专利名称：一种快速提高颗石藻内β-葡聚糖含量的培养方法葡聚糖在细菌、真菌、高等植物以及微藻等生物体中都有代谢累积，具有抗肿瘤、抗感染、降低胆固醇、增强防护系统、噬菌作用以及免疫调节等功能，是动物饵料添加剂、保健食品添加剂和活性免疫制剂的重要原料。从不同生物来源中提取葡聚糖，其得率、纯度以及活性大小也都不同，因此，人们仍然在致力于筛选具有稳定高含量和高生物活性的不同生物来源的葡聚糖。海洋微藻(如角毛藻、金藻3011和颗石藻)是海洋生物资源的重要组成部分，由于海洋微藻生长速度快，更新周期短，不占用耕地等优势，是海洋资源开发的重要对象。β -葡聚糖是藻类光合作用代谢产物，因此，从快速生长的微藻中生产制备高含量、高纯度和高生物活性的葡聚糖，是综合开发利用海洋微藻资源系列生产中的一个组成部分。颗石藻又称圆石藻或球石藻，分布在温度较低的冷水海域，适宜生长温度为15 25°C。如授权公告号为CN100375783，名称为圆石藻的室外大面积养殖和加式方法的发明专利，就公开了通过一级育苗、二级扩种、三级扩种、室外培养以密度10 15万 cell/ml接种于盐度(NaCl的重量含量)为2. 5 3. 0%、PH为7 9的海水培养液，该海水培养液中还添加有N、P、C和!^e元素，其中NaNO3浓度为0. 3 0. 8毫摩尔/升，K2HPO4浓度为0. 03 0. 08毫摩尔/升，培养至密度IO6 /毫升采收，该发明只是针对圆石藻的育种和扩种及圆石藻成熟体中增加钙和不饱和脂肪酸含量的培养方法，需要N、P、C和!^e等元素。 目前未发现提高葡聚糖含量的微藻培养的公开报道，更未针对颗石藻中葡聚糖含量提高的培养方法报道，通常颗石藻成熟体的葡聚糖为20.36pg/Cell (干重计)左右， 得率(β -葡聚糖纯糖重量/藻粉重量)为0. 31%左右。发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种β -葡聚糖含量显著提高，且纯度较高的快速提高颗石藻内葡聚糖含量的培养方法。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为一种快速提高颗石藻内β -葡聚糖含量的培养方法，包括将颗石藻苗接种于盐度为25 30%。的海水培养液，在温度为15 25°C，光照强度为2000 5000 Lux培养条件下培养，在采收颗石藻成熟体前5 10小时， 在所述海水培养液中添加浓度为5g/L的磷酸二氢钠溶液，所述海水培养液与所述磷酸二氢钠溶液的体积比为1000: 0. 8 1. 2。在所述海水培养液中所述颗石藻苗的接种密度为1. 9 2. IX 105cell/ml。所述海水培养液中盐度为25 沈％0。所述培养条件中温度为21 23°C，光照强度为2500 3000 Lux0在于所述海水培养液与磷酸二氢钠溶液的体积比为1000: 1。与现有技术相比，本发明的优点在于一种快速提高颗石藻内β -葡聚糖含量的培养方法，包括将颗石藻苗接种于盐度为25 30%。的海水培养液，在温度为15 25°C，光照强度为2000 5000 Lux培养条件下培养，在采收颗石藻成熟体前5 10小时，在海水培养液中添加浓度为5g/L的磷酸二氢钠溶液，海水培养液与磷酸二氢钠溶液的体积比为1000: 0. 8 1. 2。这样在采收前最后5 10小时，是颗石藻成熟体的细胞密度最大时期，添加磷酸二氢钠使颗石藻成熟体快速代谢，β -葡聚糖增殖迅速，累积率高，而培养5 10小时后就采收，消耗也较少，颗石藻成熟体内的β-葡聚糖含量就较大，达到22pg/Cell (干重计) 以上，纯度也达纯度为93%以上，生物活性较高；因此本发明是一种β -葡聚糖含量显著提高，且纯度较高的快速提高颗石藻内β-葡聚糖含量的培养方法。

