专利名称：抗病毒的氮杂吲哚衍生物的制作方法发明的领域本发明提供具有药物性质和影响生物性能的化合物，它们的药用组合物及其使用方法。特别是，本发明涉及具有独特的抗病毒活性的氮杂吲哚哌嗪二酰胺衍生物。更具体地说，本发明涉及可用于治疗HIV和AIDS的化合物。 HIV-1(人免疫缺损病毒-1)感染仍然是重要的医学问题，估计全世界有3360万人受到感染。HIV和AIDS(获得性免疫缺损综合症)的病例数上升迅速。在1999年，报道说新感染者560万人，而死于艾滋病的达260万人。目前可用于治疗HIV的药物包括6种核苷逆转录酶(RT)抑制剂(叠氮胸苷、地达诺斯、司他夫定、拉夫去定、扎西他宾和abacavir)，3种非核苷逆转录酶抑制剂(尼维拉平、delavirdine和efarirenz)，以及5种拟肽蛋白酶抑制剂(噻喹那韦、英地那韦、利托那韦、nelfinavir和amprenavir)。这些药物如果单独使用，都只能暂时限制病毒的复制。然而，当组合使用时，这些药物对于病毒血症和疾病的发展有很强的影响。实际上，近来已经报道，由于广泛采用组合疗法，AIDS患者的死亡率已经显著降低。但是，尽管这些结果给人印象深刻，患者中有30～50％最终中断组合药物疗法。药效不足、不顺应、受限的组织渗透和在某些细胞类型内的药物特异性限制(例如，大多数核苷类似物在静息细胞内不能磷酸化)可能是敏感病毒的不完全抑制的原因。另外，HIV-1的高复制速率和快速转化与频繁的突变掺入相结合，导致药物抗性变种的出现和低于最佳药物浓度时治疗失败(Larder和Kemp；Gulik；Kuritzkes；Morris-Jones等；Schinazi等；Vacca和Condra；Flexner；Berkhout和Ren等(Ref 6-14))。因此，需要有显示不同抗性模式，有利的药物动力学及安全状况的新的抗HIV药物，以提供更多的治疗选择方案。目前上市的HIV-1药物中占支配地位的是核苷逆转录酶抑制剂或拟肽蛋白酶抑制剂。非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)近来在HIV感染的治疗中起着越来越重要的作用(Pedersen & Pedersen，Ref.15)。文献(De Clercq，Ref(16))中已报道了至少30种不同的NINRTI，其中几种已作了临床试验。联吡啶并二氮杂?铜(尼维拉平)、苯并噁嗪酮(efavirenz)和双(杂芳基)哌嗪衍生物(delavirdine)已被批准临床使用。然而，开发和使用NNRTI的主要缺点是在组织细胞培养物和被治疗的个体中，特别是在进行单一疗法的个体中，迅速出现抗药品系的倾向。因此，对于鉴别不易产生抗性的NNRTI有很大的兴趣(Pedersen & Pedersen，Ref.15)。曾报道过作为HIV-1逆转录酶抑制剂的几种吲哚衍生物，包括吲哚-3-砜、哌嗪并吲哚、吡嗪并吲哚和5H-吲哚并〔3，2-b〕〔1，5〕苯并硫氮杂?衍生物(Greenlee等，Ref.1；Williams等，Ref.2；Romero等，Ref.3；Font等，Ref.17；Romero等，Ref.18；Young等，Ref.19；Genin等，Ref.20；Silvestri等，Ref.21)。还提到吲哚2-甲酰胺是细胞粘着和HIV感染的抑制剂(Boschelli等，US 5,424,329，Ref.4)。最后，3-取代的吲哚天然产物(半可皆霉素A和B，双脱甲基星霉醌以及异可皆霉素)被指出是HIV-1蛋白酶的抑制剂(Fredenhagen等，Ref.22)。此前已公开了结构上相关的氮杂吲哚酰胺衍生物(Kato等，Ref.23；Levacher等，Ref.24；Mantovanini等，Ref.5(a)；Cassidy等，Ref.5(b)；Scheriock等，Ref.5(c))。但是，这些结构与本发明中提出的不同，它们是氮杂吲哚单酰胺，而不是不对称的氮杂吲哚哌嗪二酰胺衍生物，并且没有提到这些化合物在抗病毒感染，特别是HIV感染方面的应用。这些参考文献不能被认为公开或提出了本发明的新颖化合物及其对于抑制HIV感染的应用。参考文献专利文献1.Greenlee，W.J，；Srinivasan，P.C.吲哚逆转录酶抑制剂U.S.Patent5,124,327。2.Williams，T.M.；Ciccarone，T.M.；Saari，W.S.；Wai，J.S.；Greenlee，W.J.；Balani，S.K.；Goldman，M.E.；Theohrides，A.D.作为HIV逆转录酶抑制剂的吲哚类化合物。European Patent 530907。3.Romero，D.L.；Thomas，R.C.；作为抗艾滋病药物的取代吲哚的制备。PCT WO93/01181。
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发明概要本发明包括式I化合物或其可药用的盐，它们是有效的抗病毒剂，特别是HIV抑制剂。 其中 是选自以下基团 和 R1、R2、R3、R4各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基、C2-C6炔基、卤素、CN、苯基、硝基、OC(O)R15、C(O)R15、C(O)R16、C(O)NR17R18、OR19、SR20和NR21R22；R15独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基和C4-C6环烯基；R16、R19和R20各自独立地选自H、C1-C6烷基、被1-3个卤原子取代的C1-6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基和C3-6炔基；条件是，R16、R19或R20与氧或硫的连接点不是构成C3-C6炔基的含碳-碳三键的碳原子；R17和R18各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C3-C6链烯基、C4-C6环烯基和C3-C6炔基；条件是，R17和R18与氮的连接点不是构成C3-C6链烯基的碳-碳双键或C