试剂盒的制作方法 【技术领域】，尤其涉及一种试剂盒。 [0002]在生物化学领域，均需要采用多种不同的试剂对生物材料进行检测等操作，操作人员需要事先集中准备各种试剂，然后才能进行检测试验。为了方便操作人员进行检测试验，本领域设计了许多试剂盒，将多种需要的试剂装于试剂管中，这些试剂管预先集中放置于试剂盒内，统一管理和使用。但是，在现有技术中，装有试剂的试剂管仅仅是简单无序地放置于一个盒体内，这样，并不能适用于试剂管数量较多的情形，当试剂管数量较多的时候，则容易混淆试剂，导致试验容易出现误差，降低检测效率，而且试剂管之间也容易相互干扰和影响，进一步降低了检测数据的准确度。显然，对于一些对试验精度要求比较高的试验，以及试剂使用种类较多的试验，现有的试剂盒根本无法满足其要求:例如检测免疫球蛋白重链的V-J重排和免疫球蛋白重链CDR3的编码序列的试验。 [0003]免疫球蛋白、T细胞受体和HLA(人类白细胞抗原)是人类基因组中最活跃的分子，决定和反映了人和环境的相互作用。免疫大分子的多样性使得机体能识别无数的外来物质和清除体内产生的部分代谢物。免疫大分子多样性产生的机制主要有基因重排、体细胞突变、非模板核苷酸的插入与缺失等。免疫球蛋白重链重排指V、D、J三种基因片段重排形成多种CDR3编码序列，首先是DJ基因片段重排，重排后的基因片段再与V基因进行组合，得到编码CDR3的基因；在免疫球蛋白轻链中，先进行K链基因重排，若重排失败，则λ链基因开始重排，由重排、非模板核苷酸的插入与缺失等机制产生多种多样特异性的基因片段。由此，一个个体内可能产生1011个特异性的分子。免疫系统是机体抵御病原菌入侵与免疫调节的重要系统，对其研究有很重要的意义。可见，设计一种可用于检测免疫球蛋白重链的V-J重排和免疫球蛋白重链⑶R3的编码序列的试剂盒是非常有必要的。 实用新型内容 [0004]本实用新型的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种易于管理和转移、有效提高检测试验准确度和效率的试剂盒。
[0005]本实用新型是这样实现的，一种试剂盒，用于检测免疫球蛋白重链的V-J重排和免疫球蛋白重链CDR3的编码序列，其包括:
[0006]用于识别免疫球蛋白重链家族中V基因片段并引导进行聚合酶链式反应的第一引物试剂管组，其包括至少一支装有引物的第一引物试剂管；
[0007]用于识别免疫球蛋白重链家族中J基因片段并引导进行聚合酶链式反应的第二引物试剂管组，其包括至少一支装有引物的第二引物试剂管；
[0008]用于存放所述第一引物试剂管组及所述第二引物试剂管组的盒体，所述盒体设有用于存放所述第一引物试剂管组的第一盒腔以及用于存放所述第二引物试剂管组的第二盒腔；
[0009]用于将所述第一引物试剂管组固定设置于所述第一盒腔内的第一固定架以及用于将所述第二引物试剂管组固定设置于所述第二盒腔内的第二固定架；
[0010]所述第一引物试剂管组及所述第一固定架均设于所述第一盒腔内，所述第二引物试剂管组及所述第二固定架均设于所述第二盒腔内。
[0011]进一步地，所述第一引物试剂管组包括至少一支装有与V基因片段互补的序列的所述第一引物试剂管；所述第二引物试剂管组包括至少一支装有与J基因片段互补的序列的所述第二引物试剂管。
[0012]更进一步地，所述第一引物试剂管组包括至少一支装有正义链引物的所述第一引物试剂管；所述第二引物试剂管组包括至少一支装有反义链引物的所述第二引物试剂管。
[0013]具体地，所述第一引物试剂管组包括至少一支装有与V基因片段的保守区互补的序列的所述第一引物试剂管；所述第二引物试剂管组包括至少一支装有与J基因片段的保守区互补的序列的所述第二引物试剂管。