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1一种快速提高颗石藻内β -葡聚糖含量的培养方法，以2. OX 105cell/ml接种密度将颗石藻苗接种于盐度为25 沈％。的海水培养液中，在温度为21 23°C，光照强度为 2500 3000 Lux培养条件下培养，在采收颗石藻成熟体前8小时，在海水培养液中添加浓度为5g/L的磷酸二氢钠溶液，海水培养液与磷酸二氢钠溶液的体积比为1000:1，培养8小时至颗石藻成熟体采收，这样得到的颗石藻成熟体内β-葡聚糖含量为22.54pg/Cell (干重计)左右，得率(β -葡聚糖纯糖重量/藻粉重量)为0. 348%左右，纯度为94. 21%。
实施例2一种快速提高颗石藻内葡聚糖含量的培养方法，一种快速提高颗石藻内葡聚糖含量的培养方法，以1. 9Χ 105cell/ml接种密度将颗石藻苗接种于盐度为沈 观％。的海水培养液中，在温度为15 20°C，光照强度为3000 5000 Lux培养条件下培养，在采收颗石藻成熟体前5小时，在海水培养液中添加浓度为5g/L的磷酸二氢钠溶液海水培养液与磷酸二氢钠溶液的体积比为1000: 1. 2，培养5小时至颗石藻成熟体采收，这样得到的颗石藻成熟体β -葡聚糖为22. 26pg/cell (干重计)左右，得率(β -葡聚糖纯糖重量/藻粉重量)为0. 343%左右，纯度为93. 94%。
实施例3一种快速提高颗石藻内葡聚糖含量的培养方法，一种快速提高颗石藻内葡聚糖含量的培养方法，以2. 1 X 105cell/ml接种密度将颗石藻苗接种于盐度为观 30%。的海水培养液中，在温度为23 25°C，光照强度为2000 3000 Lux培养条件下培养，在采收颗石藻成熟体前10小时，在海水培养液中添加浓度为5g/L的磷酸二氢钠溶液，海水培养液与磷酸二氢钠溶液的体积比为1000: 0. 8，培养10小时至颗石藻成熟体采收，这样得到的颗石藻成熟体β -葡聚糖为22. 32pg/cell (干重计)左右，纯度为93. 43%。
对比例1与实施例1基本相同，所不同的只是在采收颗石藻成熟体前8小时，海水培养液中未添加磷酸二氢钠溶液，最后得到的颗石藻成熟体β-葡聚糖为20.36pg/Cell (干重计)左右， 得率(β -葡聚糖纯糖重量/藻粉重量)为0. 31%左右，纯度为91. 65%。
对比例2与实施例1基本相同，所不同的只是在采收颗石藻成熟体前8小时，海水培养液中添加磷酸二氢钠溶液由浓度为75 g/L的NaNO3溶液替代，最后得到的颗石藻成熟体β -葡聚糖为19. 89pg/cell (干重计)左右，得率(β -葡聚糖纯糖重量/藻粉重量)为0. 307%左右， 纯度为89. 73%。
从实施例与对比例比较就可以看出，实施例中β-葡聚糖含量比对比例显著提高，纯度也增加，生物活性增强，说明在颗石藻成熟体的细胞密度最大时期，在1000L海水培养液中添加浓度为5g/L的磷酸二氢钠溶液0. 8 1. 2L，有利于β -葡聚糖迅速增殖，同时葡聚糖消耗也较少，这样采收的颗石藻葡聚糖得率较高，纯度较大。


本发明公开了一种快速提高颗石藻内β-葡聚糖含量的培养方法，包括将颗石藻苗接种于盐度为25～30‰的海水培养液，在温度为15～25℃，光照强度为2000～5000Lux培养条件下培养，在采收颗石藻成熟体前5～10小时，在海水培养液中添加浓度为5g/L的磷酸二氢钠溶液，海水培养液与磷酸二氢钠溶液的体积比为1000:0.8～1.2。这样在采收前最后5～10小时，是颗石藻成熟体的细胞密度最大时期，添加磷酸二氢钠使颗石藻成熟体快速代谢，β-葡聚糖增殖迅速，累积率高，而5～10小时就采收，消耗也较少，颗石藻成熟体内的β-葡聚糖含量就较大，达到22pg/cell以上，纯度也达纯度为93%以上，生物活性较高。