专利名称：嘧啶并[6,1－a]异喹啉－4－酮的衍生物的制作方法 在环APM(cAMP)作为次级信使存在的所有细胞中，cAMP的胞内浓度通过与其形成和降解有关的两个过程加以调节。细胞外表面上的膜结合受体的刺激(例如通过β-肾上腺素受体激动剂)导致腺苷酸环化酶激活而从ATP产生cAMP。细胞中存在的磷酸二酯酶可通过将其水解为腺苷一磷酸(AMP)而降低cAMP的浓度。在象哮喘这样的疾病中，与伴随的支气管缩小和炎症过程有关的主要细胞受到cAMP的抑制性控制。III型磷酸二酯酶的抑制剂升高cAMP的胞内浓度，导致支气管平滑肌松弛，而IV型磷酸二酯酶的抑制剂抑制破坏性介质从促炎细胞中释放。因此，原则上，联合PDE III/IV抑制剂应当具有期望的β-肾上腺素受体激动剂加上吸入的抗炎类固醇的作用，这两类药物是目前在治疗严重哮喘中的支柱药物。另外，联合PDE III/IV抑制剂通过吸入给药应当达到与β-激动剂加上吸入的类固醇类似的有益效果，且应当是对哮喘和其他呼吸疾病的、没有类固醇的不希望的糖皮质激素作用诸如骨质疏松和生长发育障碍的、不寻常的有效治疗方式。PDE III/IV抑制剂的可能的不利作用(例如恶心和呕吐、胃酸分泌、心血管作用诸如心收缩力增加、血管舒张和潜在的致心律不齐活性)应当是可通过利用吸入将化合物直接释放到肺部而避免的。我们期望该物质是作用持久、没有刺激性并具有不会令人厌恶到对病人的顺从性产生任何不利影响的味道。具有PDE III/IV抑制活性并已知具有抗高血压的血管舒张活性的嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮衍生物的实例是曲喹新(9，10-二甲氧基-3-甲基-2-?基亚氨基-2，3，6，7-四氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮)，它由De Souza等在医药化学杂志27 1470-1480(1984)中和在GB-A-1597717中记载。如De Souza等和GB-A-1597717中的描述，曲喹新具有宝贵的药理学性能，并可对患有例如呼吸疾病的人受治疗者给药。但是，由于它的苦味和体外数据显示的其不很理想的作用持久性使得它不适合通过吸入给药。
现已发现有可能设计某种是PDE抑制剂的嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮衍生物，它具有相对曲喹新的更长的持续作用时间和其他有用性能诸如改善的口味。按照本发明的第一个方面，提供了通式I化合物 其中R1和R2各自独立地表示C1-6烷基或C2-7酰基；X表示OCH2或基团CR3R4，其中R3和R4各自独立地表示氢原子或C1-3烷基；R5表示氢原子或C1-3烷基、C2-3链烯基或C2-3炔基；R6表示氢原子或C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氨基、C1-6烷基氨基、二(C1-6)烷基氨基或C2-7酰氨基；
R7和R8各自独立地表示氢或卤原子或羟基、三氟甲基、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C2-7酰基、C1-6烷硫基、C1-6烷氧基或C3-6环烷基；R9表示氢或卤原子或羟基、三氟甲基、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C2-7酰基、C1-6烷硫基、C1-6烷氧基或C3-6环烷基；或其盐；但不包括化合物6，7-二氢-2-苯氧基-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1a]异喹啉-4-酮。
从本发明的第一个方面的范围内排除的化合物6，7-二氢-2-苯氧基-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1a]异喹啉-4-酮是上文中提到的De Souza等的文章中记载的化合物“8f”。De Souza等只记载6，7-二氢-2-苯氧基-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1a]异喹啉-4-酮是不好的低血压剂，而没有记载它具有支气管扩张活性。
本文中所用的术语“卤素”或其简写“卤”是指氟、氯、溴或碘。
本文中所用的术语“C1-6烷基”指的是具有1至6个碳原子的直链或支链烷基。这类烷基的例证是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基和己基。C1-4烷基是优选的。
本文中所用的术语“C2-3链烯基”指的是具有2至3个碳原子且另外具有一个合适的E或Z立体化学的双键的直链或支链烃基。该术语包括例如乙烯基和1-丙烯基。
本文中所用的术语“C2-3炔基”指的是具有2至3个碳原子且另外具有一个三键的直链烃基。该术语包括例如乙炔基和1-丙炔基。
本文中所用的术语“C2-6链烯基”指的是具有2至6个碳原子且另外具有一个合适的E或Z立体化学的双键的直链或支链烃基。该术语包括例如乙烯基、1-丙烯基、1-和2-丁烯基以及2-甲基-2-丙烯基。C2-3链烯基是优选的。
本文中所用的术语“C2-6炔基”指的是具有2至6个碳原子且另外具有一个三键的直链或支链烃基。该术语包括例如乙炔基、1-丙炔基、1-和2-丁炔基、2-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔基。C2-3炔基是优选的。
本文中所用的术语“C1-6烷氧基”指的是具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基。这类烷氧基的例证是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、新戊氧基和己氧基。C1-4烷氧基是优选的。
本文中所用的术语“C2-7酰基”指的是具有2至7个碳原子的直链或支链酰基。这类酰基的例证是乙酰基、丙酰基(或propiono或propanoyl)、异丙酰基(或isopropiono或isopropanoyl)、丁酰基(或butanoyl)、异丁酰基(或isobutanoyl)、戊酰基(或valeryl)、己酰基(或capronyl)和庚酰基。
本文中所用的术语“C2-7酰氧基”指的是具有2至7个碳原子的直链或支链酰氧基。这类酰氧基的例证是乙酰氧基、丙酰(或propiono或propanoyl)氧基、异丙酰(或isopropiono或isopropanoyl)氧基、丁酰(或butanoyl)氧基、异丁酰(或isobutanoyl)氧基、戊酰(或valeryl)氧基、己酰(或capronyl)氧基和庚酰氧基。C2-4酰氧基是优选的。
本文中所用的术语“C3-6环烷基”指的是具有3至6个碳原子的脂环基。这类环烷基的例证是环丙基、环丁基、环戊基和环己基。环戊基和环己基是优选的。