[0014]进一步地，所述第一引物试剂管及所述第二引物试剂管均包括管体及管盖，所述管体具有管腔且其上端开设有管口，所述管盖盖合于所述管口上。
[0015]更进一步地，所述管体的管口外周设有外螺纹，所述管盖设有与所述外螺纹适配的内螺纹，所述管盖与所述管体螺纹连接。
[0016]具体地，所述第一固定架及所述第二固定架均包括一载板及若干管套，所述载板上设有若干个与所述管体适配的固定孔，所述管套具有容所述管体插入的内腔且其上端设有与所述固定孔对应的端口，所述管套设于所述载板的下表面上且其端口与所述固定孔对应，所述管体穿过所述固定孔并插设于所述管套内。
[0017]优选地，所述第一盒腔及所述第二盒腔内均设有用于固定所述载板的卡固结构，所述载板卡设于所述卡固结构内。
[0018]进一步地，所述卡固结构包括用于支撑所述载板的支撑块以及便于载板滑入滑出的凸块，所述支撑块与所述凸块成间距设于所述盒体的内壁，所述凸块位于所述支撑块上方，所述载板夹置于所述支撑块及所述凸块之间。
[0019]更进一步地，所述试剂盒还包括盒盖，所述盒盖盖合于所述盒体上。
[0020]本实用新型所提供的试剂盒具有以下技术效果:
[0021]本实用新型通过设置两个盒腔(第一盒腔及第二盒腔)，将第一引物试剂管组和第二引物试剂管组分开放置、有序排列，归类管理试剂管，从而达到归类管理引物试剂的效果。操作人员在采用该试剂盒进行检测免疫球蛋白重链的V-J重排和/或免疫球蛋白重链⑶R3的编码序列时，可准确有序地拾取和放置试剂管，保证所选用的试剂准确无误，也可避免混淆使用过的引物试剂管，有效提高检测的效率和准确度。另外，第一引物试剂管组和第二引物试剂管组分别通过第一固定架和第二固定架进行类聚集群，操作人员可以批量整取整放试剂管，便于试剂管的更换和转移。




[0022]图1为本实用新型实施例中试剂盒的立体示意图，其中，盒盖处于开启状态；
[0023]图2为本实用新型实施例中第一引物试剂管的立体示意图；
[0024]图3为本实用新型实施例中第一引物试剂管的立体示意图，其中，管盖为局部剖视图；
[0025]图4为本实用新型实施例中第一固定架的立体示意图；
[0026]图5为本实用新型实施例中盒体的立体示意图；
[0027]图6为图5中I的局部放大图；
[0028]图7为本实用新型实施例中第一固定架及第二固定架设置于盒体内的立体示意图。


[0029]为了使本实用新型的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。
[0030]本实用新型基于以下原理:假设有一种引物组合物，该引物组合物包括第一引物组和第二引物组。其中，第一引物组由至少一种V区引物组成，第二引物组由至少一种J区引物组成。在本文中，术语“V区引物”指的是这样的一种引物，其能够特异性地识别免疫球蛋白重链家族中的V基因片段，从而可以引导进行聚合酶链式反应，由此第一引物组中所包含的V区引物的每一种均包含与至少一个V基因片段互补的序列。术语“J区引物”指的是这样的一种引物，其能够特异性地识别免疫球蛋白重链家族中的J基因片段，从而可以引导进行聚合酶链式反应，由此第一引物组中所包含的J区引物的每一种均包含与至少一个J基因片段互补的序列。在V区引物和J区引物的引导下，可以通过扩增反应例如PCR扩增，从含有重链编码基因的核酸样本中特异性地扩增包含V基因片段和J基因片段的编码序列。由于免疫球蛋白重链的CDR3是由V、D、J基因片段重排产物所编码的，因而通过特异性识别V和J基因片段引物，即第一引物组和第二引物组，能够有效地从包含⑶R3编码序列的核酸样本中扩增获得CDR3编码序列的扩增产物，另外，基于CDR1、CDR2属于V基因，并没有参与重排过程；在重链中，CDR3是V-D-J重排的产物，因而通过采用上述引物组合物，能够高特异性地从样本中扩增富集获得CDR3的编码序列，而不会存在其他的干扰序列。从而能够实现对重链CDR3编码序列的有效富集，进而为针对CDR3进行深入研究提供了便利的工具。也就是说，上述引物组合物可用于检测免疫球蛋白重链的V-J重排，可用于检测免疫球蛋白重链⑶R3的编码序列。
