专利名称：一种具有高度吸水溶胀性能的壳聚糖止血膜的制作方法壳聚糖(Chitosan)，学名(1，4) _2_氨基_2_脱氧-β _D_葡萄糖，是由甲壳素 (N-乙酰-2-乙酰氨基-D-葡萄糖以1-4糖苷键连接而成)经脱乙酰化反应后得到的一种 生物高分子，其分子链中通常含有N-乙酰胺基葡萄糖和N-氨基葡萄糖两种结构单元，两者 的比例随脱乙酰化程度的不同而不同。壳聚糖优异的止血性能已经得到人们的认可，诸多文献报道了壳聚糖具有优 异的止血性能并研究其止血机理。文献《Effects of chitin and chitosan on blood coagulation》(Carbohydrate Polymers)报道，甲壳素和壳聚糖都能促进血液凝固，实 验结果表明，壳聚糖的止血速度要快于甲壳素。甲壳素聚集血小板能力强于壳聚糖，壳 聚糖能更多的聚集红细胞。同时，壳聚糖和甲壳素都有促进伤口愈合的作用。文献《The performance of a fly-larva shell-derived chitosan sponge as an absorbable surgical hemostatic agent)) (Biomaterials)自制了一种壳聚糖冻干海绵，其对壳聚糖乙 酸溶液冻干处理，得到一种多孔易吸收的止血材料。经过动物学评价，此种冻干海绵表现出 优异的止血性能，与目前市场上应用的明胶海绵及氧化纤维素止血材料相比，其止血时间 更短。目前已用于外科手术止血，例如美国Hemcon公司的壳聚糖绷带(Chitosan Bandages)，主要用于急性外伤出血及枪伤的现场止血治疗；英国的“CEL0X” (2006年通过 美国的FDA认证及欧盟的CE认证；2010年通过中国食品药品监督管理局认证)。但是因壳聚糖的特殊结构，其不溶于水，这一性质导致壳聚糖敷料创面粘附性差。发明内容本发明提供一种具有高度吸水溶胀性能的壳聚糖止血膜的制作方法，目的是解决 现有壳聚糖敷料的创面粘附性差的问题。为达到上述目的，本发明采用的技术方案是一种具有高度吸水溶胀性能的壳聚 糖止血膜的制作方法，由下列步骤组成第一步制备壳聚糖凝胶将壳聚糖溶液注入敞口的模具，然后将该模具的敞口用单向渗透膜封闭，再将所述模 具浸入沉析液中至壳聚糖完全沉析得到壳聚糖凝胶；其中，所述沉析液是质量浓度为1% 10%的氢氧化钠溶液、质量浓度为1% 10%的氢氧化钾溶液、质量浓度为1% 10%的碳酸 钠溶液或者质量浓度为5% 20%的氯化钠溶液；所述单向渗透膜为滤纸或者聚丙烯多孔 膜；第二步羧化反应将第一步制得的壳聚糖凝胶用去离子水洗涤至PH值为6 10，然后在壳聚糖的N-位 或0-位进行羧化反应，使壳聚糖凝胶的羧化度达到1% 20% ；其中，所述羧化反应的羧化 剂是丁二酸酐的二甲基亚砜溶液或者氯乙酸的异丙醇溶液，所述羧化反应的取代基为琥珀 酰基或者羧甲基；当在0-位进行羧化反应时，再将壳聚糖凝胶放入25 60°C的0. lmol/L 氢氧化钠溶液中反应0. 5 1. 5小时，然后用乙醇洗涤至少三次； 第三步交联反应将第二步制得的壳聚糖凝胶浸入质量浓度为1% 5%的氯化钙中进行交联反应10 40分钟，然后用去离子水洗涤； 第四步增塑反应将第三步制得的壳聚糖凝胶浸入丙三醇溶液中进行增塑反应，取出浙干、干燥后即得 具有高度吸水溶胀性能的壳聚糖止血膜；所述丙三醇溶液是将丙三醇溶于水中制得，其浓 度为 0. 5% 10% (m/v, g/100ml)。上述技术方案中的有关内容解释如下1、上述方案中，上述方案中，脱乙酰度的计算方式如《分析化学研究简报》2002年第7 期第846 848页，贾之慎、李秀玲所撰写的《酸碱电导滴定法测定壳聚糖脱乙酰度》。2、上述方案中，所述模具可以是培养皿等类似具有敞口，其它部位密封的器皿。
