专利名称：多环化合物作为抗aids剂的制药用途的制作方法 获得性免疫缺陷综合症(又称艾滋病)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的人体免疫系统(HIV)的一种疾病。该综合征渐进地降低免疫系统的效力，并使个体易受机会性感染和肿瘤影响。HIV通过粘膜的直接接触或包含病毒的体液如血液、精液、阴道液、尿道液和乳汁传播。 AIDS如今普遍流行。根据卫生组织的数据，在2007年，估计全球有33. 2百万人具有该病，AIDS使估计2. I百万人丧命，包括330，000名儿童。AIDS的病理生理学较复杂，通常伴随所有的综合症。HIV是首先感染人类免疫系统重要器官如CD4+ T细胞(T细胞的亚组)、巨噬细胞和树突细胞的逆转录病毒。它直接和间接地破坏CD4+ T细胞。T淋巴细胞对免疫反应很关键，没有他们，机体不能对抗感染或杀死癌细胞。这削弱免疫系统并允许机会性感染。尽管有可以减缓病程的AIDS治疗方法，目前还没有公开可用的HIV疫苗或HIV或AIDS的治疗方法。已知唯一的预防方法是避免暴露于病毒，或者做不到这一点，在高度危险暴露后直接进行抗逆转录病毒治疗，被称为暴露后预防(PEP)。抗逆转录病毒治疗降低HIV感染的死亡率和发病率，但这些药物昂贵并且抗逆转录病毒药物的常规应用不是适用于所有国家。它还有非常不适的副作用，包括腹泻、不适、恶心和疲劳。在缺乏抗逆转录病毒治疗的情况下，从HIV感染到AIDS进展的平均时间是几乎十年，根据HIV亚型，发生AIDS后的平均存活时间只有几个月。当前HIV感染的治疗由高活性抗逆转录病毒疗法组成，通常，包括由属于至少有两个类型的抗逆转录病毒药物的至少三种药物组成的组合(或“鸡尾酒”)。治疗的不依从与不持久是为什么有些人未从抗逆转录病毒疗法受益的主要原因。不依从与不持久的原因是多种多样的。主要社会心理问题包括难以获得医疗保健、社会支持不足、精神疾病和滥用药物。抗逆转录病毒疗法也可以是复杂的，因此很难依从频繁服用大量药丸。副作用也可以阻止人们坚持抗逆转录病毒治疗，这些包括脂肪代谢障碍、血脂异常、腹泻、胰岛素抵抗、心血管疾病风险的增加和出生缺陷。自1987年以来，AZT和类似的核苷类似物的长期给药已经作为最常用的治疗开给AIDS患者以抑制人类免疫缺陷病毒(HIV)。自1990年以来，AZT也已经被开药给健康的HIV抗体阳性者以预防AIDS。原理在于以不抑制细胞DNA合成的剂量抑制HIV DNA合成(Chiu等The toxicity of azi do thymidine (AZT) on human and animal cells in culture atconcentrations used for antiviral therapy, Genetica 95:103-109,1995)。然而，鉴于其固有的毒性和血液学毒性，AZT作为一种可接受的抗HIV药物已受到质疑(上面提到的 Chiu 等和 Clotet 等:Toxicity of Zidovudine (AZT) in patientswith AIDS. Int Conf AIDS 4-9; 5:338 1989)。一些独立的研究报道，AZT对培养的人体细胞有毒性，即半数抑制剂量(ID 50)范围为l-50nM。根据这些结果，在20-60 nM AZT治疗的人类中记录到威胁生命的毒性包括贫血、白细胞减少、恶心、肌肉萎缩、痴呆症、肝炎和死亡率，即AZT作为抗HIV药物的可取性可以重新考虑(上面提到的Chiu等)。 改善目前的治疗的研究包括降低现有药物的副作用、进一步简化药物方案以改善依从性以及确定治疗方案的最佳顺序以管理耐药性。