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R21和R22各自独立地选自H、OH、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C3-C6链烯基、C5-C6环烯基、C3-C6炔基和C(O)R23；条件是，R21和R22与氮的连接点不是构成C3-C6链烯基、C4-C6环烯基的碳-碳双键或C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R23是选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基和C2-C6炔基；R5是(O)m，其中m是0或1；n是1或2；R6是选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C4-C6环烯基、C(O)R24、C(O)OR25、C(O)NR26R27、C3-C6链烯基和C3-C6炔基；条件是，R6与氮的连接点不是构成C3-C6链烯基的碳-碳双键或C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R24是选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C3-C6链烯基、C4-C6环烯基和C3-C6炔基；R25是选自C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基和C3-C6炔基；条件是，R25与氧的连接点不是构成C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R26和R27各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C3-C6链烯基、C5-C6环烯基和C3-C6炔基；条件是，R26和R27与氮的连接点不是构成C3-C6链烯基、C5-C6环烯基的碳-碳双键或C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基、C2-C6炔基、CR28R29OR30、O(O)R31、CR32(OR33)OR34、CR35NR36R37、C(O)OR38、C(O)NR39R40、CR41R42F、CR43F2和CF3；
R28、R29、R30、R31、R32、R35、R41、R42和R43各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基、C2-C6炔基和O(O)R44；R33、R34和R38各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C3-C6链烯基、C4-C6环烯基和C3-C6炔基；条件是，R34与R38与氧的连接点不是构成C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R36和R37各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C3-C6链烯基、C4-C6环烯基和C3-C6炔基；条件是，R36与R38与氮的连接点不是构成C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R39和R40各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基和C3-C6炔基；条件是，R39与R40与氮的连接点不是构成C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R44是选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基和C2-C6炔基；Ar选自以下基团； 和 A1、A2、A3、A4、A5、B1、B2、B3、B4、C1、C2、C3、D1、D2和D3各自独立地选自H、CN、卤素、NO2、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基、C2-C6炔基、OR45、NR46R47、SR48、N3和CH(-N＝N-)-CF3；R45是选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基和C3-C6炔基；条件是，R45与氧的连接点不是构成C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R45和R47各自独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C3-C6链烯基、C5-C6环烯基、C3-C6炔基和C(O)R50；条件是，R46和R47与氮的连接点不是构成C5-C6链烯基、C4-C6环烯基的碳-碳双键或C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R48是选自H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C2-C6链烯基、C4-C6环烯基、C3-C6炔基和C(O)R49；条件是，R48与硫的连接点不是构成C3-C6炔基的碳-碳三键的碳原子；R49是C1-C6烷基或C3-C6环烷基；R50是选自H、C1-C6烷基和C3-C6环烷基。
优选式I化合物或其可药用盐中R2-R4各自独立地是H、-OCH3、-OCH2CF3、-OiPr、-OnPr、卤素、CN、NO2、C1-C6烷基、NHOH、NH2、Ph、SR20或N(CH3)2。
还优选式I化合物中R7-R14中的1或2个独立地是甲基，其它的取代基是氢。
还优选的是，式I化合物中A1-A5、B1-B4、C1-C3或D1-D3中的一个是氢、卤素或氨基，其余的取代基是氢。