本文中所用的术语“C1-6烷硫基”指的是具有1至6个碳原子的直链或支链烷硫基。这类烷硫基的例证是甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基、异丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基、戊硫基、新戊硫基和己硫基。C1-4烷硫基是优选的。
本文中所用的术语“C1-6烷基氨基”指的是具有1至6个碳原子的直链或支链烷基氨基。这类烷基氨基的例证是甲氨基、乙氨基、丙氨基、异丙氨基、丁氨基、异丁氨基、仲丁氨基、叔丁氨基、戊氨基、新戊氨基和己氨基。C1-4烷基氨基是优选的。
本文中所用的术语“二(C1-6)烷基氨基”指的是在每个烷基中具有1至6个碳原子的直链或支链二-烷基氨基。这类二烷基氨基的例证是二-甲氨基、二-乙氨基、二-丙氨基、二-异丙氨基、二-丁氨基、二-异丁氨基、二-仲丁氨基、二-叔丁氨基、二-戊氨基、二-新戊氨基和二-己氨基。二(C1-4)烷基氨基是优选的。
本文中所用的术语“C2-7酰氨基”指的是具有2至7个碳原子的直链或支链酰氨基。这类酰氨基的例证是乙酰氨基、丙酰(或propiono或propanoyl)氨基、异丙酰(或isopropiono或isopropanoyl)氨基、丁酰(或butanoyl)氨基、异丁酰(或isobutanoyl)氨基、戊酰(或valeryl)氨基、己酰(或capronyl)氨基和庚酰氨基。C2-4酰氨基是优选的。
当有使化合物呈碱性的取代基时，例如当R6是氨基、烷基氨基或二烷基氨基时，加入酸会导致成盐。酸可以任何适宜的酸，并且可以是有机或无机的。
优选的通式I化合物包括其中各基团符合下列条件的那些，这些条件是独立的或是任何相容的组合R1和R2各自表示C1-6烷基，优选C1-4烷基；R1和R2是彼此相同的；R3和R4各自表示氢原子；R5表示氢原子；R6表示氢原子；R7和R8各自表示C1-6烷基，优选甲基、乙基或异丙基；R7和R8是彼此相同的；R9表示卤原子或甲基或乙酰基。
例举性的化合物包括1、6，7-二氢-2-(2，6-二甲基苯氧基)-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮；2、2-(2，6-二乙基苯氧基)-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮；3、6，7-二氢-2-(2，6-二异丙基苯氧基)-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮；4、6，7-二氢-9，10-二甲氧基-2-(2，4，6-三甲基苯氧基)-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮；5、2-(4-氯-2，6-二甲基苯氧基)-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮；6、2-(4-溴-2，6-二甲基苯氧基)-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮；7、6，7-二氢-9，10-二甲氧基-2-(4-乙酰基-2，6-二甲基苯氧基)-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮；8、2-(2，6-二氯苯氧基)-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮；9、9，10-二甲氧基-2-(2-甲基苯氧基)-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮；10、9，10-二甲氧基-2-(2-异丁基苯氧基)-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮；11、2-(2-叔丁基苯氧基)-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮；12、9，10-二甲氧基-2-(2-乙基苯氧基)-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮；13、2-(2-环戊基苯氧基)-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮。
化合物2-(2，6-二乙基苯氧基)-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮和6，7-二氢-2-(2，6-二异丙基苯氧基)-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮是特别优选的。
通式I化合物可以利用本领域中任何适宜的已知方法和/或利用下述方法加以制备，下述方法本身也构成本发明的一部分。
按照本发明的第二个方面，提供了如上所定义的通式I化合物、但不包括化合物6，7-二氢-2-苯氧基-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1a]异喹啉-4-酮的制备方法，该方法包括(a)通式II化合物 其中R1、R2、R5、R6和X如对通式I中所定义，而LG表示离去基团，与通式III化合物反应 其中R7、R8和R9如对通式I所定义；或者(b)当通式I中X表示基团CR3R4、其中R3表示氢原子、R4表示氢原子或C1-3烷基、且R5表示氢原子或C1-3烷基时，将通式IX化合物氢化 其中R1、R2、R6、R7、R8和R9如对通式I所定义；和(c)可选地将如此形成的通式I化合物转化为另一个通式I化合物。
在通式II化合物中，离去基团LG可以是氯，硫代烷基(thioalkyl)，优选硫代甲基，或烷基磺酰基，优选甲基磺酰基。最好是氯。
步骤(a)的反应条件通常是诸如有助于该反应的，该反应是亲核置换反应，优选在合适的溶剂诸如二甲基甲酰胺或异丙醇中在碱诸如碳酸钾的存在下进行。合适的反应条件可以见GB-A-1597717和EP-A-0124893，它们公开了相关化合物的制备。
步骤(a)反应通常适用于生产这样的通式I化合物其中R6表示氢原子或C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氨基、C1-6烷基氨基或C2-7酰氨基，而R1至R5和R7至R9以及X具有上文中给出的含义。
其中LG表示氯原子的通式II化合物可以通过通式IV化合物或通式V化合物与磷酰氯反应来制备，或者通过将通式IV化合物与五氯化磷一起加热来制备 其中R1、R2、R5、R6和X如对通式I所定义。其中LG表示硫代烷基的通式II化合物可以通过下述过程从通式IV化合物制备通式IV化合物与五硫化二磷一起在溶剂诸如二噁烷或吡啶中加热，最初得到中间体式IV化合物的硫代衍生物，其在合适的溶剂诸如四氢呋喃或乙酸乙酯中用烷化剂诸如烷基碘例如甲基碘处理，得到硫代烷基化合物。该硫代烷基化合物在溶剂诸如二氯甲烷中用例如3-氯过苯甲酸氧化，得到烷基砜衍生物。