本发明涉及巨大戟二萜醇(ingenol)和羊毛留_8，24-二烯_3_醇化合物及其混合物或包含它们的组合物在无目前已知的缺点即毒性相关的情况下用于显著有效治疗AIDS的用途。不排除任何其他的，适宜的巨大戟二萜醇化合物是3_(2，4，6 -十二碳三烯酰基)巨大戟二萜醇、3_(2，4，6，8-十四碳四烯酰基)-巨大戟二萜醇、其药学可接受的盐、异构体、多晶型物、溶剂化物或水合物、前药或其代谢物中的一种或多种。巨大戟二萜醇化合物可以例如从大戟科植物或通过化学合成获得，该途径与本发明无关。例如，可能根据国际专利公开WO 2007000618作为大戟科植物乳胶的极性溶剂提取物的级份提供足量的巨大戟二萜醇化合物。不排除任何其他的，适宜的羊毛甾-8，24- 二烯-3-醇是大戟二烯醇(euphol) (RN514-47-6)、甘遂醇(tirucallol) (RN 514-46-5)和羊毛甾醇(Ianosterol) (RN 79-63-0)、其药学可接受的盐、异构体、晶体和多晶型物、溶剂化物或水合物、前药或其代谢物中的一种或多种。羊毛留_8，24- 二烯-3-醇可以例如从大戟科植物或通过化学合成获得，该途径与本发明无关。适宜的巨大戟二萜醇和羊毛甾_8，24- 二烯-3-醇的混合物的范围为1:100-100:1，尤其是 1:50-50:1，更尤其是 1:10-10:1，更尤其是 1:4-4: I。因此，在第一个方面，本发明涉及巨大戟二萜醇(ingenol)和/或羊毛留_8，24- 二烯-3-醇化合物在制备用于抑制人类免疫缺陷病毒复制，即用于治疗HIV感染，AIDS的药物组合物的用途。本发明的巨大戟二萜醇和羊毛留-8，24- 二烯-3-醇化合物、它们的混合物和本发明的包含它们的组合物，可以以任何适宜途径、肠内或肠胃外给药于需要治疗的受试者，包括口服、外用、透皮、皮下、腹膜内、静脉内、通过渗透、通过吸入、经皮、经粘膜、肌肉内、肺内、阴道、直肠、眼内和舌下。本发明的适宜的给药途径是局部和全身的(渗透、口服、喷雾吸入、经皮)。本发明的巨大戟二萜醇化合物可以包含在缓释或控释组合物中。已知的佐剂和赋形剂可以应用于包含巨大戟二萜醇化合物的组合物-用于本发明相关的组合物的药物剂量形式的参考可见出版物 Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing,1965-1990。本发明的组合物可以以固体、液体或半液体、片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、混悬齐U、乳剂、分散剂和任何其他有用的已知药学可接受的形式给药于患者。该组合物可能根据期望的效果进一步包含活性试剂，例如抗生素。对于作为片剂或胶囊剂(软和硬胶囊)口服，巨大戟二萜醇化合物可以结合接受药学可接受的惰性媒介，如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸氢钙、磷酸钙、甘露醇、山梨醇和类似物；对于液态形式的口服，巨大戟二萜醇化合物以及结合乙醇、甘油、水和类似物。当期望或必要时，可以将凝结剂、润滑齐U、崩解剂、色素和香料加入混合物。常见的凝结剂是葡萄糖、3 -乳糖、玉米甜味剂、天然或合成树胶如阿拉比卡胶、黄蓍胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡及类似物。润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、醋酸钠、氯化钠。崩解包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶及类似物。本发明涉及的组合物也可以作为脂质体或与可溶性聚合物载体偶联给药。用于口服的液体剂型可能包括着色剂和甜味剂以增加患者的接受度。用于水剂型的可接受的载体为水、适宜的油、生理盐水溶液、葡萄糖水、其它糖溶液和二醇类如丙二醇或聚乙二醇、磷酸缓冲液。在另一个方面，本发明涉及抑制人类免疫缺陷病毒的复制，即用于治疗人类免疫缺陷病毒感染如AIDS的方法，所述方法包括将药学可接受的载体中的药理学有效量 的本发明的化合物给药于患者。