还优选的是下式化合物 其中R2是H、F、Cl、Br、OMe、CN或OH；R4是C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C3-C6环烷基、C5-C6环烯基、Cl、OMe、CN、OH、C(O)NH2、C(O)NHMe、C(O)NHEt、Ph或-C(O)CH3；n是2；R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自独立地是H或CH3，条件是，这些取代基中最多两个可以是甲基；R1是氢；R5是未被取代的；R6是氢或甲基。
本发明的一种很优选的情况是下式的化合物或其可药用的盐 其中R2是H、-OCH3、-OCH2CF3、-Opr、卤素、CN、NO2或NHOH；R4是H、卤素、-CN或羟基；R7-R14中的1或2个是甲基，其余的为氢；n是2；R1是氢；R5是(O)m，其中m为0；R6是氢、甲基或烯丙基。
本发明的另一种很优选的情况是下式化合物 其中R2是选自H、F、Cl、Br、OMe、CN和OH；R4是选自H、C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C3-C6环烷基、C5-C6环烯基、Cl、OMe、CN、OH、C(O)NH2、C(O)NHMe、C(O)NHEt、苯基或-C(O)CH3；n是2；
R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为H或CH3，条件是，R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14中的0-2个可以是CH3，其余的是H；R6是H或CH3。
本发明的又一种很优选的情况是下式化合物 其中R4是选自H、C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C3-C6环烷基、C5-C6环烯基、Cl、OMe、CN、OH、C(O)NH2、C(O)NHMe、C(O)NHEt、苯基和-C(O)CH3；n是2；R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自独立地是H或CH3，条件是，R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14中的0-2个可以是甲基，其余的是H；R6是H或CH3。
因为本发明化合物可以具有不对称中心并因此以非对映异构体和对映体的混合物形式存在，所以本发明包括式I化合物的各个非对映异构形式及对映体形式。
本发明的另一实施方案是含有抗病毒有效量的式I化合物的药用组合物。
本发明是再一实施方案是一种治疗被病毒感染的哺乳动物的方法，所述病毒为HIV，该方法包括使哺乳动物服用抗病毒有效量的式I化合物。
本发明的又一实施方案是一种治疗被病毒(例如HIV)感染的哺乳动物的方法，该方法包括使哺乳动物服用抗病毒有效量的式I化合物和与其组合的抗病毒有效量的一种艾滋病治疗药物，该药物选自(a)抗艾滋病毒剂；(b)抗感染剂；(c)免疫调节剂；和(d)HIV进入抑制剂。
发明详述式I的新型氮杂吲哚哌嗪二酰胺类似物的制备步骤和抗HIV-1活性总结如下。各种名词的定义如下。
这里和权利要求中所用的“C1-6烷基”一词(除非文中另外说明)是指直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。类似地，“C1-6链烯基”或“C1-6炔基”包括直链或支链基团。
“卤素”指氯、溴、碘或氟。
本文所公开的化合物的生理上可接受的盐和前药是在本发明的范围之内。这里和权利要求中所用的术语“可药用盐”意指无毒的碱加成盐。合适的盐包括由有机和无机酸衍生形成的盐，这些酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、乙酸、酒石酸、乳酸、亚磺酸、柠檬酸、马来酸、富马酸、山梨酸、鸟头酸、水杨酸、苯二甲酸等。这里所说的“可药用盐”还打算包括酸性基团(例如羧基)与例如铵等反离子形成的盐、碱金属盐(特别是钠或钾盐)、碱土金属盐(特别是钙或镁盐)，以及与合适的有机碱，例如低级烷基胺(甲胺、乙胺、环己胺等)或取代的低级烷基胺(如，羟基取代的烷基胺，例如二乙醇胺、三乙醇胺或三(羟甲基)氨基甲烷)，或与诸如哌啶或吗啉等碱形成的盐。
在本发明方法中，“抗病毒有效量”一词是指本方法中足以显示出患者确实受益，即，以抑制HIV感染为特征的急性症状痊愈时的各活性组分的总量。当用于单独给药的各个活性组分时，此术语指单独的组分。当用于组合给药的情形时，此术语指产生治疗效果的各活性组分的总量，不管是混合给药、顺序给药或同时给药。这里和权利要求中使用的“治疗”一词是指预防或减轻与HIV感染有关的疾病。
本发明还涉及本发明化合物与一种或多种可用于治疗AIDS的药物的组合。例如，本发明化合物可以有效地与有效数量的抗艾滋病毒剂、免疫调节剂、抗感染剂或疫苗，例如下表中列出的那些，在感染前和/或感染后组合施用。
抗病毒剂药物名称制造商适应症097 Hoechst/BayerHIV感染，AIDS，ARC非核苷逆转录酶(RT)抑制剂AmprenivirGlaxo Wellcome HIV感染，141 W94AIDS，ARCGW 141 蛋白酶抑制剂Abacavir Glaxo Wellcome HIV感染，(1592U89) AIDS，ARCGW 1592(RT抑制剂)(乙酰吗喃)Carrington Labs ARC(Irving，TX)(阿昔洛韦)BurroughsHIV感染，AIDS，ARCWellcome 与AZT组合AD-439Tanox Biosystems HIV感染，AIDS，ARCAD-519Tanox Biosystems HIV感染，AIDS，ARCAdefovir Gilead Sciences HIV感染DipivoxilAL-721Ethigen ARC，PGL(Los Angeles，CA)HIV阳性，AIDS(α-干扰素)Glaxo Wellcome卡波济肉瘤HIV与w/叠氮胸苷组合(安沙霉素) Adria LaboratoriesARCLM 427 (Dublin，OH)Erbamont(Stamford，CT)中和pH易变 Advanced Biotherapy