通式III化合物是本领域中已知的并可从商业来源获得的取代苯酚，或者可以容易地利用本质上已知的方法制备，例如通过重氮盐的水解从相应取代的苯胺化合物制备。
通式IV化合物可以利用通式V化合物(其中R1、R2、R5和R6如对通式I所定义)在比要得到其中LG表示氯原子的通式II化合物时所需的条件更弱的条件、即更低的温度下与环化脱水剂诸如磷酰氯反应来制备。NL-A-6,401,827(Hoffmann-La Roche)中还记载了另一种方法，该方法涉及使式VIII表示的氨基甲酰基亚甲基-四氢异喹啉与碳酸二乙酯在乙醇的乙醇钠中进行反应 通式V化合物可以利用通式VI化合物 其中R1、R2、R5和X如对通式I所定义，与R6CH(CO2Et)2(其中R6如对通式I所定义)和强碱诸如乙醇钠在热乙醇溶液中反应来制备。另一方面，在热的甲醇的甲醇钠的存在下可以使用相应的二甲酯。
通式VI化合物可以利用通式VII化合物 其中R1、R2、R5和X如对通式I所定义，与脲在160℃下加热进行反应来制备。另一方面，通式VII化合物可以与氰酸钾在醋酸的存在下在合适的溶剂诸如乙醇中进行反应。
通式VII化合物是本领域中已知的或者可以容易地利用本质上已知的方法制备。例如，B.Lal等在医药化学杂志271470-1480(1984)中描述了1-(3，4-二甲氧基苯乙基)巴比土酸的制备。
现在来说步骤(b)，步骤(b)的反应条件通常是有助于氢化反应的，该反应通常在合适的溶剂诸如醇例如乙醇中与贵金属催化剂诸如钯、铂、铑或镍一起在室温下进行。催化剂可以用例如木炭或矾土来支持。
通式IX化合物可以从通式X化合物制备 其中R1、R2和R6如对通式I所定义，而R4和R5独立地表示氢原子或C1-3烷基。该反应如上文中有关将通式IV化合物经由通式II化合物转化为通式I化合物所描述的那样进行，优选的反应条件也相应一致。
通式X化合物可以从通式IV化合物(其中X表示基团CR3R4，其中R3表示氢原子，R4表示氢原子或C1-3烷基；而R5表示氢原子或C1-3烷基)通过与贵金属催化剂诸如钯、铂、铑或镍一起在300至350℃的温度下加热来制备。催化剂可以支撑在木炭或矾土上，且反应在惰性溶剂诸如芳族烃例如对伞花烃中进行。
在可选步骤(c)中，通式I化合物可以转化为另一个通式I化合物。例如，其中R6表示NH2的通式I化合物可以通过标准化学转化为其中R6表示C1-6烷基氨基的通式I化合物，诸如通过被护衍生物诸如酰基或对甲苯磺酰基衍生物的烷基化，然后诸如通过酸水解除去保护基。其中R6表示二(C1-6)烷基氨基的通式I化合物可以通过烷基氨基衍生物的直接烷基化制备。其中R5、R6、R7、R8和/或R9表示C2-3链烯基、C2-6链烯基、C2-3炔基或C2-6炔基的通式I化合物可以氢化得到具有饱和键的相应化合物。氢化的反应条件如上文中对步骤(b)的描述。
按照第三个方面，本发明提供了包含通式I化合物，包括被排除的化合物(6，7-二氢-2-苯氧基-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1a]异喹啉-4-酮)，和兽医或药学上可接受的载体或稀释剂的组合物。优选该组合物是用于人类医学的药物组合物。
本发明化合物是PDE抑制剂，因此具有宝贵的药理学性能，诸如利用豚鼠分离气管的场刺激收缩的抑制证明的支气管扩张药活性，和在对由PHA(植物血球凝集素)刺激的人单核细胞的研究中阐明的抗炎活性。体外和体内数据显示该化合物具有长的作用时间，如当作为干粉直接吸入到肺部时通过它们对豚鼠的组胺诱导的支气管痉挛的持续保护作用所证明的。本发明因此还涉及对患有呼吸疾病包括特别是哮喘、过敏性哮喘、枯草热、过敏性鼻炎、支气管炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)和膀胱纤维变性的病人的急性、慢性或预防性治疗。它们也可局部用于皮肤疾病，诸如特应性皮炎和牛皮癣，或用于眼睛的炎症或任何其他疾病包括大脑局部出血或其中递增的cAMP胞内浓度被认为是有益的自身免疫疾病。
在本发明的第一个方面中列出的一个或多个化合物可以与一种或多种无毒的药学上和/或兽医学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂和/或推进剂和，如果需要，其他活性成分结合存在。合适的载体或稀释剂是本领域中已知的(例如药用赋形剂手册(1994)第二版，A.Wade/PJ Weller编辑，The Pharmaceutical Press，美国药学协会)。
本发明的化合物和组合物优选通过吸入给药，例如通过可以粉末形式或以溶液或悬浮液形式分散药物活性成分的气雾剂或喷雾剂。具有粉末分散性能的药物组合物通常除了活性成分以外还含有沸点低于室温的液体推进剂和，如果需要，附加剂诸如液体或固体非离子或阴离子表面活性剂和/或润湿剂，以形成稳定的分散体。其中药物活性成分在溶液中的药物组合物除了活性成分外还含有合适的推进剂，以及此外，如果需要，附加的溶剂和/或稳定剂。也可以使用压缩空气代替推进剂，为此有可能根据需要借助合适的压缩和膨胀设备。药物组合物还可以通过呼吸激活的吸入设备释放。对于通过吸入给药来说优选干粉组合物。
按照第四个方面，本发明提供了用于医学的通式I化合物或含有通式I化合物、包括被排除的化合物(6，7-二氢-2-苯氧基-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1a]异喹啉-4-酮)的组合物。
本发明化合物可用作磷酸二酯酶同工酶的抑制剂。本发明的化合物或组合物可以用于预防或治疗其中化合物或组合物是有用的任何疾病，但特别是其中希望升高cAMP的胞内浓度的疾病。化合物可有效对抗的疾病的实例包括呼吸疾病，特别是包括哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、过敏性哮喘、枯草热、过敏性鼻炎和膀胱纤维变性。它们也可局部用于皮肤疾病诸如特应性皮炎或牛皮癣，眼睛的炎症，或任何其他疾病包括大脑局部缺血或其中递增的cAMP胞内浓度被认为是有益的自身免疫疾病。
本发明的该方面特别与人的治疗有关，但也适用于普通的兽医产业，特别是家养动物诸如狗和猫以及农场动物诸如马、猪、牛、羊等。
在上述疾病的治疗中，每日服用不超过3次的、从约0.02mg到约200mg顺序的剂量水平是有用的。更特别地，每日服用不超过3次的、约0.2mg到约20mg的剂量范围是有效的。不过，特定剂量方案最终将由主治医师决定并将考虑象所用的药物、年龄、体重、症状的严重性和/或正在应用或将要应用的治疗的严重性、药物的给药方法、副反应和/或其他禁忌症等这样一些因素。
按照本发明该方面的投药法可以与其他活性药剂一起给予病人，这些活性药剂可以是例如本发明的不同化合物，或者是其他化合物。实例包括β2-肾上腺素受体激动剂、糖皮质激素类固醇、黄嘌呤衍生物、抗组胺化合物、白三烯拮抗剂、白三烯合成抑制剂和/或其结合物。
