芳基哌嗪和芳基哌啶及其作为金属蛋白酶抑制剂的应用制作方法

B·C·巴拉姆, R·I·多维尔, N·J·纽科姆, H·塔克, D·瓦特森

2003年3月19日

2001年2月15日

2000年2月21日

阿斯特拉曾尼卡有限公司

A61K31/496GK1404474SQ0180538

芳基 哌嗪 哌啶 金属 作为

1.式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯 其中B为在3-或4-位由卤素或三氟甲基一取代的，或在3-或4-位由卤素(可以相同或不同)二取代的苯基；或者B为在4-、5-或6-位由卤素、三氟甲基、氰基或C1-4烷基一取代的2-吡啶基或2-吡啶氧基；或者B为在6-位由卤素或C1-4烷基任选取代的4-嘧啶基；X为碳或氮原子；R1为三甲基-1-乙内酰脲C2-4烷基或三甲基-3-乙内酰脲C2-4烷基；或者R1为在3-或4-位由卤素、三氟甲基、硫或C1-3烷基或C1-3烷氧基一取代的苯基或C2-4烷基苯基；或者R1为苯基-SO2NHC2-4烷基；或者R1为2-吡啶基或2-吡啶基C2-4烷基；或者R1为3-吡啶基或3-吡啶基C2-4烷基；或者R1为2-嘧啶-SCH2CH2；或者R1为由卤素、三氟甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、由卤素取代的2-哌嗪基或由卤素任选取代的2-哌嗪基C2-4烷基之一任选一取代的2-或4-嘧啶基C2-4烷基2.权利要求1的化合物或其可药用盐或其体内可水解酯，其中B为在3-或4-位由卤素或三氟甲基一取代的，或在3-或4-位由卤素(可以相同或不同)二取代的苯基；或者B为在5-或6-位由卤素、三氟甲基或氰基一取代的2-吡啶基或2-吡啶氧基；或者B为在6-位由卤素或C1-4烷基任选取代的4-嘧啶基；X为碳或氮原子；R1为三甲基-1-乙内酰脲C2-4烷基或三甲基-3-乙内酰脲C2-4烷基；或者R1为在3-或4-位由卤素、三氟甲基、硫或C1-3烷基或C1-3烷氧基一取代的苯基或C2-4烷基苯基；或者R1为苯基-SO2NHC2-4烷基；或者R1为2-吡啶基或2-吡啶基C2-4烷基；或者R1为3-吡啶基或3-吡啶基C2-4烷基；或者R1为2-嘧啶-SCH2CH2；或者R1为由卤素、三氟甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、2-哌嗪基或2-哌嗪基C2-4烷基之一任选一取代的2-或4-嘧啶基C2-4烷基3.权利要求1的化合物或其可药用盐或其体内可水解酯，其中B选自4-氯苯基、4-氟苯基、4-溴苯基、4-三氟苯基、5-氯-2-吡啶基、5-溴-2-吡啶基、5-氟-2-吡啶基、5-三氟甲基-2-吡啶基、5-氰基-2-吡啶基、5-甲基-2-吡啶基4.权利要求3的化合物或其可药用盐或其体内可水解酯，其中B为4-氟苯基、5-氯-2-吡啶基或5-三氟甲基-2-吡啶基5.上述任一权利要求的化合物或其可药用盐或其体内可水解酯，其中X为氮原子6.上述任一权利要求的化合物或其可药用盐或其体内可水解酯，其中R1选自苯基甲基、苯基乙基、苯基丙基、3-氯苯基、4-氯苯基、3-吡啶基、2-吡啶基丙基、2-或4-嘧啶基乙基(未取代的或由氟一取代的)、2-或4-嘧啶基丙基、2-(2-嘧啶基)丙基(未取代的或由氟一取代的)7.权利要求6的化合物或其可药用盐或其体内可水解酯，其中R1为苯基甲基、苯基乙基、2-嘧啶基丙基、2-(2-嘧啶基)丙基(未取代的或由氟一取代的)或5-氟-2-嘧啶基乙基8.权利要求1的化合物或其可药用盐或其体内可水解酯，其中以式I化合物作为本文的范例9.权利要求8的化合物或其可药用盐或其体内可水解酯，其中所述化合物选自(R，S)-N-羟基-3-[4-氟苯基哌嗪-1-基磺酰基]-2-[(R，S)-2-苯基丙基]丙酰胺，3-{[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基}-N-羟基-2-苯基丙酰胺，[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-N-羟基碳酰胺-4-苯基丁烷，N-羟基-3-[4-氟苯基哌嗪-1-基磺酰基]-2-苄基丙酰胺，N-羟基-3-[4-氟苯基哌嗪-1-基磺酰基]-2-苄基丙酰胺10.一种药物组合物，它包含权利要求1的式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯和可药用载体11.在人或动物体的治疗方法中使用的权利要求1的式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯12.用作治疗剂的权利要求1的式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯13.治疗金属蛋白酶介导的疾病状态的方法，它包括给予温血动物治疗有效量式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯14.权利要求13的治疗金属蛋白酶介导的疾病状态的方法，它包括治疗由一种或多种下列酶MMP13，聚集蛋白聚糖酶，MMP9，MMP12介导的疾病状态15.式I化合物或其可药用盐或其体内可水解前体在制备治疗由一种或多种金属蛋白酶介导的疾病的药物中的应用16.式I化合物或其可药用盐或其体内可水解前体在制备治疗关节炎的药物中的应用17.式I化合物或其可药用盐或其体内可水解前体在制备治疗动脉粥样硬化的药物中的应用18.在药物制剂中使用式I化合物或其可药用盐或其体内可水解前体在制备治疗慢性阻塞性肺病的药物中的应用19.制备式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯的方法，它包括将式II化合物转化为式I化合物 其中Y为CONHOH的前体或保护形式，然后可有可无地形成式I化合物的可药用盐或其体内可水解酯