AIDS，ARC的异常α- Concepts干扰素的抗体 (Rockville，MD)AR177 Aronex Pharm HIV感染，AIDS，ARCBeta-氟-ddANat′l Cancer 与艾滋病有关Institute 的疾病BMS-232623 Bristol-Myers HIV感染，AIDS，ARC(CGP-73547)Squibb/Novartis (蛋白酶抑制剂)BMS-234475 Bristol-Myers HIV感染，AIDS，ARC(CGP-61755)Squibb/Novartis (蛋白酶抑制剂)Cl-1012Warner-Lambert HIV-1感染(西多伏韦) Gilead ScienceCMV视网膜炎，疱疹，乳头状瘤病毒(凝胶多糖 AJI Pharma USAHIV感染硫酸盐)巨细胞病毒 Medlmmune CMV视网膜炎免疫球蛋白(甘昔洛韦) Syntex 危及视力的CMV外周CMA视网膜炎Delaviridine Pharmacia-UpjohnHIV感染，AIDS，ARC(RT抑制剂)葡聚糖硫酸酯 Ueno Fine Chem. AIDS，ARC，HIVInd.Ltd.(Osaka，阳性无症状Japan)ddC双脱氧胸苷Hoffman-La RocheHIV感染，AIDS，ARCddI双脱氧肌苷Bristol-Myers SquibbHIV感染，AIDS，ARC与AZT/d4T组合DMP-450 AVID(Camden，NJ)HIV感染，AIDS，ARC(蛋白酶抑制剂)EfavirenzDuPont MerckHIV感染，AIDS，ARC(DMP 266)(非核苷RT抑制剂)(-)6-氯-4-(S)-环丙基乙炔基-4-(S)-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1苯并噁嗪-2-酮STOCRINEEL10 Elan Corp，PLC HIV感染(Gainesville，GA)(泛西洛维) Smith Kline带状疱疹，单纯疱疹FTCEmory University HIV感染，AIDS，ARC(逆转录酶抑制剂)GS 840 Gilead HIV感染，AIDS，ARC(逆转录酶抑制剂)HBY 097Hoechst Marion HIV感染，AIDS，ARCRoussel(非核苷逆转录酶抑制剂)(金丝桃苷) VIMRx PharmHIV感染，AIDS，ARC重组人 Triton Biosciences AIDS，卡波济干扰素β (Almeda，CA) 肉瘤，ARC干扰素α-n3Interferon SciencesARC，AIDS(英地那韦) Merck HIV感染，AIDS，ARC无症状HIV阳性，也与AZT/ddI/ddC组合ISIS 2922 ISIS Pharmaceuticals CMV视网膜炎KNI-272Nat′lCancer Institute 与HIV有关的疾病(拉米夫定) Glaxo Wellcome HIV感染，AIDS，ARC(逆转录酶抑制剂)；也与AZT组合Lobucavir Bristol-Myers Squibb CMV感染Nelfinavir Agouron HIV感染，AIDS，ARCPharmaceuticals (蛋白酶抑制剂)(尼维拉平) Boeheringer HIV感染，AIDS，ARCIngleheim(RT抑制剂)(诺瓦普伦) Novaferon Labs，Inc. HIV抑制剂(Akron，OH)多肽T Peninsula Labs AIDS八肽序列(Belmont，CA)膦酰甲酸Astra Pharm. CMV视网膜炎三钠Products，IncHIV感染其它CMV感染PNU-140690 Pharmacia Upjohn HIV感染，AIDS，ARC(蛋白酶抑制剂)(丙丁酚)VyrexHIV感染，AIDSRBC-CD4 Sheffield Med. HIV感染，Tech(Houston，TX)AIDS，ARC(利托那韦) Abbott HIV感染，AIDS，ARC(蛋白酶抑制剂)(噻喹那韦) Hoffmann-LaRoche HIV感染，AIDS，ARC(蛋白酶抑制剂)(司他夫定)d4T Bristol-MyersHIV感染，二脱氢脱氧胸苷 Squibb AIDS，ARC(阿昔洛韦 Glaxo Wellcome 生殖器HSV &缬氨酸酯)CMV感染(三氮唑核苷) Viratek/ICN无症状HIV阳性(利巴韦林)(Costa Mesa，CA) LAS，ARCVX-478Vertex HIV感染，AIDS，ARC(扎西他宾)Hoffmann-LaRoche HIV感染，AIDS，ARC与AZT组合(叠氮胸苷)Glaxo Wellcome HIV感染，AIDS，ARC卡波济肉瘤，与其它治疗剂组合免疫调节剂药名制造商适应症AS-101 Wyeth-Ayerst ADIS(溴匹利明) Pharmacia Uplohn 晚期AIDS(乙酰吗喃) Carrington Labs，Inc. AIDS，ARC(lrving，TX)CL246，738 American Cyanamid AIDS波卡济肉瘤Lederle LabsEL10 Elan Corp，PLCHIV感染(Gainesville，GA)FP-21399 Fuki ImmunoPharm 阻断HIV与CD4+细胞融合γ-干扰素 Genentech ARC与w/TNF(肿瘤坏死因子)组合粒细胞巨噬细胞Genetics InstituteAIDS集落刺激因子 SandoZ粒细胞巨噬细胞Hoechst-Roussel AIDS集落刺激因子 Immunex粒细胞巨噬细胞Schering-Plough AIDS与w/AZT集落刺激因子组合HIV核心颗粒 Rorer 血清阳性HI免疫刺激剂IL-2 Cetus AIDS与w/AZT白介素-2组合IL-2 Hoffman-LaRoche AIDS，ARC，HIV，白介素-2 Immunex 与w/AZT组合IL-2 ChironAIDS，CD4白介素-2细胞计数增加(aldeslukin)免疫球蛋白Cutter Biological 