足量的一种或多种巨大戟二萜醇或一种或多种羊毛甾-8，24- 二烯-3-醇或它们的混合物的例子对应于每天一次或多次给药于这种患者的每kg患者重量0. 001-2000 mg的一种或多种巨大戟二萜醇或一种或多种羊毛甾_8，24- 二烯-3-醇或它们的混合物的剂量。实施例尽管下列实施例是本发明的，它们不是以任何方式对其进行限制，而是权利要求中进一步表述的内容。在下列文本中，将经常提到化合物大戟二烯醇，羊毛甾-8，24-二烯-3-醇家族中的一个成员，可以理解的是，这么做仅仅为了引用方便，因此，本发明并不排除任何其它羊毛甾_8，24- 二烯-3-醇。病毒和细胞
用 Ficol-Hipaque 密度梯度方法(Hystopaque, Chem Sigma. Co. , USA)从健康献血者获得外周血单核细胞(MCPB)。这些细胞被重新悬浮于添加10%灭活胎牛血清(来源HyClone, USA)、青霉素(100 U / ml)、链霉素(100 iig/ml)、2 mM 谷氨酰胺的 RPMI 1640培养基(来源Sigma_Aldrich, USA),以 5 ii g/ml 植物凝集素(PHA，来源Sigma_Aldrich，USA)刺激2-3天，洗涤，再保持包含5U/ml重组人白介素(来源Sigma Aldrich, USA)的培养基中。MCPB (3 X IO6)在48孔板中被分布于无血清的RPMI培养基中并在5% CO2空气下37°C培养I小时。使用分离的对趋化因子受体具有独特趋化性即CCR5-趋化性(R5-趋化性)的初始HIV-I。细胞存活率试验(XTT法和台盼蓝法)
通过XTT法(2，3- 二 [2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基]2H-四唑輸-甲酰苯胺，来源=Sigma)评估分离物的对细胞活力的效果。为了测试化合物对线粒体活性的效果，正常个体的MCPB(2X IO5细胞/200 u I/孔)，在96孔板中，37°C,5% C02)在3至7天期间以不同浓度的物质处理(0. 5 V- g/mL>5 u g/mL>20 u g/mL>40 u g/mL>80 u g/mL、160 V- g/mL>320 iig/mL和640 u g/mL)0在该期间结束时，通过加入50ml XTT溶液用比色法测定细胞活性，通过在450nm处阅读吸光度分析结果(根据Scudiero等，1988，Cancer Res. 48:4827-4833)。
抗HIV-I抑制活性 MCPB
用5-10 ng/ml AG p24 HIV-I以R5分离物感染MCPB 2_3小时。洗涤细胞3次，重悬于添加5 u /ml IL-2的培养基中并铺于96孔板中(2 X IO5细胞/200 U I，一式三份)，以指定浓度的被测试的化合物处理(0. 5 u g/mL, I. 0 u g /mL, 5. 0 u g /mL, 10 u g /mL, 20U g /mL和40 u g /mL)。培养物在5% CO2空气及37°C保持7天，用ELISA (酶联免疫吸附测定信息)通过P24的剂量测定病毒响应。物质试验的结果
细胞毒性和抗逆转录病毒检测
对外周血单核细胞(MCPB)进行了分析，其中以XTT评价细胞毒性测试，用ELISA评价病毒响应的抑制测试。CC50 (50%细胞毒性浓度)表示被测试物质能够保持细胞50%存活的浓度。EC50值(50%有效浓度)是物质能够抑制50%的病毒粒子产生的浓度。实施例I-巨大戟二萜醇的细胞毒性
下面表I的结果，也在图I所示涉及如国际专利公开WO 2007000618所示来自大戟科植物乳胶的极性溶剂提取物的级份的3-(2，4，6-十二碳三烯酰基)巨大戟二萜醇和3-(2，4，6，8-十四碳四烯酰基)-巨大戟二萜醇的1:1混合物。实验室编号4SII
表

本发明涉及选自巨大戟二萜醇、羊毛甾-8,24-二烯-3-醇化合物及其混合物的多环化合物作为抗-AIDS剂的制药用途。