[0031]需要说明的是，在本文中所涉及的生物化学知识均可在相关领域查阅获得，本文仅复述较为重要和相关的知识，其余相关知识不再赘述。
[0032]参见图1，基于上述原理，本实用新型实施例提供了一种试剂盒，用于检测免疫球蛋白重链的V-J重排和免疫球蛋白重链CDR3的编码序列，其包括:
[0033]用于识别免疫球蛋白重链家族中V基因片段并引导进行聚合酶链式反应的第一引物试剂管组1，其包括至少一支装有引物的第一引物试剂管11 ；
[0034]用于识别免疫球蛋白重链家族中J基因片段并引导进行聚合酶链式反应的第二引物试剂管组2，其包括至少一支装有引物的第二引物试剂管21 ；
[0035]用于存放所述第一引物试剂管组I及所述第二引物试剂管组2的盒体3，参见图5，所述盒体3设有用于存放所述第一引物试剂管组I的第一盒腔31以及用于存放所述第二引物试剂管组2的第二盒腔32 ；
[0036]用于将所述第一引物试剂管组I固定设置于所述第一盒腔31内的第一固定架4以及用于将所述第二引物试剂管组2固定设置于所述第二盒腔32内的第二固定架5 (参见图7)；
[0037]所述第一引物试剂管组I及所述第一固定架4均设于所述第一盒腔31内，所述第二引物试剂管组2及所述第二固定架5均设于所述第二盒腔32内。
[0038]本实用新型通过设置两个盒腔(第一盒腔31及第二盒腔32)，将第一引物试剂管组I和第二引物试剂管组2分开放置、有序排列，归类管理试剂管，从而达到归类管理引物试剂的效果。操作人员在采用该试剂盒进行检测免疫球蛋白重链的V-J重排和/或免疫球蛋白重链⑶R3的编码序列时，可准确有序地拾取和放置试剂管，保证所选用的试剂准确无误，也可避免混淆使用过的引物试剂管，有效提高检测的效率和准确度。另外，第一引物试剂管组I和第二引物试剂管组2分别通过第一固定架4和第二固定架5进行类聚集群，操作人员可以批量整取整放试剂管，便于试剂管的更换和转移。
[0039]本实施例中的盒体3设置了两个盒腔，但是制造时可以根据实际需要，设置多个盒腔，本实用新型的保护范围并不限于两个。
[0040]具体地，所述第一引物试剂管组I包括至少一支装有与V基因片段互补的序列的所述第一引物试剂管11 ;所述第二引物试剂管组2包括至少一支装有与J基因片段互补的序列的所述第二引物试剂管21。
[0041]作为本实用新型的一种优选实施方式，所述第一引物试剂管组I包括至少一支装有正义链引物的所述第一引物试剂管11 ;所述第二引物试剂管组2包括至少一支装有反义链引物的所述第二引物试剂管21。经试验发现，上述引物能够进一步提高将引物组合物用于富集免疫球蛋白重链CDR3编码序列时的富集效率。试剂盒通过增设上述引物的试剂管，可有效提闻检测的效率，扩大适用范围。
[0042]作为本实用新型的另一种优选实施方式，所述第一引物试剂管组I包括至少一支装有与V基因片段的保守区互补的序列的所述第一引物试剂管11 ;所述第二引物试剂管组2包括至少一支装有与J基因片段的保守区互补的序列的所述第二引物试剂管21。第一引物试剂管11内的试剂可以在减少引物的数量的同时，提高对免疫球蛋白重链CDR3编码序列进行富集的效率，提高各CDR3编码序列扩增的均一性，从而能够真实地反映CDR3编码序列在宿主中的分布比例。第二引物试剂管组2内的试剂可以在减少引物的数量的同时，提高对免疫球蛋白重链CDR3编码序列进行富集的效率，提高各CDR3编码序列扩增的均一性，从而能够真实地反映⑶R3编码序列在宿主中的分布比例。因此，试剂盒通过增设上述引物的试剂管，可有效提高检测的效率，扩大适用范围。