本发明涉及用于抑制金属蛋白酶的化合物并且尤其涉及包含这些化合物的药物组合物及其应用本发明化合物是一种或多种金属蛋白酶的抑制剂金属蛋白酶是蛋白酶(酶)的总科，其数目近年来戏剧性地增加基于结构和功能的考虑，这些酶已分类为科和亚科，如N.M.Hooper(1994)FEBS Letters3541-6中所述金属蛋白酶的实例包括基质金属蛋白酶(MMP)如胶原酶(MMP1、MMP8、MMP13)，明胶酶(MMP2、MMP9)，基质溶素(MMP3、MMP10、MMP11)，metrilysin(MMP7)，金属弹性蛋白酶(MMP12)，enamelysin(MMP19)，MT-MMPs(MMP14、MMP15、MMP16、MMP17)；reprolysin或adamalysin或MDC科，后者包括分泌酶和脱落酶(sheddase)如TNF转换酶(ADAM10和TACE)；虾红素科，包括酶如前胶原加工蛋白酶(PCP)；和其他金属蛋白酶如聚集蛋白聚糖酶，内皮转换酶科和血管紧张素转换酶科金属蛋白酶被认为在生理性病变导致的多血症中是重要的，所述生理性病变涉及组织改造如胚胎发育、骨形成和月经期间的子宫改变这基于金属蛋白酶具有将大量基质底物如胶原、蛋白聚糖和粘连蛋白裂解的能力金属蛋白酶也被认为在生物学重要的细胞介质，如肿瘤坏死因子(TNF)的加工或分泌中是重要的；在生物学重要的膜蛋白，如低亲和力IgE受体CD23的转换后蛋白水解加工或脱落中是重要的(详见N.M.hooper等人，(1997)Biochem J.321265-279)金属蛋白酶已经与很多疾病状态发生有关抑制一种或多种金属蛋白酶的活性在这些疾病状态中可能是非常有益的，这些疾病状态的实例包括各种炎性和变应性疾病如关节炎症(特别是类风湿性关节炎、骨关节炎和痛风)，胃肠道炎症(特别是炎性肠道疾病、溃疡性结肠炎和胃炎)，皮肤炎症(特别是牛皮癣、湿疹、皮炎)；肿瘤转移或侵入；与细胞外基质降解失控有关的疾病如骨关节炎；骨再吸收疾病(如骨质疏松症和佩吉特氏病)；与血管生成异常有关的疾病；与糖尿病、牙周病(如齿龈炎)、角膜溃疡、皮肤溃疡、术后状况(如结肠吻合术)和皮肤创伤修复有关的胶原改变增强；中枢和外周神经系统脱髓鞘性疾病(如多发性硬化)；早老性痴呆；在心血管疾病中观察到的细胞外基质改变如restenosis和动脉粥样硬化；和慢性阻塞性肺病，COPD(例如，MMPs如MMP12的作用在Anderson & Shinagawa，1999，CurrentOpinion in Anti-inflammatory and ImmunomodulatoryInvestigational Drugs，1(1)29-38中讨论)许多金属蛋白酶抑制剂是已知的；对于抑制各种金属蛋白酶而言，不同种类的化合物可能具有不同程度的效力和选择性我们已发现了一类新的化合物，它们是金属蛋白酶抑制剂并且是在抑制MMP-13以及MMP-9中是特别有效的本发明化合物具有有益的效力和/或药动学特性MMP13或胶原酶3最初是由得自乳房肿瘤的cDNA库克隆的[J.M.P.Freije等人(1994)Journal of Biological Chemistry269(24)16766-16773]来自大量组织的RNAs的PCR-RNA分析表明，MMP13的表达限制在乳房癌，因为在乳房纤维腺瘤、正常的或休止的乳腺、胎盘、肝脏、卵巢、子宫、前列腺或腮腺或在乳房癌细胞系(T47-D、MCF-7和ZR75-1)中未发现它随后，在转化的表皮角质化细胞[N.Johansson等人，(1997)Cell Growth Differ.8(2)243-250]，鳞状细胞癌[N.Johansson等人，(1997)Am.J.Pathol.151(2)499-508]和表皮肿瘤[K.Airola等人，(1997)J.Invest.Dermatol.109(2)225-231]中检测到MMP13这些结果提示，MMP13是由转换的上皮细胞分泌的并且可以在与转移有关的细胞外基质降解和细胞基质相互作用中涉及，特别是可在侵袭性癌细胞损害和皮肤癌发生时恶性上皮生长中观察到新近公开的资料提示，MMP3在其他结缔组织的更新中发挥作用例如，与降解II型胶原时MMP13的底物特异性和优先性一致[P.G.Mitchell等人，(1996)J.Clin.Invest.97(3)761-768；V.Knauper等人，(1996)The Biochemical Journal 2711544-1550]，假设MMP13在初级骨化和骨架改型期间[M.Stahle-Backdahl等人，(1997)Lab.Invest.76(5)717-728；N.Johansson等人，(1997)Dev.Dyn.208(3)387-397]，在破坏性关节疾病如类风湿性关节炎和骨关节炎中[D.Wernicke等人，(1996)J.Rheumatol.23590-595；P.G.Mitchell等人，(1996)J.Clin.Invest.97(3)761-768；O.Lindy等人，(1997)Arthritis Rheum 40(8)1391-1399]；和在髋部复位无菌放松期间[S.Imai等人，(1998)J.Bone Joint Surg.Br.80(4)701-710]发挥作用因为局限在粘膜长期发炎的人龈组织上皮，MMP13也包含在成人慢性牙周炎中[V.J.Uitto等人，(1988)Am.J.Pathol 152(6)1489-1499]和在慢性创伤胶原基质的改型中[M.Vaalamo等人，(1997)J.Invest.Dermatol.109(1)96-101]MMP9(明胶酶B；92kDa IV型胶原酶；92kDa胶原酶)是分泌蛋白，它在1989年首次提纯，然后被克隆并进行测序(S.M.Wilhelm等人(1989)J.Biol Chem.264(29)17213-17221.Published erratumin J.Biol Chem.