按照第五个方面，本发明提供了通式I化合物、包括被排除的化合物(6，7-二氢-2-苯氧基-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1a]异喹啉-4-酮)在制备III/IV型磷酸二酯酶同工酶抑制剂中的用途。本发明包括通式I化合物、包括被排除的化合物(6，7-二氢-2-苯氧基-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1a]异喹啉-4-酮)在制备支气管扩张药和/或抗喘药和/或用于预防或治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的药物中的用途。
本发明还涉及对哺乳动物的其中磷酸二酯酶同工酶抑制剂和/或支气管扩张药预期是有益的疾病的治疗或预防方法，该方法包括对所述哺乳动物给药适量的有效、无毒量的通式I化合物，包括被排除的化合物(6，7-二氢-2-苯氧基-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1a]异喹啉-4-酮)。本发明包括治疗或预防哺乳动物的哮喘和/或慢性阻塞性肺疾病(COPD)的方法。
本发明每个方面的优选特征彼此适用于本发明的各方面，细节上作必要的修改。
以下非限制性的实施例参照下列附图来阐述本发明

图1，在下文中实施例A(i)中提到，显示了DMSO(0.05％)对流出(superfused)的豚鼠气管的胆碱能收缩反应的影响(实验数(n)为10)；图2，在下文中实施例A(i)中提到，显示了10μM实施例3化合物对豚鼠气管的对电场刺激随时间的收缩的影响(实验数(n)为3)，其中箭头表示冲洗期的开始；图3，在下文中实施例A(i)中提到，显示了10μM实施例11化合物对流出的豚鼠气管的胆碱能收缩反应的影响(实验数(n)为3)，其中箭头表示冲洗期的开始；
图4，在下文中实施例A(i)中提到，显示了10μM实施例12化合物对流出的豚鼠气管的胆碱能收缩反应的影响(实验数(n)为3)，其中箭头表示冲洗期的开始；图5，在下文中实施例A(i)中提到，显示了10μM实施例13化合物对流出的豚鼠气管的胆碱能收缩反应的影响(实验数(n)为3)，其中箭头表示冲洗期的开始；图6，在下文中实施例A(ii)中提到，显示了10μM实施例1化合物对豚鼠气管的对电场刺激随时间的收缩的影响(n＝1)，其中箭头表示冲洗期的开始；图7，在下文中实施例A(ii)中提到，显示了10μM实施例8化合物对豚鼠气管的对电场刺激随时间的收缩的影响(n＝1)，其中箭头表示冲洗期的开始；图8，在下文中实施例A(ii)中提到，显示了10μM实施例2化合物对豚鼠气管的对电场刺激随时间的收缩的影响(n＝1)，其中箭头表示冲洗期的开始；图9，在下文中实施例A(i)中提到，显示了10μM实施例10化合物对豚鼠气管的对电场刺激的收缩的影响；图10，在下文中实施例B中提到，显示了本发明的各种化合物对抗人单核细胞的由PHA刺激的增殖的作用，其中每个点代表6次实验的平均值，而垂直线代表平均值的标准误差。
制备12-氯-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成。

将按照B.Lal等在医药化学杂志27 1470-1480(1984)中记载的方法制备的1-(3，4-二甲氧基苯基)巴比土酸(70g，0.24mol)和磷酰氯(300ml，3.22mol)的混合物回流2.5小时。过量的磷酰氯通过加温蒸馏(20mmHg)除去。冷却后，残余物用二噁烷(100ml)调成浆状并小心地加入到用力搅拌的冰/水溶液(1升)中。加入氯仿(1升)，所得混合物用30％氢氧化钠溶液碱化。将有机层分离，水相进一步用氯仿(2×750ml)萃取。合并后的有机萃取物用水(1.5升)洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩，得到树胶状物质(90g)。其在甲醇中搅拌几分种，过滤并用甲醇(200ml)、二乙醚(2×200ml)洗涤，在40℃下真空干燥，得到标题化合物，为黄色/桔黄色固体。47g，62％(300MHz，CDCl3)δ2.96(2H，t，C(7)H2)；3.96(6H，s，2xOCH3；4.20(2H，t，C(6)H2)；6.61(1H，s，C(1)H)；6.76(1H，s，Ar-H)；7.10(1H，s，Ar-H).
制备22，6-二乙基苯酚向2，6-二乙基苯胺(14.9g，0.10mol)的冰醋酸溶液(200ml)中边搅拌边滴加浓硫酸(90ml)，同时冷却使温度保持在10-20℃。然后该溶液在0℃下搅拌，同时滴加亚硝酸钠(9.0g，0.13mol)的水溶液(50ml)，滴加的速率要使温度保持低于5℃。该混合物在0℃下再搅拌20分钟，然后缓慢加入脲(3.0g)的冰冷水溶液(300ml)以产生琥珀色溶液。将浓硫酸(150ml)和水(600ml)的混合物搅拌并加热至轻微回流，同时在保持轻微回流下滴加重氮盐的冰冷溶液。重要的是将重氮盐溶液直接滴到硫酸溶液中而不要接触到烧瓶的侧壁。加完后该混合物在回流下再搅拌10分钟，然后在室温下搅拌18小时。深红棕色产物通过过滤取出，用水洗涤并溶于二氯甲烷。该溶液用硫酸镁干燥并蒸发得到固体，其用柱色谱法纯化(硅胶；2∶1石油醚40-60℃∶二氯甲烷)，得到标题化合物，为无色结晶。9.6g，64％mpt.38-39℃(60MHz，CDCl3)δ1.23(6H，t，CH3)；2.63(4H，q，CH2)；4.67(1H，s，OH)；6.90-7.20(3H，m，Ar-H)。
实施例16，7-二氢-2-(2，6-二甲基苯氧基)-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将按照制备1制得的2-氯-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮(20g，68.4mmol)和2，6-二甲基苯酚(从Aldrich购得)(25.1g，167mmol)溶于无水N，N-二甲基甲酰胺(160ml)。加入碳酸钾(28.3g，205mmol)并将该混合物在氮气下加热至90℃达3小时。然后将该混合物冷却，加入到水(600ml)中并用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。合并后的有机萃取物用碳酸氢钠(300ml)、水(2×500ml)和盐水(300ml)洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩得到树胶状残余物。其用乙醚(250ml)研制，通过过滤分离并从甲醇(300ml)中重结晶，得到标题化合物，为淡黄色固体。20g，67％mpt.216-218℃。(300MHz，d6DMSO)δ2.05(6H，s，2x CH3)；2.95(2H，t，C(7)H2)；3.85(3H，s，OCH3)；3.90(3H，s，OCH3)；4.05(2H，t，C(6)H2)；6.95-7.15(5H，m，Ar-H)；7.55(1H，s，Ar-H).