儿科AIDS，静脉内(Berkeley，CA)与w/AZT组合(人)IMREG-1 Imreg AIDS，卡波济肉瘤(New Orleans，LA) ARC，PGLIMREG-2 Imreg AIDS，卡波济肉瘤(New Orleans，LA) ARC，PGL伊姆塞尔，二硫代 Merieux Institute AIDS，ARC氨基甲酸二乙酯α-2干扰素Schering Plough卡波济肉瘤w/AZT，AIDS甲硫丁氨酸TNI Pharmaceutical AIDS，ARC-脑啡肽 (Chicago，IL)MTP-PECiba-Geigy Corp卡波济肉瘤胞壁酰三肽粒细胞集落Amgen AIDS，与w/AZT组合刺激因子RemuneImmune Response免疫疗法CorprCD4重组的Genentech AIDS，ARC可溶性人CD4rCD4-IgG AIDS，ARC杂合体重组的可溶Biogen AIDS，ARC性人CD4干扰素α-2a Hoffman-La卡波济肉瘤Roche AIDS，ARC与w/AZT组合SK&F106528 Smith Kline HIV感染Soluble T4(胸酰喷丁) Immunobiology HIV感染Research Institute(Annandale，NJ)肿瘤坏死因子 Genentech ARC，与w/γ干扰素组合抗感染剂药名制造商适应症氯洁霉素与伯氨喹Pharmacia Upjohn PCP(氟康唑)Pfizer 隐球菌性脑膜炎，念珠菌病(制霉素锭剂)Squibb Corp 预防口腔念珠菌病(依氟鸟氨酸)Merrell Dow PCP异硫代羟酸五咪 LyphoMed PCP治疗(IM & IV) (Rosemont，IL)(甲氧苄啶) 杀菌(甲氧苄啶) 杀菌吡曲克辛 Burroughs Wellcome PCP治疗吸入用的 Fisons Corporation PCP预防异硫代羟酸五咪螺旋霉素 Rhone-Poulenc 隐孢子虫病DiarrheaIntraconazole- Janssen-Pharm 组织胞浆菌病；R51211隐球菌性脑膜炎(曲美沙特) Warner-Lambert PCP柔红霉素 NeXstar，Sequus卡波济肉瘤重组的人血红蛋白 Ortho Pharm.Corp 与AZT治疗有关的严重贫血重组的人生长激素 Serono 与AIDS有关的消瘦，极度瘦弱去氢甲孕酮 Bristol-Myers 与W/AIDS有关Squibb 的厌食的治疗睾丸酮 Alza，Smith Kline 与AIDS有关的消瘦Total Enteral Norwich Eaton 与AIDS有关的腹泻Nutrition Pharmaceuticals和吸收不良另外，本发明化合物可以在包括三种以上的抗HIV药物组合物中使用。四种甚至五种HIV药物的组合正在研究之中，本发明化合物预期是这类组合物中的有用组分。
另外，本发明化合物可以用来与被称为HIV进入抑制剂的治疗AIDS的另一类药物组合。HIV进入抑制剂的实例公开于Drugs of theFuture 1999，24(12)，1355-1362；Cell，V.9.243-246，Oct.29，1999；和Drug Discovery Today，5，No5，May 2000，183-194。
应该清楚，本发明化合物与抗艾滋病毒剂、免疫调节剂、抗感染剂、HIV进入抑制剂或疫苗的组合不限于上表的名单，而是原则上包括与可用于治疗艾滋病的任何药物组合物的组合。
优选的组合是用本发明化合物和一种HIV蛋白酶抑制剂和/或非核苷型HIV逆转录酶抑制剂同时或交替治疗。组合物中可任意加入的第四组分是一种HIV逆转录病毒的核苷型抑制剂，例如AZT、3TC、ddC或ddI。一种优选的HIV蛋白酶抑制剂是英地那韦，它是N-(2(R)-羟基-1-(S)-二氢化茚基)-2(R)-苯基甲基-4-(S)-羟基-5-(1-(4-(3-吡啶基甲基)-2(S)-N′-(叔丁基甲酰胺基)哌嗪基)戊酰胺乙醇化物的硫酸盐，按照US 5,413,999合成。英地那韦一般以800mg的剂量一天服用3次。其它的优选的蛋白酶抑制剂是nelfinavir和利托那韦。另一种优选的HIV蛋白酶抑制剂是噻喹那韦，它以600或1200mg是剂量每日三次给药。最后，一种正进行临床试验的新的蛋白酶抑制剂MBS-232632可能会成为优选的抑制剂。优选的非核苷型HIV逆转录酶抑制剂包括efavirenz。在EPO0,484,071中叙述了ddC，ddI和AET的制备。这些组合药剂在限制HIV的传播与感染程度方面可能有出乎意料的作用。优选的组合包括与以下药物的组合(1)英地那韦与efavirenz，以及任意加入的AET和/或3TC和/或ddI和/或ddC；(2)英地那韦以及AET和/或ddI和/或ddC和/或3TC中的任一种，特别是，英地那韦和AET及3TC；(3)司他夫定和3TC及/或叠氮胸苷；(4)叠氮胸苷和拉米夫定及141W94和1592U89；(5)叠氮胸苷和拉米夫定。
在这些组合中，本发明化合物和其它活性药物可以分别给药或是同时给药。此外，一种组分的服用可以是其在它药物服用之前、同时或之后。
母体氮杂吲哚，例如4-氮杂吲哚、5-氮杂吲哚、6-氮杂吲哚或7-氮杂吲哚，是用文献方法(Mahaderan等，Ref.25(a)或Hands等，Ref.25(b))制备，或是可由商业渠道得到(7-氮杂吲哚得自AldrichCo.)。这一参考文献和类似的参考文献展示了取代的氮杂吲哚的一些实例。本领域的熟练化学家会认识到，该通用方法可以扩展到在起始物中有不同取代基的氮杂吲哚。氮杂吲哚也通过在方案1和方案2中所述的途径制备。
方案1 在方案1中，Bartoli吲哚合成法(Dobson等，Ref.25(c))被扩展到制备取代的氮杂吲哚。硝基吡啶与过量的乙烯基溴化镁在-78℃反应。温热至-20℃以后，反应形成了所要的氮杂吲哚1。通常该温度范围是最佳范围，但在特殊情形可以有通常不超过20℃的变化，但有时改变更多以使产率最优。乙烯基溴化镁可以从商家以四氢呋喃溶液的形式得到，有时更好是由乙烯基溴和镁用本领域熟知的文献方法新鲜制备。在某些情形也可以用乙烯基氯化镁。