(1990)265(36)22570.)MMP9的近期评论提供了关于蛋白酶详细资料和参考的最佳原始资料T.H.Vu & Z.Werb(1989)(InMatrix Metalloproteinases 1998.Edited by W.C.Park & R.P.Mecham.Pp115-148.Academic Press.ISBN 0-12-545090-7)根据T.H.Vu & Z.Werb(1998)的评论来描述下列要点MMP9的表达在正常情况下限定在几种细胞，包括滋养层、破骨细胞、嗜中性白细胞和巨噬细胞然而，其表达可在这些相同的细胞和在其他类型的细胞中由几种介质诱导，包括将细胞暴露到生长因子或细胞因子中这些是在引发炎性反应中经常涉及的相同的介质与其他分泌MMPs一样，MMP9以非活性的酶原形式释放，然后断裂形成具有酶活性的酶体内激活所需要的蛋白酶是未知的体内活性MMP9和非活性酶之间的平衡进一步通过与天然存在的蛋白质TIMP-1(组织金属蛋白酶抑制剂-1)之间的相互作用调节TIMP-1与MMP9的C-端结合，导致抑制MMP9的催化区所诱导的前MMP9表达平衡、前MMP9断裂成活性MMP9和TIMP-1存在，综合决定局部存在的具有催化活性的MMP9的量具有水解蛋白质活性的MMP9攻击底物，所述底物包括明胶、弹性蛋白和天然的IV型和V型胶原；它对天然的I型胶原、蛋白聚糖或层粘连蛋白无活性表明MMP9在各种生理学和病理学过程中起作用的资料一直在不断增加生理学作用包括胚胎的滋养层在胚胎植入早期通过子宫上皮侵入；在骨生长和发育中的某些作用；和炎性细胞从脉管系统迁移到组织已观察到，在某些病理状态下MMP表达增加，因此推断，MMP9存在于疾病进程中，所述疾病如关节炎、肿瘤转移、早老性痴呆、多发性硬化和动脉粥样硬化中的蚀斑破裂，它导致急性冠心病如心肌梗塞WO-98/05635中提出了具有MMP和TNF抑制剂活性的下列通式化合物B-X-(CH2)n-CHR1-(CH2)m-COY我们现已发现了一些化合物，它们是有效的MMP13抑制剂并且具有所需要的活性特征在本发明第一方面，我们提供式I化合物 其中B表示在3-或4-位由卤素或三氟甲基一取代的，或3-或4-位由卤素(可以相同或不同)二取代的苯基；或者B表示在4-、5-或6-位由卤素、三氟甲基、氰基或C1-4烷基一取代的2-吡啶基或2-吡啶氧基；或者B表示在6-位由卤素或C1-4烷基任选取代的4-嘧啶基；X表示碳或氮原子；R1表示三甲基-1-乙内酰脲C2-4烷基或三甲基-3-乙内酰脲C2-4烷基；在3-或4-位由卤素、三氟甲基、硫或C1-3烷基或C1-3烷氧基一取代的苯基或C2-4烷基苯基；苯基-SO2NHC2-4烷基；2-吡啶基或2-吡啶基C2-4烷基；3-吡啶基或3-吡啶基C2-4烷基；2-嘧啶-SCH2CH2；由卤素、三氟甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、由卤素任选取代的2-哌嗪基或由卤素任选取代的2-哌嗪基C2-4烷基任选之一取代的2-或4-嘧啶基C2-4烷基；上述任何烷基都可以是直链或支链的优选的本发明化合物是那些化合物，其中任何一项或多项下列内容适用B表示4-氯苯基、4-氟苯基、4-溴苯基或4-三氟苯基；在4-或5-位一取代的2-吡啶基或2-吡啶氧基如5-氯-2-吡啶基、5-溴-2-吡啶基、5-氟-2-吡啶基、5-三氟甲基-2-吡啶基、5-氰基-2-吡啶基、5-甲基-2-吡啶基；特别是4-氟苯基、5-氯-2-吡啶基或5-三氟甲基-2-吡啶基；X表示氮原子；R1为苯基甲基(或苄基)、苯基乙基(或苯乙基)、苯基丙基、3-氯苯基、4-氯苯基、3-吡啶基、2-吡啶基丙基、2-或4-嘧啶基乙基(未取代的或由氟一取代的)、2-或4-嘧啶基丙基、2-(2-嘧啶基)丙基(未取代的或由氟一取代的)；特别是苯基甲基、苯基乙基、2-嘧啶基丙基、2-(2-嘧啶基)丙基(未取代的或由氟一取代的)或5-氟-2-嘧啶基乙基在式I化合物中，特定小组由化合物表示，在所述化合物中，B为在3-或4-位由卤素或三氟甲基一取代，或在3-或4-位由卤素(可以相同或不同)二取代的苯基；或者B为在5-或6-位由卤素、三氟甲基或氰基一取代的2-吡啶基或2-吡啶氧基；或者B为未取代的或在6-位由卤素或C1-4烷基取代的4-嘧啶基；X为碳或氮原子；R1为三甲基-1-乙内酰脲C2-4烷基或三甲基-3-乙内酰脲C2-4烷基；或者R1为在3-或4-位由卤素、三氟甲基、硫或C1-3烷基或C1-3烷氧基一取代的苯基或C2-4烷基苯基；或者R1为苯基-SO2NHC2-4烷基；或者R1为2-吡啶基或2-吡啶基C2-4烷基；或者R1为3-吡啶基或3-吡啶基C2-4烷基；或者R1为2-嘧啶-SCH2CH2；或者R1为未取代的或由卤素、三氟甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、2-哌嗪基或2-哌嗪基C2-4烷基一取代的2-或4-嘧啶基C2-4烷基；并且任何烷基都可以是直链的或支链的可以理解，为了避免在空间上不需要的结合，应选择B和/或R1上特定的取代基和取代基的数目各范例化合物代表本发明特定的和独立的方面对于存在光学活性中心的式I化合物，我们讨论了所有独立的光学活性形式和作为本发明特定实例的这些化合物的组合物及其相应的外消旋体外消旋体可以用已知的方法(参见Advanced OrganicChemistry3rd Editionauthor J