实施例26，7-二氢-2-(2，6-二异丙基苯氧基)-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将按照制备1制得的2-氯-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮(23.1g，79mmol)和2，6-二异丙基苯酚(42.2g，237mmol)溶于无水N，N-二甲基甲酰胺(160ml)。加入碳酸钾(32.3g，234mmol)并将该混合物在氮气下加热至90℃达4.5小时。然后将该混合物冷却，加入到水(800ml)中并用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。合并后的有机萃取物用碳酸氢钠(300ml)、水(2×500ml)和盐水(300ml)洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。残余物利用柱色谱法纯化(硅胶；二氯甲烷，然后是存在于二氯甲烷中的2％甲醇)。分离产物从乙酸乙酯(250ml)中重结晶，为淡黄色固体。残余的乙酸乙酯通过将化合物溶于二氯甲烷中并真空浓缩而除去，得到标题化合物，为淡黄色固体。20.5g，52％mpt.123-126℃。(300MHz，CDCl3)δ1.15(12H，d，4x CH-Me)；3.0(4H，m)；4.00(6H，s，2xOCH3)；4.25(2H，t，C(6)H2)；6.40(1H，s，C(1)H)；6.65(1H，s，Ar-H)；7.20(4H，m).
实施例32-(2，6-二乙基苯氧基)-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将按照制备1制得的2-氯-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮(1.0g，3.41mmol)和2，6-二乙基苯酚(1.53g，10.2mmol)溶于丙-2-醇(125ml)。加入碳酸钾(1.41g，10.2mmol)并将该混合物在氮气下加热至回流24小时。然后将该混合物冷却并过滤除去固体。将滤液真空蒸发，残余物用柱色谱法纯化(硅胶；2∶1乙酸乙酯∶二氯甲烷)，得到标题化合物，为淡黄色固体。1.21g，88％mpt.180-181℃。
HPLC面积(％) 100.00柱 ODS(150×4.6mm)MP pH＝4 KH2PO4/MeOH(50/50)FR 0.8ml/分钟RT 11.634检测250nm(300MHz，CDCl3)δ1.21(6H，t，CH3)；2.54(4H，q，CH2)；2.99(2H，t，J＝6.5Hz，C(7)H2)；3.98(3H，s，OCH3)；4.00(3H，s，OCH3)；4.22(2H，t，J＝6.5Hz，C(6)H2)；6.42(1H，s，C(1)H)；6.79(1H，s，Ar-H)；7.10-7.19(3H，m，Ar-H)；7.22(1H，s，Ar-H).
实施例46，7-二氢-9，10-二甲氧基-2-(2，4，6-三甲基苯氧基)-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将按照制备1制得的2-氯-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮(1.2g，4.10mmol)和2，4，6-三甲基苯酚(从Aldrich购得)(1.68g，12.34mmol)溶于丙-2-醇(145ml)。加入碳酸钾(1.70g，12.30mmol)并将该混合物在氮气下加热16小时。冷却至室温后，将该混合物过滤，沉淀用丙酮洗涤。将合并后的滤液真空蒸发。残余物溶于二氯甲烷(200ml)并用10％氢氧化钠(水溶液)(40ml)洗涤，然后用水(40ml)洗涤。有机层用硫酸镁干燥、过滤并真空蒸发得到棕色油。经柱层析(硅胶；4∶1乙酸乙酯∶石油醚40-60°，接着是4∶1乙酸乙酯∶二氯甲烷)得到黄色固体。该物质用二乙醚洗涤，通过过滤收集并真空干燥，得到标题化合物，为淡黄色固体。0.56g，35％.
mpt.230-231℃m/z C23H24N2O4要求M＝392 实测(M+1)＝393HPLC面积(％) 99.65柱 ODS(150×4.6mm)MP 0.2M NH4Ac/MeOH(30/70)FR(ml/分钟) 0.7RT(分钟) 13.006检测 250nm(300MHz，CDCl3)δ2.15(6H，s，2xCH3)；2.28(3H，s,CH3)；3.0(2H，t，C(7)H2)；3.98(6H，s，2xOCH3)；4.23(2H，t，C(6)H2)；6.42(1H，s，C(1)H)；6.78(1H，s，Ar-H)；6.86(2H，s，2x Ar-H)；7.20(1H，s，Ar-H).
实施例52-(4-氯-2，6-二甲基苯氧基)-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将按照制备1制得的2-氯-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮(1.5g，5.13mmol)和4-氯-2，6-二甲基苯酚(从Lancaster Chemicals购得)(2.41g，15.39mmol)溶于丙-2-醇(180ml)。加入碳酸钾(2.13g，15.41mmol)并将该混合物在氮气下加热16小时。冷却至室温后，将该混合物过滤，沉淀用丙酮洗涤。将合并后的滤液真空蒸发。残余物溶于二氯甲烷(200ml)并用10％氢氧化钠(水溶液)(45ml)洗涤，然后用水(45ml)洗涤。有机层用硫酸镁干燥、过滤并真空蒸发得到桔黄色油。经柱层析(硅胶；4∶1乙酸乙酯∶二氯甲烷)得到黄色固体。该物质用二乙醚洗涤，通过过滤收集并真空干燥，得到标题化合物，为淡黄色粉末。1.78g，84％.
mpt.201-203℃。
m/z C22H2135ClN2O4要求M＝412实测(M+1)＝413C22H2137CIN2O4要求M＝414实测(M+1)＝415HPLC面积(％) 97.91柱 ODS(250×4.6mm)MP 0.1M NH4Ac/MeCN(40/60)FR(ml/分钟) 0.7RT(分钟) 12.466检测 250nm(300MHz，CDCl3)δ2.13(6H，s，2xCH3)；2.99(2H，t，C(7)H2)；3.98(3H，s，OCH3)；4.02(3H，s，OCH3)；4.23(2H，t，C(6)H2)；6.43(1H，s，C(1)H)；6.78(1H，s，Ar-H)；7.04(2H，s，2x Ar-H)；7.21(1H，s，Ar-H).