[0043]参见图2与图3，图2及图3所示均为第一引物试剂管11的示意图，然而，作为本实用新型的一种实施方式，在本实施例中，第二引物试剂管21与第一引物试剂管11的结构完全相同，因此，在附图中不再另外示出第二引物试剂管21的示意图，第二引物试剂管21的结构示意图可以参考图2与图3:所述第一引物试剂管11及所述第二引物试剂管21均包括管体111及管盖112,所述管体111具有管腔且其上端开设有管口 1111，所述管盖112盖合于所述管口 1111上。本实用新型所提及的引物均装于管体111的管腔内。本实用新型还可通过为管盖112设置不同的颜色，进一步加强识别的效果。
[0044]参见图3，所述管体111的管口外周设有外螺纹1112，所述管盖112设有与所述外螺纹适配的内螺纹1121，所述管盖112与所述管体111螺纹连接。以螺纹连接的形式接合管盖112与管体111，能够保证试剂管的密封性，使试剂不溢出、不易受污染、不易变质。当然，管盖112与管体111还可以其他方式接合，例如卡合结构。
[0045]参见图4，图4所示为第一固定架4的示意图，然而，作为本实用新型的一种实施方式，在本实施例中，第二固定架5与第一固定架4的结构完全相同，因此，在附图中不再另外示出第二固定架5的示意图，第二固定架5的结构示意图可以参考图4:所述第一固定架4及所述第二固定架5均包括一载板41及若干管套42，所述载板41上设有若干个与所述管体111适配的固定孔411，所述管套42具有容所述管体111插入的内腔且其上端设有与所述固定孔411对应的端口，所述管套42设于所述载板41的下表面上且其端口与所述固定孔411对应，所述管体111穿过所述固定孔411并插设于所述管套42内。管套42可用于保护每一支试剂管，使其即使受到强烈碰撞，也不至于受损，而且可以分隔相邻的试剂管，使它们之间不相互影响。另外，多个管套42设于同一块载板41上，方便整体批量移动转移多个试剂管。值得说明的是，固定孔411、管套42及试剂管的数量可根据具体需要设置，而不以附图所示的为限。
[0046]参见图5与图7，为了防止载板41在盒体3内上下窜动，所述第一盒腔31及所述第二盒腔32内均设有用于固定所述载板41的卡固结构33，所述载板41卡设于所述卡固结构33内。
[0047]参见图6，所述卡固结构33包括用于支撑所述载板41的支撑块331以及便于载板41滑入滑出的凸块332，所述支撑块331与所述凸块332成间距设于所述盒体3的内壁，所述凸块332位于所述支撑块331上方，所述载板41夹置于所述支撑块331及所述凸块332之间。支撑块331与凸块332的数量及布局可根据需要设置，在本实施例中，它们分布于每个盒腔的四个侧壁上，当然，本实用新型中的盒腔并不仅限于长方体状，其还可为圆柱体状等，因此支撑块331与凸块332的布局形式可根据盒腔的具体形状布局，只要能够达到防止载板41上下窜动的效果即可。在本实施例中，凸块322为半球体状，这样，载板41的滑入和滑出就十分方便和灵活了。
[0048]参见图1，本实用新型所提供的试剂盒还可包括盒盖6，所述盒盖6盖合于所述盒体3上。盒盖6与盒体3之间可以以分体的形式实现，也可以以铰接的形式实现，具体根据需要而定。
[0049]实际上，本实用新型所提供的试剂盒不仅仅适用于免疫球蛋白重链的V-J重排的检测和免疫球蛋白重链CDR3的编码序列的检测，其还适用于其他类似的生化检测试验。
[0050]以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。