March，p104-107)拆分成独立的光学活性形式，所述方法包括，例如形成具有辅助种的非对映异构体衍生物，其中所述辅助种具有适宜的光学活性，分离，然后将辅助种断裂可以理解，本发明化合物可包含一种或多种不对称取代的碳原子在式I化合物中存在一个或多个这些不对称中心(手性中心)可产生立体异构体，可以理解，在各情况下，本发明包含所有立体异构体，包括对映体和非对映体及其混合物包括其外消旋混合物对于存在互变异构体的式I化合物，我们讨论了所有独立的互变异体形式和作为本发明特定实例的这些化合物的组合物如上所述，本发明化合物是金属蛋白酶抑制剂，特别地，它们是MMP13抑制剂上述关于式I化合物的各适应症代表本发明独立的和特定的实例尽管我们不希望受理论原因的束缚，但认为，相对于任何MMP1抑制剂活性而言，本发明化合物选择性抑制上述任何适应症，通过非限制性实施例，它们显示，其选择性为任何MMP1抑制活性的100-1000倍本发明某些化合物特别用作聚集蛋白聚糖酶抑制剂，即聚集蛋白聚糖降解抑制剂本发明某些化合物特别用作MMP9和/或MMP12抑制剂本发明化合物可以以可药用盐的形式提供这些包括酸加成盐如盐酸盐、氢溴酸盐、枸橼酸盐和马来酸盐以及与磷酸和硫酸形成的盐另一方面，适宜的盐是碱盐如碱金属盐，例如钠或钾盐，碱土金属盐，例如钙或镁盐，或有机胺盐，例如三乙胺盐它们也可以以体内可水解酯的形式提供这些是在人体水解产生母化合物的可药用酯例如，所述酯可通过静脉内给予试验动物试验化合物并随后测定试验动物的体液来识别羧基适宜的体内可水解酯包括甲氧基甲基酯并且羟基适宜的可水解酯包括甲酸酯和乙酸酯，特别是乙酸酯为了利用式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯来治疗(包括预防性治疗)哺乳动物包括人，通常将其按照标准制药习惯配制成药物组合物因此，另一方面，本发明提供包含式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯和可药用载体的药物组合物对于需要治疗的疾病状态，本发明药物组合物可用标准方法给药，例如，通过口服、局部、非肠道、口腔、鼻、阴道或直肠给药或通过吸入给药为此，本发明化合物可通过本领域已知的方法配制成下列形式，例如片剂、胶囊剂、水或油溶液、悬浮液、乳剂、霜剂、软膏剂、凝胶、鼻喷雾剂、栓剂、细碎的粉剂或吸入气雾剂，和非肠道用(包括静脉内、肌肉内或输注)灭菌水或油溶液或悬浮液或灭菌乳剂除了本发明化合物外，本发明药物组合物也可以包含一种或多种治疗一种或多种上述疾病状态有价值的药物，或者与其联合给予(同时或相继给予)例如，本发明药物组合物通常这样给予人，使得所服用的每日剂量为0.5-75mg/kg体重(并且优选0.5-30mg/kg体重)如果需要，所述每日剂量可以分剂量给予，所服用化合物的精确量和给药途径取决于所治疗病人的体重、年龄和性别以及按照本领域已知的原则治疗的特定疾病状态典型地，单位剂量形式将包含大约1mg-500mg本发明化合物因此，另一方面，本发明提供在人或动物体治疗方法中使用的本发明式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯尤其，我们公开了在由MMP13和/或聚集蛋白聚糖酶和/或MMP9和/或MMP12介导的疾病或状态的治疗中的应用另一方面，本发明提供治疗金属蛋白酶介导的疾病状态的方法，它包括给予温血动物治疗有效量式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯金属蛋白酶介导的疾病状态包括关节炎(如骨关节炎)、动脉粥样硬化、慢性阻塞性肺病(COPD)另一方面，本发明提供制备式I化合物或其可药用盐或其体内可水解酯的方法，它包括其中Y为前体或保护形式CONHOH的化合物II的转化化合物II可如下制备a)、将化合物III与方便地由化合物V获得的化合物IV反应；b)、将方便地由化合物VII与化合物VIII反应获得的化合物VI还原；c)、将化合物VII与化合物IX反应，其中Z为适宜的离去基团 可以知道，很多有关的起始物是通过商业渠道获得的或者可在指定文献中发现例如，可通过下列方法评价本发明化合物分离酶的分析基质金属蛋白酶类包括例如MMP13可以如Knauper等人[V.Knauper等人，(1996)The BiochemicalJournal 2711544-1550(1996)]所述表达和提纯重组人前MMP13所提纯的酶可如下用于监测抑制剂的活性在21℃下，将提纯的前MMP13用1mM氨基苯汞酸(APMA)活化20小时；将活化的MMP13(每次分析11.25ng)在35℃下，在抑制剂存在或不存在下，使用合成底物7-甲氧基香豆素-4-基乙酰基.Pro.Leu.Gly.Leu.N-3-(2，4-二硝基苯)-L-2，3-二氨基丙酰基.Ala.Arg.NH2，在分析缓冲液(0.1M Tris-HCl，pH＝7.5，包含0.1M NaCl，20mM CaCl2，0.02mM ZnCl和0.05％(w/v)Brij 35)中温育4-5小时通过在λex 328nm和λem 393nm下测定荧光性来测定活性如下计算抑制百分数％抑制等于[荧光加抑制剂-荧光背景]/[荧光减抑制剂-荧光背景]例如，如C.Graham Knight等人，(1992)FEBS Lett.296(3)263-266所述，可通过使用最适于特定MMP的底物和条件，用类似的方法来表达和提纯其他前MMPsAdamalysin类包括例如TNF转换酶化合物抑制前TNFα转换酶的能力可利用部分提纯的分离酶的分析来评定，所述酶由THP-1膜获得，如K.M.Mohler等人，(1994)Nature370218-220所述通过在26℃下，将部分提纯的酶在试验化合物存在或不存在下，使用底物4’，5’-二甲氧基-荧光素基Ser.Pro.Leu.Ala.Gln.Ala.Val.Arg.Ser.Ser.Ser.Arg.Cys(4-(3-琥珀酰亚胺-1-基)-荧光素)-NH2，在分析缓冲液(50mM Tris HCl，pH＝7.4，包含0.1％(w/v)Triton X-100和2mM CaCl2)中温育18小时来测定提纯的酶的活性和抑制作用除了使用λex 