实施例62-(4-溴-2，6-二甲基苯氧基)-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将按照制备1制得的2-氯-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮(1.5g，5.13mmol)和4-溴-2，6-二甲基苯酚(从Lancaster Chemicals购得)(3.1g，15.43mmol)溶于丙-2-醇(180ml)。加入碳酸钾(2.13g，15.41mmol)并将该混合物在氮气下加热16小时。冷却至室温后，将该混合物过滤，沉淀用丙酮洗涤。将合并后的滤液真空蒸发。残余物溶于二氯甲烷(200ml)并用10％氢氧化钠(水溶液)(45ml)洗涤，然后用水(45ml)洗涤。有机层用硫酸镁干燥、过滤并真空蒸发得到桔黄色油。经柱层析(硅胶；4∶1乙酸乙酯∶二氯甲烷)得到黄色固体。该物质用二乙醚洗涤，通过过滤收集并真空干燥，得到标题化合物，为淡黄色粉末。1.90g，81％.
mpt. 232-234℃。
m/zC22H2179BrN2O4要求M＝456实测(M+1)＝457C22H2181BrN2O4要求M＝458实测(M+1)＝459HPLC 面积(％)99.77柱 ODS(150×4.6mm)
MP 0.1M NH4Ac/MeCN(57/43)FR(ml/分钟) 1.0RT(分钟) 11.565检测 250nm(300MHz，CDCl3)δ2.14(6H，s，2xCH3)；2.98(2H，t，C(7)H2)；3.97(3H，s，OCH3)；3.99(3H，s，OCH3)；4.22(2H，t，C(6)H2)；6.43(1H，s，C(1)H)；6.78(1H，s，Ar-H)；7.19(2H，s，2x Ar-H)；7.21(1H，s，Ar-H).
实施例76，7-二氢-9，10-二甲氧基-2-(4-乙酰基-2，6-二甲基苯氧基)-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将按照制备1制得的2-氯-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮(1.5g，5.13mmol)和2，6-二甲基-4-羟基苯乙酮(从Maybridge Chemicals购得)(2.53g，15.41mmol)溶于丙-2-醇(180ml)。加入碳酸钾(2.13g，15.41mmol)并将该混合物在氮气下加热23小时。冷却至室温后，将该混合物过滤，沉淀用丙酮洗涤。将合并后的滤液真空蒸发。残余物溶于二氯甲烷(200ml)并用水(2×45ml)洗涤。有机层用硫酸镁干燥、过滤并真空蒸发得到桔黄色油。经柱层析(硅胶；4∶1乙酸乙酯∶二氯甲烷)得到黄色固体。该物质用二乙醚洗涤，通过过滤收集并真空干燥，得到标题化合物，为淡黄色粉末。1.81g，84％.
mpt. 228-230℃。
m/z C24H24N2O5要求M＝420实测(M+1)＝421HPLC面积(％) 99.32柱 ODSMP 0.1M NH4Ac/MeCN(65/35)FR(ml/分钟) 1.0RT(分钟) 13.840检测 250nm(300MHz，CDCl3)δ2.25(6H，s，2xCH3)；2.60(3H，s，CH3CO)；3.02(2H，t，C(7)H2)；3.99(3H，s，OCH3)；4.01(3H，s，OCH3)；4.23(2H，t，C(6)H2)；6.47(1H，s，C(1)H)；6.78(1H，s，Ar-H)；7.21(1H，s，Ar-H)；7.68(2H，s，2xAr-H).
实施例82-(2，6-二氯苯氧基)-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将按照制备1制得的2-氯-6，7-二氢-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并-[6，1-a]异喹啉-4-酮(25g，85mmol)和2，6-二氯苯酚(25.1g，153mmol)溶于无水N，N-二甲基甲酰胺(150ml)。加入碳酸钾(30g，217mmol)并将该混合物在氮气下加热至90℃达2小时。然后将该混合物冷却，在水(1升)和乙酸乙酯(500ml)之间分配。将所得沉淀过滤，用乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)洗涤，再次溶于二氯甲烷(500ml)并用盐水(200ml)洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。残余物从乙腈(600ml)中重结晶，得到标题化合物，为淡黄色固体。22g，53％
mpt.240-242℃。(300MHz，d6DMSO)δ2.05(2H，t，C(7)H2)；3.85(3H，s，OCH3)；3.90(3H，s，OCH3)；4.05(2H，t，C(6)H2)；7.00(1H，s，C(1)H)；7.15(1H，s，Ar-H)；7.35(1H，t，Ar-H)；7.65(1H，s，Ar-H).
实施例99，10-二甲氧基-2-(2-甲基苯氧基)-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将2-氯-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮(1)(1.5g，5.13mmol)和邻甲酚(1.66g，15.4mmol)溶于异丙醇(180ml)。加入碳酸钾(2.13g，15.4mmol)并将该混合物在氮气下加热回流18小时。冷却至室温后，将该混合物过滤，沉淀用丙酮洗涤。将合并后的滤液真空蒸发，残余物溶于二氯甲烷(220ml)，用10％NaOH(40ml)洗涤，然后用水(40ml)洗涤并干燥(MgSO4)。真空蒸发得到棕色油，其用硅胶柱色谱法纯化(EtOAc/石油醚80∶20)。得到标题化合物，为淡黄色固体，0.56g，35％。
M.p. 201-203℃。
m/zC21H20N2O4要求M＝364实测(M+1)＝365HPLC 面积(％) 99.01柱 ODS(150×4.6mm)MP 0.2M NH4OAc/MeOH(40/60)FR(ml/分钟)0.8
RT(分钟)14.976检测235nm1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.22(3H，s，ArCH3)，2.97(2H，t，CH2)，3.98(6H，s，2xOCH3)，4.21(2H，t，CH2)，6.40(1H，s，C＝CH)，6.78(1H，s，ArH)，7.04-7.25(5H，m，5xArH).