方案2 在方案2中，利用Pd(O)催化剂将乙炔偶合在卤代吡啶23上，以得到化合物24。随后用碱处理进行化合物24的环化，得到氮杂吲哚1(Sakamoto等，Ref.26)。适合第二步的碱包括甲醇钠或其它钠、锂或钾的醇盐。
制备式1的氮杂吲哚哌嗪二酰胺5的通用步骤述于方案3和方案4中。
方案3 氮杂吲哚1与MeMgI(甲基碘化镁)和EnCl2(氯化锌)反应，随后加入CLCOCOOMe(氯氧代乙酸甲酯)，得到氮杂吲哚乙醛酰甲酯2(Shadrina等，Ref.27)。或者是，化合物2可以通过氮杂吲哚1与过量的CLCOCOOMe在AlCl3(氯化铝)存在下反应制备(Sycheva等，Ref.28)。该甲酯2的水解得到钾盐3，它与一苯甲酰化的哌嗪衍生物4在DEPBT(3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮)和N，N-二异丙基乙酰(通常称为Hunig碱)存在下偶合，得到氮杂吲哚哌嗪二酰胺5(Li等，Ref.29)。该一苯甲酰化的哌嗪衍生物4可以按照已充分确立的方法制备，例如Desai等，Ref.30(a)，Adamczyk等，Ref.30(b)，Rossen等，Ref.30(c)，和wang等，Ref.30(d)和30(e)。
方案4 另一种制备5的方法包括用MeMgI和EnCl2处理按着文献方法制备的或由市场购得的氮杂吲哚1，随后加入ClCOCOCl(草酰氯)的THF(四氢呋喃)或乙醚溶液，得到方案4中预期产物乙醛酰氯6和酰氯7的混合物。然后使形成的乙醛酰氯6和酰氯7的混合物与一苯甲酰化的哌嗪衍生物4在碱性条件下偶合，得到产物5，是两种化合物(n＝1和2)的混合物。
方案5列出了将氮杂吲哚环进一步官能化的一般途径。应当清楚，符号Rx是代表氮杂吲哚环上R4-R2中剩余取代基的一般描述。如方案5中所述，氮杂吲哚可以通过在丙酮或DMF(二甲基甲酰胺)中使用mCPBA(间氯过苯甲酸)氧化成相应的N-氧化物(eq.1，Harada等，Ref.31和Antonini等，Ref.32)。N-氧化物8可以通过使用大量报道的试剂，例如磷酰氯(POCl3)(eq.2，Schneller等，Ref.33(a))或三溴化磷(eq，2，Wozniak等，Ref.33(b))、Grignard试剂RMgX(R＝烷基，X＝Cl、Br或I)(eq，4，Shiotani等，Ref.34)/氰化三甲基硅烷(TMSCN)(eq，5，Minakata等，Ref.35)、AC2O(eq，6，Klemm等，Ref.36)、由硫醇钠或其它硫醇盐得到的硫醇(eq，7，Shiotani等，Ref.37)、如ref.37经由金属醇盐得到的醇(eq，8，Hayashida等，Ref.38)，以及胺(eq，9，在氯仿/水中于TsCl存在用使用氨或胺，如Miura等，Ref.39；或在类似条件下，但还含10％NaOH水溶液，如Solekhova等，Ref.40)，转化成各式各样的取代的氮杂吲哚衍生物。在这些条件下(分别地)，可以将氯或溴原子、腈基、烷基、羟基、硫羟基。烷氧基和氨基引入到吡啶环中。类似地，氟化四甲铵(Me4NF)将N-氧化物8转化成氟氮杂吲哚(eq.3)。OH基团的进一步的标准改性还会得到烷氧官能基(eq.6)。
方案5
氮杂吲哚N-氧化物的硝化向氮杂吲哚环引入了硝基，如方案6中所示(eq.10，Antonini等，Ref.32)。该硝基随后可按照充分确定的化学方式，用各种亲核试剂(例如OR、NR′R2或SR)取代(eq.11，RegnoufDe Vains等，Ref.41(a)，Miura等，Ref.41(b)，Profft等，Ref.41(c))。形成的N-氧化物16容易用三氯化磷(PCl3)(eq.12，Antonini等，Ref.32和Nesi等，Ref.42)或其它还原剂还原成相应的氮杂吲哚17。类似地，硝基取代的N-氧化物15可以用三氯化磷还原成氮杂吲哚18(eq.13)。化合物18的硝基可以通过小心地选择不同的还原条件，还原成羟胺(NHOH)(eq.14，Walser等，Ref.43(a)和Barker等，Ref.43(b))或氨基(NH2)(eq.15，NeSi等，Ref.42和Ayyangar等，Ref.44)。
方案6 氮杂吲哚衍生物1位上的氮原子的烷基化可以按照文献(Mahadevan等，Ref.45)中所述方法，以NaH作为碱、DMF作为溶剂、烷基卤化物或磺酸酯作为烷基化试剂来实现(eq.16，方案7)。
方案7 卤化物可以用己充分确立的方法转化成各式各样的官能基，例如腈基(eq.17)、氨基(eq.18)和/或烷氧基(eq.19)(方案8)。eq.17中所述的这类转化的实例示于以下文献Sakamoto等(Ref.46(a))，其中使用氰化亚铜由卤化物形成腈；Halley等(Ref.46(b))，通过在DMF中用氰化亚铜形成腈；Yamaguchi等(Ref.46(c)；Funhoff等(Ref.46(d))，在NMD中使用CuCN；Shiotani等(Ref.37)。通常，CuCN置换卤化物的反应需要加热。己发现在例如145℃的温度下18小时是优选条件，但这些条件可以改变。温度可以升高或降低最多100℃，反应时间可以从短至30分钟到长至80小时，这取决于反应温度和底物。作为对Eq.17的一种替代方法，Klimesova等使用伯酰胺前体(可按另处所述由羧酸得到)和磷酰氯得到腈(Ref.47)，及Katritzky等(Ref.48)。如eq.18中所示，卤化物可以被胺或氨置换。在Shiotani等的eq.37和Katritzky等的Ref.48中列举了一些实例条件。例如，在作为溶剂的过量伯胺或仲胺中将卤化物9于回流温度(或20～200℃)加热会造成卤化物的置换反应，形成胺27。在使用氨或挥发性胺的情形，可以使用在Katritzky等Ref.48中所述的压力反应器进行反应，而不会在加热期间损失挥发性胺。该反应可用TLC或液相色谱法监测，提高反应温度直到观察到反应。在胺价格昂贵时可以使用助溶剂，如二氧杂环己烷或吡啶。另一种方法使用Hartwig(Yale)或Buchwald(MIT)的改良的钯催化法在温和的条件下进行置换。如方案8中eq.19所示，可以用烷氧基化物取代9中的卤素并形成醚26。通常这一转化最好是通过向母体醇的溶液中加入钠来进行以生成链烷酸酯。或者是，可以使用强碱，例如NaN或NaH(SiMe3)2。也可以使用相应的锂或钾碱或金属。通常使用相对于要被取代的卤化物过量的碱。链烷酸酯的用量通常为2-20当量，优选为10当量。反应在回流下或在30-200℃的温度下进行。通常为约80℃。反应可持续4-80小时以达到完全反应，一般为12-48小时。如上面对eq.18所述，可以监测反应的进行。在Shiotani等的Ref.37中关于该文献的实例5a、5c和6的一般制备步骤中提供了在甲醇中用甲醇钠取代的典型条件。