490nm和λem530nm外，如MMP13测定抑制量底物如下合成通过标准方法，包括用Foc-氨基酸和O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)作为偶联剂和至少4-或5-倍过量的Fmoc-氨基酸和HBTU，将底物的肽部分通过手工或自动的肽合成器装配到Fmoc-NH-Rink-MBHA-聚苯乙烯树脂上Ser1和Pro2双倍偶联使用下列侧链保护策略；Ser1(But)，Gln5(三苯甲基)，Arg8，12(Pmc或Pbf)，Ser9，10，11(三苯甲基)，Cys13(三苯甲基)装配后，通过在DMF中处理Fmoc-肽基-树脂除去N-端Fmoc保护基所得到的氨基-肽基-树脂通过在70℃下，用1.5-2当量预先经二异丙基碳化二亚胺和1-羟基苯并三唑的DMF液活化的4’，5’-二甲氧基-荧光素-4(5)-羧酸[Khanna & Ullman，(1980)Ahal Biochem.108156-161]处理1.5-2小时进行乙酰化然后，通过用含5％水和5％三乙基硅烷的三氟乙酸处理，将二甲氧基荧光素-肽同时脱保护并从树脂上裂解下来通过蒸发，用乙醚研磨和过滤分离二甲氧基荧光素-肽将所分离的肽与4-(N-马来酰亚胺基)-荧光素在含二异丙基乙胺的DMF中反应，产物通过RP-HPLC纯化并最后通过冷冻干燥从乙酸水溶液中分离通过MALDI-TOF MS和氨基酸分析来确定产物的特性中性底物例如，可使用以公开E.C.Arner等人，(1998)Osteoarthritisand Cartilage 6214-228；(1999)Journal of BiologicalChemistry，274(10)，6594-6601为基础的方法和其中所描述的抗体来分析本发明化合物作为聚集蛋白聚糖降解抑制剂的活性可如T.Cawston and A.Barrett(1979)Anal.Biochem.99340-345所述来测定化合物作为胶原酶抑制剂的效力在基于细胞/组织活性试验中作为抑制膜脱落酶(sheddase)(如TNF转换酶)药物的金属蛋白酶活性的抑制作用基本上如K.M.Mohler等人，(1994)Nature 370218-220所述，可通过使用ELISA检测所释放的TNF，在THP-1细胞中评定本发明化合物抑制细胞处理TNFα产生的能力用类似的方式，通过使用适宜的细胞系并用适宜的抗体检测脱落蛋白来测试其他膜分子如N.M.Hooper等人(1997)Biochem.J.321265-279中所描述的那些膜分子的加工和脱落作为抑制基于细胞侵袭性药物的试验如A.Albini等人，(1987)Caneer Research 473239-3245所述，可在侵袭分析中测定本发明化合物抑制细胞迁移的能力作为抑制全血TNF脱落酶活性药的试验在用LPS刺激TNFα释放的人全血分析中评定本发明化合物抑制TNFα产生的能力将从志愿者获得的肝素化(10单位/ml)人血用培养基(RPMI 1640+碳酸氢盐，青霉素，链霉素和葡糖胺)稀释1∶5并在加入20μl LPS(E.Coli.0111B4；最终浓度为10μg/ml)前，在37℃潮湿的(5％CO2/95％空气)细菌培养器中，将该稀释血(160μl)与20μl试验化合物(一式三份)在DMSO或适宜的载体中培养30分钟每次分析包括单独与培养基一起培养的稀释血对照(6孔/平板)或已知的作为标准样品的TNFα抑制剂然后，将培平板在37℃下培养6小时(潮湿的细菌培养器)，离心(2000rpm，10分钟；4℃)，收获血浆(50-100μl)并在随后通过ELISA分析TNFα浓度前，在-70℃下贮存在96孔平板中作为体外抑制软骨降解药的试验可基本上如K.M.Bottomley等人，(1997)Biochem J.323483-488所述评定本发明化合物抑制软骨中聚集蛋白聚糖或胶原组分降解的能力药效学试验采用体外药效学试验来评价本发明化合物的清除特性和生物利用度，该试验利用了上述合成底物分析或HPLC或质谱分析这是可用于在一系列物种中评价化合物清除率的一般试验静脉内或口服给予动物(例如大鼠、狨)化合物的可溶性制剂(如20％ w/v DMSO，60％w/vPEG400)并且在接下来的时间点(例如5，15，30，60，120，240，480，720，1220分钟)，将血样从适宜的容器中取出加到10U肝素中通过离心得到血浆并用乙腈(80％w/v最终浓度)沉淀血浆蛋白在-20℃下放置30分钟后，通过离心沉积血浆蛋白并用Savant speed vac将上清液部分蒸发至干将沉积物在分析缓冲液中重新构成并随后利用合成底物分析来分析化合物的含量简单地说，作进行评价化合物的浓度-反应曲线评定重新构成血浆的系列稀释液的活性并且通过使用浓度-反应曲线和考虑总血浆稀释因素来计算原血浆样品中存在的化合物的活性和量体内评定作为抗TNF药的试验用大鼠评定本发明化合物作为体外TNFα抑制剂的能力简单地说，通过适宜的途径，例如口服(p.o.)、腹膜内(i.p.)、皮下(s.c.)给予雄性Wistar Alderley Park(AP)鼠(180-210g)化合物(6只鼠)或药物载体(10只鼠)90分钟后，用高浓度CO2将大鼠处死并通过后腔静脉放血得到5单位肝素钠/ml血的血样将血样立即放到冰上并在4℃，以2000rpm的速度离心10分钟，将所收获的血浆在-20℃下冷冻以供分析它们对LPS-刺激的人血产生TNFα的作用将大鼠血浆样品解冻并将175μl各样品加到96U孔平板的固定样式的孔中然后，将50μl肝素化的人血加到各孔中，混合并将平板在37℃(潮湿的细菌培养器)下培养30分钟将LPS(25μl；最终浓度10μg/ml)加到所述孔中并再继续培养5.5小时对照孔单独与25μl培养基一起培养然后，将平板在2000rpm下离心10分钟，将200μl上清液转移到96孔平板中并在-20℃下冷冻以供随后通过ELISA分析TNF浓度时使用通过专用软件分析数据来计算各化合物/剂量 作为抗关节炎药的试验如D.E.Trentham等人，(1977)J.Exp.Med.146，857所述，在胶原诱导的关节炎(CIA)中测试化合物作为抗关节炎药的活性在该模型中，当在Freunds不完全配料中给予时，酸可溶性天然II型胶原引起大鼠多关节炎可使用类似的条件诱导老鼠和灵长目动物关节炎作为抗癌药的试验基本上如I.J.Fidler(1978)Methods in Cancer