实施例109，10-二甲氧基-2-(2-异丁基苯氧基)-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6.1-a]异喹啉-4-酮的合成2-异丁基苯酚将叔丁醇钾(44.8g，400mmol)悬浮于经过脱气的庚烷(1300ml)并加入丁基锂(258ml，400mmol)。使该反应混合物在室温下搅拌20分钟，然后加入邻甲酚(10.8g，100mmol)，接着回流加热3小时。该混合物然后冷却至室温并使沉淀沉降。将过量溶剂轻轻倒出，残余物用戊烷洗涤。再重复一次该过程并将所得沉淀悬浮于THF(1500ml)。将该悬浮液通过套管转移到2-溴丙烷(10.33ml，110mmol)的THF溶液(500ml)中，该反应混合物在室温下搅拌过夜。该混合物通过加入水(50ml)使骤冷并用HCl(5M)酸化。将水相分离并用氯仿(3×100ml)萃取。将有机相合并、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩得到红棕色液体。该粗物质利用快速柱色谱法纯化(90∶10汽油∶EtOAc)得到标题化合物，为黄色油(7.63g，51％)。
9，10-二甲氧基-2-(2-异丁基苯氧基)-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮将2-异丁基苯酚(1.24g，8.16mmol)溶于THF(40ml)并冷却至-78℃。然后加入丁基锂(5.12ml，8.16mmol)，该反应混合物在-78℃下搅拌1小时，然后缓慢加热至室温过夜。反应通过加入NH4Cl(40ml)终止，该混合物用EtOAc(3×50ml)萃取。合并后的有机相用NH4Cl(50ml)洗涤。将该水相与先前洗涤后得到的水相合并，用EtOAc(50ml)萃取。现在将所有的有机相合并，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩得到黄色油状固体。向残余物中加入乙醚，滤出所得固体并用冰冷的乙醚洗涤。残余物利用快速柱色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱得到标题化合物，为白色固体(0.5g，18％)。 实施例112-(2-叔丁基苯氧基)-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将2-氯-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮(1.47g，5.0mmol)和2-叔丁基苯酚(2.25g，15.0mmol)溶于2-丙醇(180ml)。加入碳酸钾(2.07g，15.0mmol)，该混合物搅拌并在氮气下加热回流6小时。冷却至室温后，将该混合物过滤，滤液真空蒸发。残余物用硅胶柱色谱法纯化[乙酸乙酯/二氯甲烷(3∶2)]得到上述化合物(1.35g，66％)，为灰白色固体。
M.p. 226-228℃
M/z C24H26N2O4要求M＝406，实测m/z[ES+]＝407HPLC面积(％) 99.68柱 S5 C8(250×4.6mm)MP pH4 0.02M KH2PO4/CH3CN(35/65)RT(分钟) 9.175FR(ml/分钟) 0.7检测 254nm1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.39(9H，s，CH(CH)3)，2.97(2H，t，CH2)，3.97(3H，s，OCH3)，3.98(3H，s，OCH3)，4.23(2H，t，CH2)，6.38(1H，s，C＝CH)，6.78(1H，s，ArH)，7.05-7.27(4H，m，4xArH)，7.40(1H，m，ArH).
实施例129，10-二甲氧基-2-(2-乙基苯氧基)-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将2-氯-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮(1.47g，5.0mmol)和2-乙基苯酚(1.22g，10.0mmol)溶于2-丙醇(180ml)。加入碳酸钾(1.38g，10.0mmol)，该混合物搅拌并在氮气下加热回流6小时。冷却至室温后，将该混合物过滤，滤液真空蒸发。残余物用硅胶柱色谱法纯化[乙酸乙酯/二氯甲烷(3∶2)]得到上述化合物(1.27g，67％)，为淡黄色固体。
M.p.167-169℃M/z C22H22N2O4要求M＝378，实测m/z[ES+]＝379HPLC面积(％)99.46
柱 S5 C8(250×4.6mm)MP pH4 0.02M KH2PO4/CH3CN(35/65)RT(分钟)7.725FR(ml/分钟) 0.7检测254nm1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.21(3H，t，CH2CH3)，2.59(2H，q，CH2CH3)，2.97(2H，t，CH2)，3.97(6H，s，2xOCH3)，4.21(2H，t，CH2)，6.41(1H，s，C＝CH)，6.78(1H，s，ArH)，7.05-7.28(5H，m，5xArH).
实施例132-(2-环戊基苯氧基)-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮的合成 将2-氯-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮(1.20g，4.11mmol)和2-环戊基苯酚(1.0g，6.17mmol)溶于2-丙醇(150ml)。加入碳酸钾(1.14g，8.23mmol)，该混合物在氮气下搅拌并加热至回流18小时。冷却至室温后，将该混合物过滤，滤液真空蒸发。残余物用硅胶柱色谱法纯化[乙酸乙酯/二氯甲烷(3∶2)]得到上述化合物(0.51g，30％)，为淡黄色固体。
M.p.122-125℃M/z C25H26N2O4要求M＝418，实测m/z[ES+]＝419HPLC面积(％) 99.43柱 S5 C8(250×4.6mm)MP pH4 0.02M KH2PO4/CH3CN(35/65)
RT(分钟) 10.191FR(ml/分钟)0.7检测 254nm1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.57-2.05(8H，m，cyclopentyl 4xCH2)，2.97(2H，t，CH2)，3.13(1H，m，ArCH)，3.97(6H，s，2xOCH3)，4.21(2H，t，CH2)，6.38(1H，s，C＝CH)，6.78(1H，s，ArH)，7.07(1H，m，ArH)，7.18(3H，m，3xArH)，7.32(1H，m，ArH).