3、上述方案中，羧化度的定义每IOOg壳聚糖羧化之后，羧化基团总质量占产物 总质量的比例。
羧化基团的测定方式如《北京化工大学学报》第31卷第2期第14 17页，刘长 霞等撰写的《N，0-羧甲基壳聚糖羧化度计算式的修正》。
本发明中，凝胶体系下，壳聚糖的羟基、氨基不可能完全羧化，但羧化度的计算仍 以反应完成之后，羧化基团质量占产物总质量的百分比计算。
4、上述方案中，m/v表示每IOOml溶剂中溶解的溶质的克数。
5、上述方案中，所述聚丙烯多孔膜可以采用专利号为200710099005.4的中国发 明专利公开的《非对称性的聚丙烯多孔膜及其制备方法》制备。
6、上述方案中，所述壳聚糖溶液是将壳聚糖溶解于稀酸后经过滤、静置脱泡后制 得，其浓度为 1% 6% (m/v, g/100ml)；7、上述方案中，所述壳聚糖的脱乙酰度为55% 99%，分子量为100000 500000。
8、上述方案中，所述稀酸是1% 5%(m/v，g/100ml)的甲酸、1% 5%(m/v，g/100ml) 的乙酸或者1% 5% (m/v, g/100ml)的盐酸。
9、上述方案中，所述第四步的干燥是在温度为45 80°C的真空或者常压条件下 进行。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点和效果1、本发明对表层壳聚糖进行羧化改性，并使得羧化度达到1% 20%，提高止血膜的吸 水性，从而使其创面粘附性能好；2、本发明同时以CaCl2对敷料进行适度交联，即提高了敷料的力学强度，又可额外为血 液凝固提供必要的Ca2+，与壳聚糖的止血产生协同作用，加快止血速度。
3、本发明通过单向渗透凝胶法，制备出的壳聚糖止血膜遇水不卷曲，与组织贴附 性好，使用极其方便。

下面结合实施例对本发明作进一步描述实施例一一种具有高度吸水溶胀性能的壳聚糖止血膜的制作方法 (1)取2g壳聚糖，脱乙酰度95%，分子量100，000，加入250ml三颈烧瓶中，加入200ml 洲稀乙酸溶液，室温搅拌至完全溶解，配制成1% (m/v)的壳聚糖溶液，静置脱泡；(2)将上 述溶液过滤，得澄清壳聚糖溶液；(3 )将上述壳聚糖溶液注入模具(培养皿)中，在其上覆盖 一层单向渗透膜，将模具放入质量浓度为的5%Na0H沉析液过夜，至壳聚糖完全沉析，形成 壳聚糖凝胶，大量去离子水冲洗至中性pH=6. 0 8. 0 ； (4)在密闭反应器中加入丁二酸酐 的二甲亚砜溶液(丁二酸酐溶于40ml 二甲亚砜)，加热至60°C，将上述中性壳聚糖凝胶放 入密闭容器反应30分钟后取出；(5)将凝胶放入25°C的0. lmol/L NaOH溶液反应lh，取出 凝胶，用足量乙醇反复洗涤5 6次，经检测，其羧化度为5% ;(6)将上述部分羧化的壳聚 糖凝胶浸泡在3%的CaCl2溶液(m/v)中10分钟后取出，大量去离子水冲洗干净，浙干；(7) 将上述凝胶浸泡入5% (m/v)的丙三醇溶液中若干时间，取出，浙干；(8)将上述壳聚糖凝胶 60°C干燥，即得高度吸水溶胀止血膜。