Research15399-439所述，例如，使用B16细胞系(如B.Hibner等人，Abstract283 p75 10thNCI-EORTC Symposium，Amsterdam June 16-19 1998)来评定化合物作为抗癌药的活性下面将通过下列实施例说明但不限制本发明实施例1N-羟基-3-[4-氟苯基哌啶-1-基磺酰基]-2-苄基丙酰胺 将包含10％披钯碳(8mg)的3-[4-氟苯基哌啶-1-基磺酰基]-2-苄基-N-苄氧基丙酰胺(75mg)的乙醇(2ml)溶液在氢气罐下氢化过滤催化剂并真空除去溶剂残渣通过Bond-洗脱柱，用乙酸乙酯和异己烷的混合物(1∶1)洗脱，得到标题化合物的白色泡沫物，收率29mgM+H＝421.1H nmr(300MHz，d6-DMSO+d3AcOD)d 1.45-1.65(m，2H，)；1.7-1.8(m，2H，)；2.5-2.6(m[partly obscured by solvent]，2H，)；2.65-2.9(m，5H，)；3.4-3.5(m，1H，)；3.5-3.6(m，2H，)；7.1(dd，2H，)；7.2-7.3(m，7H，)3-[4-氟苯基哌啶-1-基磺酰基]-2-苄基-N-苄氧基丙酰胺在0℃下，将3-氯磺酰基-2-苄基-N-苄氧基丙酰胺(720mg)的氯甲烷(2ml)溶液滴加到4-氟苯基哌啶(320mg)和三乙胺(306μl)的氯甲烷(6ml)溶液中将该反应混合物搅拌14小时，用水洗涤并通过相分离纸过滤和蒸发至干残渣通过Bond-洗脱柱色谱层析并用乙酸乙酯和异己烷的混合物(1∶4)作为洗脱剂进行纯化，得到标题化合物的白色固体，收率75mgM+H＝511.1H nmr(300MHz，CDCl3)d1.65-1.85(2×m，4H)；2.45-2.6(m，1H，)；2.65-3.1(m，6H)；3.6(dd，1H)；3.75-3.85(m，2H)；4.5(Abq，0.5H)；4.65-4.8(m，0.5H)；4.8(Abq，0.5H，)；4.95-5.1(m，0.5H)；6.9-7.0(m，2H)；7.1-7.15(m，2H)；7.15-7.2(m，2H)；7.3-7.4(m，8H)3-氯磺酰基-2-苄基-N-苄氧基丙酰胺在0℃下，将将氯通入充分搅拌下的3-乙酰基硫-2-苄基-N-苄氧基丙酰胺(750mg)的氯甲烷(5ml)和水(5ml)的混合物中当反应混合物变黄时停止氯气流并连续搅拌14小时将反应混合物用氩气净化并用氯甲烷(3×10ml)提取将合并的提取液干燥并除去溶剂，得到标题化合物的黄色油状物，收率725mg该化合物不需要进一步确定特性即可使用3-乙酰基硫-2-苄基-N-苄氧基丙酰胺将N-苄氧基-2-苄基丙烯酰胺(0.61g)和硫羟乙酸(0.32ml)的混合物搅拌并在70℃下加热3小时将甲苯(5ml)加到该反应混合物中并蒸发至干，得到标题化合物的树胶(M+H＝344)，该化合物不需要进一步确定特性即可使用N-苄氧基-2-苄基丙烯酰胺将一滴DMF加到2-苄基丙烯酸(0.4g)(CAS No 5669-19-2)和草酰氯(0.22ml)的氯甲烷(5ml)混合物中并将该混合物搅拌30分钟除去溶剂并加入氯甲烷(5ml)，然后再依次除去将残渣溶解在氯甲烷(2ml)中并将该溶液加到O-苄基羟胺盐酸盐(0.39g)和三乙胺(0.69ml)的氯甲烷溶液中将该混合物搅拌1小时，用水(2×10ml)洗涤并干燥除去溶剂后得到的残渣通过Bond-洗脱柱，先用氯甲烷洗脱，然后用乙酸乙酯(达10％乙酸乙酯/氯甲烷)梯度洗脱，得到标题化合物的树胶，收率420mgM+H＝268.1H-NMR(CDCl3)3.6(s，2H)，4.83(s，2H)，5.25(s，1H)，5.58(s，1H)，7.1-7.37(m，10H)，8.1(s，1H).实施例2N-羟基-3-[4-氟苯基哌嗪-1-基磺酰基]-2-苄基丙酰胺 将包含10％披钯碳(30mg)的3-[4-氟苯基哌嗪-1-基磺酰基]-2-苄基-N-苄氧基丙酰胺(234mg)的甲醇溶液在氢气罐下氢化3.5小时通过硅藻土过滤除去催化剂并将滤液蒸发至干，得到标题化合物，收率165mgM+H＝422.1H-NMR(CDCl3)2.8-3.6(m，14H)，6.8(dd，2H)，6.9(t，2H)，7.4-7.9(m，5H).3-[4-氟苯基哌嗪-1-基磺酰基]-2-苄基-N-苄氧基丙酰胺将3-[N-(4-氟苯基)哌嗪-1-基磺酰基]-2-苄基丙酸(203mg)、四溴化碳(182mg)、三乙胺(0.209ml)、O-苄基羟胺(76mg)和聚合物支撑三苯基膦(500mg)的氯甲烷(5ml)混合物搅拌14小时将反应混合物用氯甲烷(10ml)稀释并加入氨基甲基化聚苯乙烯(1g)，将该混合物搅拌4小时，通过硅石(2g)过滤，用氯甲烷洗涤滤液蒸发至干，残渣通过在硅石上色谱层析，用递增乙酸乙酯量的乙酸乙酯/己烷(最初5％增至50％)洗脱得到标题化合物的澄清树胶，237mgM-H＝510.1H-NMR(CDCl3)2.75(b，1H)，2.95(m，3H)，3.1(b，4H)，3.35(b，4H)，3.6(m，1H)，4.6(d，1H)，4.8(d，1H)，6.85(q，2H)，6.95(t，2H)，7.15-7.35(m，10H)，8.0(b，1H).3-[N-(4-氟苯基)哌嗪-1-基磺酰基]-2-苄基丙酸将氢氧化锂(14ml 1M水溶液)加到3-[N-(4-氟苯基)哌嗪-1-基磺酰基]-2-苄基-丙酸乙酯(1g)的THF(20ml)溶液中并充分搅拌4小时将反应混合物用盐酸(10ml 1.5M)酸化至pH1并用乙酸乙酯(3×25ml)提取将乙酸乙酯提取液用水洗涤并干燥蒸发至干得到的残渣与乙醚一起研磨，得到标题化合物的白色固体，收率219mg1H-NMR(CDCl3)2.9(dd，1H)，3.0(dd，1H)，3.1(t，1H)，3.15(dd，1H)，3.25(m，1H)，3.35(m，2H)，3.45(dd，1H)，6.85(dd，2H)，6.95(t，2H)，7.2-7.25(m，5H).3-[N-(4-氟苯基)哌嗪-1-基磺酰基]-2-苄基丙酸乙酯将N-(4-氟苯基)-哌嗪(9.01g)和三乙胺(7.0ml)的氯甲烷(150ml)混合物以使内部温度不超过-5℃的速度滴加到冷却(-15℃)下的2-乙氧基羰基-3-苯基丙磺酰氯(15.0g)的氯甲烷(75ml)溶液中将该混合物搅拌15分钟并用稀HCl(15ml 