专利名称：Cik细胞的诱导活化试剂盒的制作方法过继性细胞免疫治疗是肿瘤生物治疗的一种，它将自体或异体的免疫效应细胞分离后于体外经扩增、修饰等处理后回输或转输给肿瘤患者，使其在体内发挥效应以增强机体抗肿瘤能力的一种疗法，在肿瘤的综合治疗中占有重要的作用，已成为继手术、放疗、化疗后对肿瘤患者进行综合治疗的重要手段之一。免疫效应细胞包括淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和细胞因子活化的杀伤细胞(CIK)，LAK细胞和TIL细胞存在体外增殖数量不足、细胞分离过程复杂及治疗毒副反应大等缺点，限制了它们的进一步应用。CIK细胞作为一种新的免疫效应细胞，将人外周血单个核细胞在体外用多种诱导因子(IFN-γ、anti-⑶3McAb、人重组IL-1、人重组IL-2)共同培养一段时间后获得的一群异质细胞，具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和非主要组织相容性复合体(MHC)限制性的优点，在人体内可大规模扩增，可以在没有损伤机体免疫系统结构和功能的前提下，对肿瘤细胞具有直接杀伤作用及调节宿主免疫功能的作用。与其他过继性免疫治疗细胞相比，具有增殖速度快、活性高、杀瘤谱广等优点。近年来对CIK细胞的研究与开发应用也日渐深入，已经形成了较为成熟的CIK细胞诱导与培养方法，但在CIK细胞的培养过程中采用的试剂较多，标准不一致，培养过程中的工作量大，培养时间较长，染菌风险大，使许多研究人员尤其是各级医院的工作人员很难在短时间内培养出质量均一的CIK细胞。发明内容本实用新型要解决的技术问题是提供一种CIK细胞的诱导活化试剂盒，该CIK细胞的诱导活化试剂盒中存放的试剂采用统一标准制成，培养过程中无需另行配制试剂，减少培养过程中的工作量，缩短CIK细胞的培养时间，降低培养过程中染菌风险，在短时间内能够培养出质量均一的CIK细胞。本实用新型要解决的技术方案是一种CIK细胞的诱导活化试剂盒，包括盒体，盒盖，其特殊之处是在所述的盒体内放置试剂架，所述的试剂架上有六个插孔，所述的插孔分两排布置；在六个插孔内分别放置有内装淋巴细胞分离液、无血清培养基、诱导因子人重组IL-I 2 α、诱导因子抗⑶3单抗、诱导因子人重组IL-2和诱导因子IFN-γ的试剂瓶；在所述试剂架上对应试剂瓶位置和试剂瓶上分别设有标签。上述的CIK细胞的诱导活化试剂盒，在试剂瓶的瓶体和瓶盒上分别设有彼此对应的标签。本实用新型的优点是将内装采用统一标准配制的无血清培养基、诱导因子和淋巴细胞分离液的试剂瓶一同放入一个试剂盒内，在培养CIK细胞时无需另行配制无血清培养基和诱导因子，缩短了培养CIK细胞的时间；盒体、试剂架和试剂瓶为分体式结构，便于清洗消毒，降低了培养过程中的染菌风险，可在短时间内培养出质量均一的CIK细胞。图1是本实用新型的结构示意图；图2是图1中试剂架的结构示意图。图中1-盒体、2-盒盖、3-试剂架、301-插孔、4-试剂瓶、5-标签。如图1所示，该CIK细胞的诱导活化试剂盒由盒体1、盒盖2、位于盒体1内的试剂架3、放置在试剂架3内的试剂瓶4和标签5构成，所述的盒体1与盒盖2连接，以使盒盖2 可翻转。所述的试剂架3上设有六个插孔301，在六个插孔301内分别放置有内装淋巴细胞分离液、无血清培养基、诱导因子人重组IL-I 2 α、诱导因子抗⑶3单抗、诱导因子人重组IL-2和诱导因子IFN- γ的试剂瓶4，在所述试剂架3上对应试剂瓶4位置、试剂瓶4的瓶体与瓶盖上分别设有彼此对应的标签5，在标签5上分别标有文字“淋巴细胞分离液”、 “无血清培养基”、“诱导因子人重组IL-I 2 α ”、“诱导因子抗⑶3单抗”、“诱导因子人重组 IL-2”和“诱导因子IFN-Y ”。利用该CIK细胞的诱导活化试剂盒培养CIK细胞的步骤如下1、通过血细胞采集仪采集患者外周血单个核细胞，采集标准为=Karnofsky评分 ^ 60分，预计生存期>3个月；治疗前心、肝、肾功能及血常规大致正常；采血前1个月及治疗期间均未接受过放、化疗。2、打开CIK细胞的诱导活化试剂盒的盒盖2，将标签5上标有“淋巴细胞分离液” 所对应的试剂瓶4取出，打开瓶盖，取出淋巴细胞分离液放入离心管中，将通过血细胞采集仪采集患者外周血单个核细胞放入淋巴细胞分离液中，打开离心机进行梯度离心，离心机的转速为2000r/min，离心时间为20min ；离心后取界面层单个核细胞，PBS洗涤3次。3、从CIK细胞的诱导活化试剂盒中取出无血清培养基，将洗涤好的界面层单个核细胞放入无血清培养基中，细胞浓度为IXio 6/ml，置于温度在37 °C、浓度为5%的CO2中培养。4、从CIK细胞的诱导活化试剂盒中取出诱导因子IFN- y 1000U/ml、诱导因子抗 ⑶3单抗lOOng/ml，放入无血清培养基中。5、对小时后从CIK细胞的诱导活化试剂盒中取出诱导因子人重组IL-I 2 a 100U/ml，诱导因子人重组IL-2 1000U/ml，放入无血清培养基中。6、培养第3天、第6天和第9天从CIK细胞的诱导活化试剂盒中取出诱导因子 IL-2a 100U/ml、诱导因子rIFN-γ 1000U/ml，放入无血清培养基中。7、从细胞培养的第8天开始，每天取部分细胞进行细菌、霉菌的检测。第10 13 天后，待上述结果均为阴性后收集培养的CIK细胞，细胞总数>101(1个，600 r/minX10 min 离心、洗涤2次后待用。