专利名称：：精制多价抗蛇毒冻干血清及使用方法：某种蛇毒制备的单价抗蛇毒血清，对用于制备本种抗血清的蛇毒中和的特异性最强，对属于同一科属的其他蛇毒次之，而对不同科蛇毒更差、甚至没有。在临床上应用时，必须确诊被咬的蛇种后，才能发挥显著的疗效。为了在未确定哪种毒蛇咬伤的情况下，用一种蛇毒血清能有效地中和同一科属或不同科属的蛇毒，科学工作者选择多种蛇毒配制抗原给动物免疫制备多价抗蛇毒血清。例如美国生产的多价抗响尾蛇毒血清，选用美国西部菱斑响尾蛇毒(Crotalusatrox)、东部菱斑响尾蛇毒(Crotalusadamanteus)、响尾蛇恐怖亚种蛇毒(Crotalusdurissusterrificus)和矛头蝮蛇毒(Bothropsatrox)的混合抗原，用马免疫，由马血浆制备而成，由这四种蛇毒制成的多价抗蛇毒血清能中和响尾蛇科Crotalidae中的17种蛇毒。但是，该血清仍然局限于中和同一科属蛇毒，而且，该血清只针对该地区响尾蛇咬伤具有疗效。我国虽制备多种单价抗蛇毒血清，但对危害大的区域性的各种毒蛇所致的蛇伤，尚无多价血清。此前，发明人已提出申请号200610010908.6"精制多价抗蛇毒冻干血清的方法"专利申请，包括使用五步蛇、蝮蛇、烙铁头、竹叶青、蝰蛇、银环蛇、金环蛇、眼镜蛇、眼镜王蛇毒液作为免疫抗原，用滤膜过滤除菌透析、脱毒后微量渐进免疫动物，经胃酶消化一硫酸铵盐析过柱层析纯化后收集抗体，脱盐、冻干；并以小鼠实验评估蛇毒毒力半数死亡量LDs。和抗蛇毒血清效价。
本发明的目的是以达到一定纯度抗原结合片段的多种蛇毒冻干抗血清配制多价抗蛇毒血清，并提出在临床治疗时使用该血清的方法。本发明多价抗血清具有特征是以F(ab)2抗原结合片段含量为60%-80%冻干疏松固体状抗血清进行组合配置，如表l:表1<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>抗血清优化组合配置为表2:表2<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>所述的血液循环蛇毒类的蝮蛇、五步蛇、蝰蛇与神经蛇毒类的眼镜王蛇、银环蛇、金环蛇、眼镜蛇抗血清分别装量。精制抗蛇毒血清是由免疫动物的血浆经胃蛋白酶短时间消化，通过加热使其变性沉淀除去不含抗体的Fc片段，收集能与抗原结合的F(ab)2片段而制成，F(ab)2片段与抗血清组合用量关系将确定在生产和检验中的标准。上表中，以抗血清含有60%-80%F(ab)2片段作为中和九种蛇毒的生物量浓度，进行配置。实验证明，七种蛇毒抗血清组合配置后，能够中和九种毒蛇通常的排毒量。同时，在免疫学上，同一种属蛇毒抗体-抗原交叉反应较强.因此，一方面，本发明抗蛇毒血清的每支装量不但由抗体本身纯度高低及各种毒蛇的排毒量确定，还须根据血清交叉中和每种蛇毒的量来计算装量。另一方面，神经毒类与血液循环毒类抗血清分别装量，能确定蛇类时，单独使用；不能确定时，应两支同时使用，减少延误。本发明多价抗血清使用方法对蛇毒已进入机体者，用注射用水或生理盐水稀释抗蛇毒血清，肌肉或静脉注射，同时一并注射抗过敏药，如朴而敏、或笨海拉明、或非拉根、或地塞米松、或强化可地松。注射抗过敏药是由于动物血清制备的抗蛇毒血清含蛋白量10%以上，该蛋白对人体是异种蛋白当静脉注射量高达10ml时，过敏反应的发生率并未完全消除。分别装量的神经毒类与血液循环毒类抗血清，当能确定蛇种时，羊独使用；不能确定时，应两支同时使用。而抗蛇毒血清的稳定性与保存温度是密切相关。冻干抗蛇毒血清即使保存在37匸，温度对效价的影响也不明显，保存于41C以下能延长抗血清的稳定性。本发明仅使用七种抗蛇毒血清制备的多价抗蛇毒血清，能在未确定哪种毒蛇咬伤的情况下注射抗过敏药物后直接注射，及时地、有效地治疗我国地域内各种毒蛇所致蛇伤。为此，使我国的抗蛇毒血清质量达到了国际水平。具体实施方式(一)抗蛇毒血清的装量及稳定性用含量601-8(W抗原结合片段F(ab)2的五步蛇、蝮蛇、蝰蛇、银环蛇、金环蛇、目艮镜蛇、眼镜王蛇抗血清的冻千抗血清进行组合，该组合能够中和九种毒蛇通常排毒量。如表3:表3:抗蛇毒血清装量与排毒鼉的关系<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>按表1将称量的冻干抗血清分，艮成神经毒类和血液循环毒类两支，保存i14x:以下。(二)本发明多价抗蛇毒冻干血清对小鼠中和九种蛇毒作用及量效关系受试小鼠随机分成对照组和多价血清给药组，每组6只以上。对照组中，九种蛇毒分别按1^),,蛇毒量注射小鼠腹腔，注射后观察72小时。给药组中，不同抗血清剂量用0.2ml硼酸盐緩冲液溶解，再分别中和九种1^),,蛇毒量，37TC水浴30min后，注射小鼠腹腔，注射后观察72小时小鼠死亡情况。如表4,以不同剂量的多价抗血清对九种蛇毒中和后，对照组死亡率100%，最高剂量组之死亡率为0%。表4:多价抗蛇毒血淸对九种蛇毒中和小鼠实验及影响<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>(三)本发明抗蛇毒血清的临床使用方法对分别装量的神经毒类与血液循环毒类抗血清，当能确定蛇种时，单独使用；不能确定时，应两支同时使用。