1.5M)淬灭，用水(2×100ml)和盐水(50ml)洗涤将提取水溶液用氯甲烷(10ml)洗涤并将合并的有机提取液干燥除去溶剂得到的残渣通过在硅石上色谱层析，用乙酸乙酯和异己烷(1∶5)的混合物洗脱进行纯化，得到标题化合物，收率12.02gM+H＝435(434).1H-NMR(CDCl3)1.2(t，3H)，2.85-3.0(b，2H)，3.0-3.2(b，5H)，3.25(b，1H)，3.35(b，2H)，3.45(dd，1H)，4.15(q，2H)，6.85(b，2H)，7.0(b，2H)，7.15-7.4(m，5H).2-乙氧基羰基-3-苯基丙磺酰氯将氯气通入2-(乙酰基硫甲基)-3-苯基丙酸乙酯(16g)中直至反应混合物变成黄色将反应混合物用氮气净化并减压浓缩残渣用氯甲烷(2×200ml)提取，用盐水(50ml)洗涤并干燥，得到标题化合物的黄色油状物，收率15.0g，不需要进一步确定特性即可使用1H-NMR(CDCl3)1.2(t，3H)，2.95(dd，1H)，3.2(dd，1H)，3.45(q，1H)，3.65(dd，1H)，4.2(m，3H)，7.1-7.4(m，5H).2-(乙酰基硫甲基)-3-苯基丙酸乙酯将2-苄基丙烯酸乙酯(CAS No.20593-63-9)(20g)和硫羟乙酸(14.2g)在70℃下加热14小时将该混合物减压浓缩，将残渣通过硅石(50g)，用乙酸乙酯/异己烷混合物(1∶9)洗脱，得到标题化合物的黄色油状物，收率31g1H-NMR(CDCl3)1.15(t，3H)，2.3(s，3H)，2.8-3.2(m，5H)，4.1(q，2H)，7.1-7.3(m，5H).实施例3[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-N-羟基碳酰胺-4-苯基丁烷 将[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-羧酸-4-苯基丁烷(490mg)悬浮在二氯甲烷(5ml)中，冷却至5℃并加入DMF(2μl)，然后以保持温度在5-7℃的速度加入草酰氯(0.43ml)在该温度下保持1小时后，将该混合物蒸发至干并与甲苯共沸得到黄色油状物将该油状物溶解在二氯甲烷(5ml)中并在5℃加到冷却的50％羟胺(0.3ml)的THF(10ml)水溶液中10分钟后，将该混合物蒸发至干并在乙酸乙酯和水之间分配将有机相干燥并蒸发至干与乙醚一起研磨得到[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-N-羟基碳酰胺-4-苯基丁烷的固体(300mg)NMR CDCl3d7.3-6.8，(m，9H)；3.5(m 1H)；3.1，(m，4H)；3.3，(m，4H)；2.8-2.5(m，4H)；1.9-.2.2.(br，2H)；Mass spec.MH+ 436[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-羧酸-4-苯基丁烷将[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-乙氧基羰基-4-苯基丁烷(1.7g)溶解在THF(25ml)和水(8ml)的混合物中并加入氢氧化锂一水合物(190mg)将该混合物在室温下搅拌18小时，然后蒸发至几乎干加入1.0M氢氧化锂溶液(200ml)并用乙醚(100ml)提取该溶液将水相用枸橼酸酸化至pH4并用乙酸乙酯提取将提取液干燥并浓缩，得到[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-羧酸-4-苯基丁烷(540mg)NMR DMSO d 7.3-6.8，(m，9H)；3.6(m 1H)；3.5，(m，1H)；3.4，(m，4H)；3.15，(m，4H)；2.8(m，2H)；2.7，(m，2H)；1.9-.2.2.(br，2H)；Mass spec.MH+ 421[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-乙氧基羰基-4-苯基丁烷在30-35℃下，将E-[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-乙氧基羰基-4-苯基丁-1-烯(10g，0.022M)溶解在四氢呋喃(50ml)和乙醇(500ml)中分次加入硼氢化钠(2.09g，0.055M)，保持温度低于35℃将该混合物搅拌15分钟，加入水(100ml)并用1M枸橼酸溶液酸化至pH4将该混合物蒸发至干，将残渣在二氯甲烷和水之间分配将合并的有机相干燥并蒸发至干将残渣通过闪式柱色谱层析纯化，用异己烷/乙酸乙酯3∶1洗脱，得到[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-乙氧基羰基-4-苯基丁烷的白色固体(1.9g)NMRd 7.3-6.8，(m，9H)；4.2，(m，2H)；3.5，(m，1H)；3.4，(m，4H)；3.15，(m，4H)；3.0，(m，2H)；2.7，(m，2H)；2.2-2.1，(br，2H)；1.3，(t，3H)..MSMH+ 