实施例二 一种具有高度吸水溶胀性能的壳聚糖止血膜的制作方法(1)取4g壳聚糖，脱乙酰度85%，分子量200，000，加入250ml三颈烧瓶中，加入200ml 洲稀乙酸溶液，室温搅拌至完全溶解，配制成洲(m/v)的壳聚糖溶液，静置脱泡；(2)将上 述溶液过滤，得澄清壳聚糖溶液；(3 )将上述壳聚糖溶液注入模具中，在其上覆盖一层单向 渗透膜，将模具放入5%Na0H沉析液过夜，至壳聚糖完全沉析，形成壳聚糖凝胶，大量去离子 水冲洗至中性pH=6. 0 8. 0 ； (4)在密闭反应器中加入丁二酸酐的二甲亚砜溶液(3g 丁二 酸酐溶于40ml 二甲亚砜)，加热至60°C，将上述中性壳聚糖凝胶放入密闭容器反应30分钟 后取出；(5)将凝胶放入25°C的0. 1 mol/L NaOH溶液反应lh，取出凝胶，用足量乙醇反复 洗涤5 6次；(6)将上述部分羧化的壳聚糖凝胶浸泡在3%的CaCl2溶液(m/v)中10分钟 后取出，大量去离子水冲洗干净，浙干；(7)将上述凝胶浸泡入5% (m/v)的丙三醇溶液中若 干时间，取出，浙干；(8)将上述壳聚糖凝胶60°C真空干燥，即得高度吸水溶胀止血膜。
实施例三一种具有高度吸水溶胀性能的壳聚糖止血膜的制作方法(1)取6g壳聚糖，脱乙酰度65%，分子量500，000，加入250ml三颈烧瓶中，加入200ml 洲稀乙酸溶液，室温搅拌至完全溶解，配制成3% (m/v)的壳聚糖溶液，静置脱泡；(2)将上 述溶液过滤，得澄清壳聚糖溶液；(3 )将上述壳聚糖溶液注入模具中，在其上覆盖一层单向 渗透膜，将模具放入5%Na0H沉析液过夜，至壳聚糖完全沉析，形成壳聚糖凝胶；(4)在密闭 反应器中加氯乙酸、异丙醇(m/m=l 10)，加热至60 80°C，将上述壳聚糖凝胶放入密闭容 器反应30分钟后取出，用足量乙醇反复洗涤5 6次；(6)将上述部分羧化的壳聚糖凝胶 浸泡在3%CaCl2溶液中10分钟后取出，大量去离子水冲洗干净，浙干；(7)将上述凝胶浸泡 入5% (m/v)的丙三醇溶液中若干时间，取出，浙干；(8)将上述壳聚糖凝胶60°C干燥，即得 高度吸水溶胀止血膜。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人 士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明 精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。


一种具有高度吸水溶胀性能的壳聚糖止血膜的制作方法，本发明选用脱乙酰度55%～99%、分子量为100,000～500,000的壳聚糖溶解于适量甲酸、乙酸或者盐酸的稀溶液，配制得0.5%～5%(m/v)的壳聚糖溶液，静置脱泡；将溶液注于模具中，在其上覆盖一层单向渗透膜，再将模具浸泡碱性介质中，利用单向渗透中和法制得壳聚糖凝胶，用大量去离子水洗涤凝胶至中性；进行N-位或O-位羧化，浸泡入1%～5%CaCl2稀溶液中少许时间，适度交联，取出，洗涤干净；将凝胶浸泡在1%～10%(m/v)浓度的丙三醇溶液中1小时，取出后沥干；最终60℃干燥成型即得止血膜。由于壳聚糖本身具有优异的止血效果；同时Ca2+也是凝血因子之一，具有促进血液凝固功效，两种作用在此发生协同作用，共同促进止血。