为了争取治疗时间，使用抗蛇毒血清时不必作皮试。先肌肉注射抗过敏药物如苯海拉明20mg并将2支抗蛇毒血清稀释于200ml生理盐水中，每分钟15滴作静脉滴注，15分钟后如无反应，再加入余下全部抗蛇毒血清摇匀后作快速滴注。如有反应可调节滴注速度以达脱敏效果。对重危病人应比一般剂量大3-6倍或更大。权利要求1、精制多价抗蛇毒冻干血清，其特征是以F(ab)2抗原结合片段含量为60％-80％冻干疏松固体状抗血清进行组合配置，如下表<tablesid="tabl0001"num="0001"><table><tgroupcols="8"><colspeccolname="c001"colwidth="17%"/><colspeccolname="c002"colwidth="14%"/><colspeccolname="c003"colwidth="12%"/><colspeccolname="c004"colwidth="10%"/><colspeccolname="c005"colwidth="12%"/><colspeccolname="c006"colwidth="10%"/><colspeccolname="c007"colwidth="11%"/><colspeccolname="c008"colwidth="13%"/><thead></column></row><row><column><entrymorerows="1">蛇毒种类</entry><entrymorerows="1">蝮蛇</entry><entrymorerows="1">五步蛇</entry><entrymorerows="1">蛙蛇</entry><entrymorerows="1">眼镜王蛇</entry><entrymorerows="1">银环蛇</entry><entrymorerows="1">金环蛇</entry><entrymorerows="1">眼镜蛇</entry></column></row></thead><tbody></column></row><row><column><entrymorerows="1">抗血清用量(mg/人份)</entry><entrymorerows="1">342.5-1035</entry><entrymorerows="1">1177-3182</entry><entrymorerows="1">456-666</entry><entrymorerows="1">1419-2128</entry><entrymorerows="1">220-331</entry><entrymorerows="1">880-1320</entry><entrymorerows="1">3188-4782</entry></column></row></tbody></tgroup></column></row><table></tables>2、根据权利要求1所述的精制多价抗蛇毒冻干血清，其特征是抗血清优化组合配置为下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table>3、根据权利要求1或2所述的精制多价抗蛇毒冻干血清，其特征是蝮蛇、五步蛇、蝰蛇血液循环毒类与眼镜王蛇、银环蛇、金环蛇、眼镜蛇神经毒类抗血清分别装量。4、精制多价抗蛇毒冻干血清的使用方法，其特征是肌肉或静脉注射经生理盐水稀释的多价抗蛇毒血清和抗过敏药，如朴而敏、或苯海拉明、或非拉根、或地塞米松、或强化可地松。5、根据权利要求4所述的精制多价抗蛇毒冻干血清的使用方法，其特征是对分别装量的神经毒类与血液循环毒类抗血清，当能确定蛇种时，单独使用；不能确定时，应两支同时使用。6、根据权利要求4所述的精制多价抗蛇毒冻千血清的使用方法，其特征是多价抗蛇毒冻干血清保存于4"C以下。全文摘要精制多价抗蛇毒冻干血清及使用方法，属于含有针对两种以上抗原的抗体免疫血清。本发明目的是以多种冻干抗蛇毒血清配制多价抗蛇毒血清及用法。其特征是抗原结合片段F(ab)₂含量为60％-80％冻干抗血清，以mg/人份为单位，蝮蛇342.5-1035、五步蛇1177-3182、蝰蛇456-666、眼镜王蛇1419-2128、银环蛇220-331、金环蛇880-1320、眼镜蛇3188-4782组合配置；其优化组合配置蝮蛇635、五步蛇1959、蝰蛇561、眼镜王蛇1774、银环蛇276、金环蛇1100、眼镜蛇3985。所述血液循环蛇毒类与神经蛇毒类抗血清分别装量。用法肌肉或静脉注射经生理盐水稀释的抗蛇毒血清及抗过敏药，如扑而敏。本发明仅使用七种抗蛇毒血清制备，在未确定哪种毒蛇咬伤的情况下直接注射，能及时有效地治疗我国地域内各种毒蛇所致蛇伤，达到了抗蛇毒血清的国际先进水平。文档编号A61K39/395GK101347617SQ20061001093公开日2009年1月21日申请日期2006年6月2日优先权日2006年6月2日发明者冯子良,尹惠琼,李作生,杨美峰,王双印,范泉水,薇邱,颖郑申请人:成都军区疾病预防控制中心军事医学研究所