449.E-[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-乙氧基羰基-4-苯基丁-1-烯在氩气环境下，将N-(4-氟苯基)-N’-(甲磺酰基)哌嗪(12.9g，0.05M)溶解在无水四氢呋喃(500ml)中并冷却至-10℃在-10℃下滴加1.0M双(三甲硅烷基)酰胺锂的四氢呋喃(100ml，0.1M)溶液，搅拌30分钟，然后加入氯代三甲基硅烷(5.45g，6.36ml，0.05M)，保持温度在-10℃在-10℃下再搅拌30分钟后，滴加2-氧-苯基丁酸乙酯(10.3g，9.5ml，0.05M)的四氢呋喃(20ml)溶液在-10℃下搅拌1小时后，将反应用饱和氯化铵溶液淬灭用乙酸乙酯稀释后，收集有机相，干燥并蒸发至干将残余的油状物，即E和Z异构体的混合物通过在硅胶上色谱层析，用异己烷/乙酸乙酯3∶1洗脱进行纯化，得到E-[(4-氟苯基)-4-(哌嗪基磺酰基)]-2-乙氧基羰基-4-苯基丁-1-烯低极性的异构体(6.6g)NMRd 7.3-6.6，(m，9H)；5.8，(s 1H)；4.2，(m，2H)；3.0(m，4H)；2.9，(m，4H)；2.7，(m，2H)；2.55，(m，2H)；1.15，(t，3H)MSMH+ 447，M+Na 469，MH- 445N-(4-氟苯基)-N’-(甲磺酰基)哌嗪 在0℃下，向1-(4-氟苯基)哌嗪(35g，194mmol)和吡啶(17.5ml)的无水二氯甲烷(200ml)溶液中滴加甲磺酰氯(20ml，258mmol)将该混合物在室温下搅拌3小时将该混合物用水洗涤并用二氯甲烷(2×100ml)提取有机层用MgSO4干燥并真空蒸发将残渣研磨并用甲醇洗涤，得到1-(4-氟苯基)-4-(甲磺酰基)哌嗪(39.35g)的白色结晶1H NMR(CDCl3)7.00(m，2H)，6.90(m，2H)，3.40(m，4H)，3.20(m，4H)，2.83(s，3H).实施例43{[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基}-N-羟基-2-苯基丙酰胺 在0℃和氩气环境下，将3{[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基}-2-苯基丙酸(416mg，1.02mmol)的DCM(3.5ml)溶液与DMF(1滴)一起搅拌滴加草酰氯(0.266ml，3.05mmol)并将反应物搅拌30分钟将混合物蒸发至干并与甲苯共沸将所得到的黄色油状物溶解在DCM(2.5ml)中并在0℃下滴加到羟胺(50％水溶液，0.333ml)的THF(2.5ml)溶液中在5℃下搅拌30分钟，然后真空蒸发得到树胶将残渣溶解在EtOAC中，用水(×2)洗涤，然后用Na2SO4干燥并真空蒸发，得到淡黄色泡沫物(0.250g)1H NMR(DMSO)10.85(s，1H)，8.92(s，1H)，8.10(d，1H)，7.62(dd，1H)，7.40-7.18(m，5H)，6.90(d，1H)，4.40-3.80(m，2H)，3.56(m，3H)，3.48(m，1H)，3.25(m，1H)，3.20(m，3H)；MS(ES+)425.2(MH+).如下制备起始物在氩气环境下，将2-(N-甲磺酰基哌嗪)-5-氯吡啶(1.0g，3.63mmol)溶解在无水THF(50ml)中并冷却至-10℃，然后加入Li(TMSA)(3.8ml 1.0M的THF溶液，3.81mmol)将该混合物在-10℃下搅拌10分钟，然后滴加预先制备的溶液[→-在-10℃和氩气环境下用Li(TMSA)(6.1ml 1.0M的THF溶液，6.10mmol)处理的溴苯乙酸(1.24g，5.81mmol)的THF(40ml)溶液]将悬浮液混合物在-10℃下搅拌30分钟，然后放置至室温用氯化铵水溶液淬灭并用浓HCl酸化至pH2，然后用乙酸乙酯(×3)提取有机层用NaSO4干燥并真空蒸发得到黄色树胶将该树胶溶解在少量EtOAc中并用Et2O沉淀过滤并用Et2O洗涤得到白色固体(0.522g)1H NMR(DMSO)7.95(d，1H)，7.45(dd，1H)，7.22-7.08(m，5H)，6.75(d，1H)，3.82-3.74(m，2H，)，3.38(m，4H)，3.23(m，1H)，3.04(m，4H)，2.50(m，1H)；MS(ES+)410.4(MH+).2-(N-甲磺酰基哌嗪)-5-氯吡啶 将5-氯-2-哌嗪基吡啶(95.1g，0.48M)溶解在CH2Cl2(1000ml)中并加入三乙胺(67.6ml，0.48M)冷却至0-5℃并缓慢地加入甲磺酰氯(37.4ml，0.48M)的CH2Cl2(50ml)溶液将该反应混合物在室温下搅拌过夜用H2O(300ml)洗涤反应混合物收集有机相，用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干，得到白色固体将该固体在60℃下在乙醇(500ml)中搅拌冷却并收集白色固体在40℃下真空干燥过夜收率97.3gNMR(CDCl3)d 8.1，d 1H；7.4，dd 1H；6.6，d 1H；3.7，m 4H；3.3，m 4H；2.8，s 3H.MS Found MH+ 2765-氯-2-哌嗪基吡啶 将2，5-二氯吡啶(148g，1.0M)溶解在无水二甲基乙酰胺(1000ml)中并加入无水哌嗪(258g，3.0M)在120℃下搅拌4小时在指形冷冻器上冷却并在高真空下蒸发残渣在乙酸乙酯(3000ml)中搅拌过滤固体，用乙酸乙酯(500ml)洗涤合并的乙酸乙酯滤液用H2O洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到黄色固体收率182.5gNMR(CDCl3)d 8.1，d 1H；7.4 dd 1H；6.6，d 1H；3.5，m 4H；3.0，m 1H；MS found MH+ 198实施例5(R，S)-N-羟基-3-[4-氟苯基哌嗪-1-基磺酰基]-2-[(R，S)-2-苯基丙基]丙酰胺用实施例1的方法制备化合物下面列出中间体和终产物 实施例6用实施例4的方法制备下列化合物R1 M+H4-Cl-PhCH2 473/475Ph(CH2)2 453/4554-Cl-Ph 459/4613，4-二氯-Ph 493/4952-嘧啶基(CH2)3 469实施例7用实施例4的方法制备下列化合物 R1 M+HPh(CH2)2 468/470