方案8 腈基可以转化成羧酸28(eq.20，如Miletin等，Ref.49(a)，在乙醇中用氢氧化钠水溶液；或如Shiotani等Ref.49(b)，在乙醇水溶液中用KOH，或如EL Hadri等，Ref.49(c)，用6N HCl)。腈基可以转化成酯29(eq.21，在甲醇中用甲醇钠，如Heirtzler等，Ref.59(a)；或在甲醇中用HCl，如Norrby等，Ref.50(b))。腈基可以转化成酰胺30(eq.22，使用硫酸，如Sitsun′Van等，Ref.51(a)；或用乙酸、叔丁醇、硫酸和乙腈，如Reich等，51(b)；或用MeOS(O)2F，如Salfetnikova等，51(c))。
方案9 在方案10中，吡啶环上的甲基也可从用K2Cr2O7/98％硫酸氧化成羧酸28，如eq.23，Oki等，Rer.52(a)；或用浓硫酸中的三氧化铬，如Garelli等，Ref.52(b)；或在吡啶中用二氧化硒，如Koyama等，Ref.52(c)。该羧酸可以用以下方法转化成酯29在10％甲醇中用HCl(eq.24，Yasuda等，Ref.53(a))；或用亚硫酰二氯，随后用烷基醇钠(Lavine等，53(b))；或在NMM、DMAP和DEF中用醇和PyBOP(Hoemann，53(c))。该羧酸可以用以下方法转化成酰胺30使用KOH水溶液，随后用草酰氯苯溶液，再在二氯甲烷中用三乙胺(eq.25，Norman等，Ref.54(a))；或将一种胺与该酸加热(Jursic等，54(b))；或用N，N-羰基二咪唑使该酸与胺偶合(Strekowski等，54(c))；或者用草酰氯/乙醚和一种胺(Shi等，54(d))。
方案10 合成含不同取代基Ar的化合物的另一方法示于方案11。二酰胺5的苯甲酰胺部分可以选择性水解以得到中间体31。将胺31与其它的羧酸在DEBPT和碱存在下采用以上对较早的偶合所述的条件进行偶合，得到其它的新型二酰胺5。
方案11
方案12 示于方案12中的化合物35的制备是如Clark，G.J.Ref.56中所述，由市售的32出发。使用方案1中所述的Bartoli方法制备4-甲氧基-6-氮杂吲哚36。该溴化物用转移氢化法还原，得到所要的4-甲氧基吲哚37。通过用叔丁基锂在-100～-78℃的低温下进行选择性的锂溴交换，随后用氯化铵猝停反应，可以将化合物36转化成可分离的一溴化物混合物。将方案3中所示的用氯代草酸甲酯在3-位上酰化的另一方法如图所示地用于37，得到中间体38。然后可按照方案3的方法得到化合物39。虽然方案12中的方法是制备化合物39和其它式1化合物的优选方法，但仍发展了方案13中所示的另一方法用以制备这些化合物。吡咯40是通过Anderson，H.J.ref.57中所述的方法制备；酯40用标准方法水解，例如在室温下于氢氧化钾/乙醇中水解约2小时，或直至水解完全，得到2-吡咯甲醛-4-氧代乙酸钾。将此羧酸盐、N-苯甲酰哌嗪盐酸盐、3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮和三乙胺在DMF中的溶液搅拌约1天或直至反应完全，经后处理和结晶后，得到酰胺41。将酰胺/醛41以在乙醇中的浆体形式搅拌由1-60分钟的短时间，冷却到0℃(或-15℃至20℃)，然后与甘氨酸甲酯盐酸盐、三乙胺(或Hunig碱，2，6-二甲基吡啶，或无碱)和氰基硼氢化钠一起搅拌，得到胺42。这一转化也可以用醛41、甘氨酸甲酯盐酸盐和三乙酰氧基硼氢化钠在二氯甲烷、四氢呋喃或C1-C4醇等溶剂中进行。或者是，甘氨酸甲酯的游离碱可以按照任一步骤被取代，并且在反应中可以在加入硼氢化物还原剂之前使用脱水剂，例如分子筛。或者是，此转化反应进行时可先将吡咯氮用苯甲酰(由苯甲酰氯和叔胺形成)或苄基部分(苄基溴，NaH或DBU于THF中)保护起来。保护基团可在需要时分别用碱水溶液水解或氢化来除掉。甲酯42在甲醇中用碳酸钾水解，经HCl酸化后得到相应的羧酸。将该酸置于预热15-40分钟的含五氧化磷的无水甲磺酸中，在约110℃(通常为90-150℃)短时间加热约15分钟，但一般少于1小时，然后倒在冰上。产物用例如改良的Schotten-Bauman条件(二氯甲烷，碳酸钾和苯甲酰氯)酰化或苯甲酰化，得到酮43。与二甲氧基丙烷和无水对甲苯磺酸反应，得到中间体烯醇醚，它与氯醌反应得到化合物39。该烯醇醚也可以用原乙酸三甲酯和磺酸催化剂制备。氮杂吲哚，例如39，可以官能化形成腈，该腈是多功能的中间体，可氧化成N-氧化物后与DEPC和TEA反应，或与烯酰氯反应后与CuCN在DMF中反应。在文献58中描述了采用这些条件对类似的底物由41转化成43-45的反应的细节，该文献是Suzuki，H.；Iwata，C.；Sakurai，K.；Tokumoto，K.；Takahashi，H.；Hanada，M.；Yokoyama，Y.；Murakami，Y.；Tetrahedron，1997，53(5)，1593-1606。显然，在方案12和13中，46可以用方案4中式4表示的任何底物代替。同样很显然，吲哚37、39、44和45可以用方案5-11中所述的适当的化学方法加工，这些方案描述了将氮杂吲哚官能化的一般方法。