本发明化合物的药理学功用已在使用先前如上述实施例中所述合成的化合物进行的研究中得到证明。下面的结果用来阐述本发明化合物的一般应用。
实施例A本发明化合物对抗豚鼠分离气管的电诱导收缩的功效测试本发明化合物对抗豚鼠分离气管的电诱导收缩的功效。结果证明实施例2、3、10、11、12和13的化合物抑制了收缩反应，并有长的持续作用时间。
实施例A(i)-流出实验方法豚鼠气管环的流出按照以前公开的方法进行(Coleman等，肺药理学9107-117(1996))。简言之，将豚鼠气管标本切成环，然后通过面对平滑肌切割环而将其切开并悬挂在1g张力下的两个铂电极之间。该组织在37℃下用含有环加氧酶抑制剂消炎痛(5μM)的Krebs-Henseleit溶液以从1至3.25ml/分钟的速率流出并通入气体95％O2和5％CO2。使气管标本平衡40分钟，然后利用生理学方波刺激器开始电刺激，释放一串10秒钟的3Hz的方波脉冲，持续0.1ms并每100秒产生20V(约400mAmps)。本发明化合物以0.2至0.3ml/分钟的速率流出，对电场刺激的收缩反应使用MacLab软件记录在Macintosh计算机上。药物用DMSO制备并用Krebs-Henseleit溶液稀释，使最终的流出浓度为0.05至0.1％DMSO。
结果测定持续作用时间并表示为开始时间(OT50)和恢复时间(RT50)。测定达到对收缩反应的50％最大抑制所花费的时间(开始时间OT)，类似地，测定组织与化合物的接触终止后达到对收缩反应的最大抑制的50％逆转所花费的时间(恢复时间RT50)。这些数值显示在表1中。
如表1所示，所有的测试化合物都引起了对豚鼠分离气管的电场刺激产生的收缩反应的时间依赖性抑制。电场刺激的收缩反应的恢复是慢的，抑制反应在停止给药4小时后仍没有逆转。载体DMSO没有明显抑制电场刺激的收缩反应(图1)。
表1.OT50和RT50值

(除非另有对“n”的说明，否则每个数值都是3次观测值的均值和标准误差均值)实施例A(ii)-器官浴实验方法将豚鼠气管环悬挂在1g张力下的两个电极之间的器官浴中并接受利用生理学方波刺激器每100秒产生的电场刺激(3Hz，0.1ms持续时间和20V(约400mAmps))。实施例1、2和8化合物溶于含有吐温80(10％)和蒸馏水(0.01M)的DMSO中，然后将其加入到器官浴中使终浓度为10μM。
结果结果显示于图6(有关实施例1化合物)、图7(有关实施例8化合物)和图8(有关实施例2化合物)。所有化合物都导致对电场刺激的收缩反应的完全抑制且作用维持了2-4小时以上。
实施例B本发明化合物对抗人单核细胞的由PHA刺激的增殖的功效还研究了本发明化合物对人单核细胞的由PHA刺激的增殖的作用。增殖受到这些化合物的显著抑制，表明它们具有抗炎活性。下面的结果用来阐述新颖的本发明化合物的一般应用。
方法对正常的健康志愿者实施放血术并采集25ml血液。按照Banner等的方法(Banner等，英国药理学杂志116 3169-3174(1995))分离并纯化单核细胞。人外周单核细胞(100,000/孔)在37℃下在95％空气、5％CO2气氛中在存在或不存在实施例1、2和8化合物(0.001-100μM)的条件下用植物血球凝集素(PHA，2μg/ml)刺激24小时。24小时后，向每个孔中加入[3H]-胸苷(0.1μCi)，细胞再培养24小时。然后使用细胞收获器(ICN Flow，Buckinghamshire)将细胞收获到玻璃纤维滤器上并在闪烁计数器中计数。
结果所有受试化合物都导致对由PHA刺激的人单核细胞增殖的浓度依赖性抑制(n＝6；图9)。表2中显示了这些化合物的IC50值和95％置信限。结果还显示于图10中。表2各种化合物对抗由PHA刺激的人单核细胞增殖的IC50值(n＝6)

实施例C6，7-二氢-2-(2，6-二异丙基苯氧基)-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮(实施例2化合物)已显示是磷酸二酯酶(PDE)3和4型同工酶的强抑制剂。IC50值如下所示。
PDE3(nM)PDE4(nM)(人血小板)(人嗜中性白细胞)实施例2 1071195咯利普兰 ND 6412西洛酰胺 89 ND咯利普兰是已知的PDE4抑制剂，而西洛酰胺是已知的PDE3抑制剂。
ND-未确定实施例D测试6，7-二氢-2-(2，6-二异丙基苯氧基)-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮(实施例2化合物)对LPS诱导的TNF-α从人单核细胞的释放的作用。结果如下。
IC50(nM)化合物250 n＝6CDP 840(PDE4抑制剂)92 n＝6氰胍佐旦(PDE3抑制剂) ＞100μM实施例E有关6，7-二氢-2-(2，6-二异丙基苯氧基)-9，10-二甲氧基-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮(实施例2化合物)的体内试验1、上述化合物用组胺诱导的支气管痉挛模型进行测试。使清醒的豚鼠接受化合物干粉(微粉化的)。将药物与乳糖混合，使终浓度为0.25、2.5和25％。在接受药物后的不同时间将动物麻醉并用不同剂量的组胺进行刺激。记录气道总阻力和平均动脉血压。接受干粉(25％)产生了对抗组胺诱导的支气管痉挛的显著保护而没有改变平均动脉血压。
2、实施例2化合物(0.1至300μg/kg)对尿烷麻醉的豚鼠静脉给药使得平均动脉血压产生了剂量依赖性降低。将化合物溶于DMSO，然后用盐水稀释(有证据表明化合物已从溶液中出来)。
3、在卵清蛋白致敏豚鼠的抗原诱导的嗜曙红细胞增多模型中，在抗原刺激前1小时口服给药的实施例2化合物(10mg/kg)显著抑制了致敏豚鼠体内嗜曙红细胞在抗原刺激(气雾剂)后向肺部的募集反应。
实施例F化合物的味道对于口服给药的药物化合物来说，化合物的味道怎样是确保病人顺从性的非常重要的因素。出乎意料的是，本发明化合物基本上是无味的。因此它们特别适于口服给药，例如作为吸入用的干粉剂。
方法将上述实施例1至13的所有化合物、曲喹新(9，10-二甲氧基-3-甲基-2-?基亚氨基-2，3，6，7-四氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮)和去甲基曲喹新(9，10-二甲氧基-2-?基亚氨基-2，3，6，7-四氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮)各少量置于被告知实情的健康男性志愿者的舌尖上，并评定每种化合物的味道。
结果实施例1至13的所有化合物都不苦，因此它们与非常苦的曲喹新或去甲基曲喹新相比口味有显著的改善。


通式(I)化合物,其中R