量区，化合物4比化合物2更有效。例如，分别用0.5mM化合物4和4mM化合物2处理后，细胞存活降至50％，这表明在该特定作用水平上，化合物4的灭活效力比化合物2高8倍。在10％的存活水平上，该差异要小得多。
附图16表示的是，用L-葡萄糖(●)或化合物3(○)处理20小时后，通过测定人乳腺癌细胞T47-D的集落形成能力来测定细胞存活。将细胞在敞口塑料Petri培养皿中在CO2恒温箱中于37℃处理。绘制曲线的存活值代表5个同时且类似处理培养皿的平均值。在所有情况下，当超过符号的大小时，标准误差由垂直棒表示。该数据表明，L-葡萄糖在最高达至少10mM的浓度下(最高测试剂量)对细胞存活具有很小或没有任何作用。化合物3在最高达2mM的剂量下对细胞存活几乎没有作用，但是在较高浓度下会引起显著的灭活作用，在8mM该化合物存在下，20小时后1000个细胞仅存活1个。结论所测试的两种L-吡喃葡萄糖衍生物(化合物3和4)都比相应的D-吡喃葡萄糖衍生物(化合物1和2)更有效地灭活细胞。然而，L-葡萄糖自身在测试浓度下没有引起任何显著的细胞灭活作用。因此，是在亚苄基衍生物范畴内发现L葡萄糖的作用比D葡萄糖强。给药本发明药物组合物可在抗癌治疗中给药。
为了这一目的，本发明化合物可以适于给患者施用的任意方式单独或者与合适的药物载体或辅料一起配制。
尤其优选制备作为口服制剂或非胃肠道用制剂用于系统治疗的制剂。
合适的肠内制剂有片剂、胶囊剂例如软或硬明胶胶囊、粒剂、细粒剂或粉剂、糖浆剂、悬浮剂、溶液剂或栓剂。这样的制剂可按照本领域已知方法通过将一种或多种本发明化合物与无毒、惰性、固体或液体载体混合而制得。
本发明化合物的合适的非胃肠道给药用制剂是注射或输注溶液。
当局部给药时，可将化合物配制成含有该化合物与无毒、惰性、固体或液体局部制剂用载体的混合物的洗剂、软膏剂、霜剂、凝胶剂、酊剂、喷雾剂等。尤其适于使用保护活性组分不受空气、水等影响的制剂。
制剂可含有惰性或药效活性添加剂。例如片剂或粒剂可含有一系列粘合剂、填充剂、载体和/或稀释剂。液体制剂可以以例如无菌溶液的形式存在。除了活性组分以外，胶囊可含有填充剂或增稠剂。此外，还可以使用味道改善剂以及防腐剂、稳定剂、保湿剂和乳化剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂以及其它添加剂。
制剂的给药剂量可依据适应症、使用方式和给药途径、以及患者的需求而改变。对于成人患者的系统治疗，日剂量一般为约0.01-500mg/kg体重，每天给药一次或两次，优选0.5-100mg/kg体重，每天给药一次或两次，最优选1-20mg/kg体重，每天给药一次或两次。
如果需要的话，该化合物的药物制剂可含有抗氧化剂例如生育酚、N-甲基生育胺、丁基化的羟基茴香醚、抗坏血酸或丁基化的羟基甲苯。


本发明涉及可用作抗癌剂的苯甲醛衍生物。有些本发明化合物是新化合物。