方案13 应当指出，2-氯-5-氟-3-硝基吡啶可以用Ref.59(Marfat等)的实例5B中的方法制备。方案1和3中的化学方法提供了与通式5相应的衍生物，它具有6-氮杂环，并且R2＝F，R4＝Cl。特别是，2-氯-5-氟-硝基吡啶在本文所述的典型条件下与3当量的乙烯基溴化镁反应，以高产率得到4-氟-7-氯-6-氮杂吲哚。将此化合物于室温和搅拌下加到三氯化铝的二氯甲烷溶液中，30分钟后再加入草酸氯甲酯或氯乙酯，得到一种酯。按照标准步骤用KOH水解，得到酸式盐，它与哌嗪4(例如1-苯甲酰哌嗪)在DEPBT存在下于标准条件下反应，得到前面刚提到的化合物5。这种带有苯甲酰哌嗪的化合物是N-(苯甲酰)-N′-〔(4-氟-氯-6-氮杂吲哚-3-基)氧乙酰基〕哌嗪，化合物5av。5av中的7-氯部分可以用本发明的方法加以利用，得到其中R4是按照权利要求取代的所要的衍生物。例如，5av与甲醇钠在甲醇中回流会得到化合物5ay，其中的6-氮杂吲哚环含有一个4-氟和7-甲氧基取代基。或者是，该4-氟-7-氯-6-氮杂吲哚可以与甲醇钠反应，然后按照上述顺序进行反应，得到N-(苯甲酰)-N′-〔(4-氟-7-甲氧基-6-氮杂吲哚-3-基)氧乙酰基〕哌嗪，5ay。4-氟-7-氯-6-氮杂吲哚也可以如eq.17中所述与CuCN/DMF反应，得到7-氰基中间体，它可按照eq.21(方案9)中所述，在甲醇中用HCl于室温下水解12小时，随后回流使反应完全，形成酸。该酸可以通过在搅拌下向它的重氮甲烷溶液中于室温或更低温度加入重氮甲烷/乙醚而顺利地转化成甲酯。这是使用重氮甲烷的标准条件，它可方便地按照Aldrich Chemical Co配套供应的使用说明，由Diazald?形成其乙醚溶液。上述甲酯可以按方案4所示用草酰氯进行酰化反应，随后与哌嗪(例如苯甲酰哌嗪)偶合，得到相应的4-氟-7-甲氧羰基-6-氮杂吲哚，它在加到甲胺水溶液中后得到5az，即，N-(苯甲酰)-N′-〔(4-氟-7-(N-甲基甲酰胺基)-6-氮杂吲哚-3-基)氧乙酰〕哌嗪。上述的对于4-氟-7-氯吲哚的化学反应序列同样可用7-氯-4-氮杂吲哚和(R)-3-甲基-N-苯甲酰哌嗪4a进行，以得到5abc，即，(R)-N-(苯甲酰)-3-甲基-N′-〔(7-甲氧基-4-氮杂吲哚-3-基)氧乙酰基〕哌嗪，或5abd，即，(R)-N-(苯甲酰)-3-甲基-N′-〔(7-(N-甲基甲酰胺基)-4-氮杂吲哚-3-基)氧乙酰基〕哌嗪。起始物7-氯-4-氮杂吲哚是化合物11，其制备方案如实验部分中的实施例所述。
应当清楚，除了化合物5a-5adb之外，化合物8、11-30、39、44和45都是式I化合物，它们全在本发明的范围之内。
本发明化合物的哌嗪类似物的制备方法和本文所述的一般反应的进行条件，很多在2000年12月21日公布的PCT WO 00/76521中有说明。
在用于取代上述的氮杂吲哚环的一般方法中，每种方法均可重复使用，而且这些方法可以组合以得到结合着多个取代基的氮杂吲哚。这些方法的应用提供了另外的式I化合物。抗病毒活性化合物的抗病毒活性是在浓度≤10μM的化合物存在下在用单次感染的HIV-1报道病毒感染的HeLa CD4 CCR5细胞中测定。病毒感染是在感染3天后通过测定被感染细胞中整合病毒NDA的荧光素酶表达而定量化(Chen等，Ref.55)。各化合物的抑制百分数通过定量确定在各化合物存在下被感染的细胞中荧光素酶表达水平相当于在化合物不存在时被感染的细胞中的观测值的百分数并由100中减去这一测定值而算出。表1列出了在≤10μM的浓度下具有抗病毒活性且无明显毒性的化合物。
表1























实验步骤生物学在表1和以后，采用以下定义。
“μM”指微摩尔(体积)浓度；·“ml”或“mL”指毫升；·“μl”指微升；·“mg”指毫克；·“nM”指纳摩尔(体积)浓度；·“a”是指用至少两次实验、每次实验重复测定两次的平均值代表的抑制百分数数据。
下面说明用来得到列在表1中结果的材料和实验步骤。细胞病毒生产人胚胎肾细胞系，293，在含10％胎牛血清(FBS，Sigma，St，Louis，MO)的Dulbecco改进的Eagle培养基(Life Technologies，Gaithersburg，MD)中增殖。
病毒感染表达HIV-1报道基因CD4和CCR5的人上皮细胞系HeLa在Dubecco改良的Eagle培养基(Life Technologies，Gaithersburg，MD)中增殖，该培养基中含10％胎牛血清(FBS，Sigma，St.Louis，MD)并补充0.2mg/ml的Geneticin(Life Technologies，Gaitnersburg，MD)和0.4mg/ml的Zeocin(Invitrogen，Carlsbad，CA)。
病毒单次感染的报道病毒是用HIV-1包膜DNA表达载体和含包膜缺失突变的原病毒cDNA共转染人胚胎肾293细胞产生的，在HIV-1nef序列处插入荧光素酶报道基因(Chen等，Ref.55)。使用LipofectAMINE PLUS试剂，按照制造商(Life Technologies，Gaitnersburg，MD)所述进行转染。实验1、将化合物以＜20μm的浓度加到置于96孔板内的HeLa CD4 CCR5细胞中，每孔中在含10％胎牛血清的100μl Dulbecco改良的Eagle培养基中有5×104个细胞。
2.向板中细胞和化合物以约0.01的感染复数(MDI)加入100μl在Dulbccco改良的Eagle培养基中的单次感染的报道病毒，使得每孔的最终体积为200μl，化合物最终浓度＜10μm。
3.感染72小时后收取样品。
4.利用荧光素酶报道基因分析盒(Roche Molecular Biochemicals，Indianapolis，IN)通过测定感染的细胞中病毒DNA的荧光素酶表达，监测病毒感染。除去受感染的细胞上清液，每孔中加入50μl Dulbecco改良的Eagle培养基(无酚红)和按照制造商(Roche MolecularBiochemicals，Indianapolis，IN)所述重新构成的50μl荧光素酶分析试剂。然后用Wallac Microbeta闪烁计数器，通过测定发光定量确定荧光素酶活性。
5.定量确定在各化合物存在下感染的细胞中荧光素酶表达水平相当于在化合物不存在时受感染细胞的观测值的百分数，并从100中减去这一测定值，计算出各化合物的抑制百分数。外延至10μM处抑制百分数的方法表1中的数据是用以上的一般步骤和以下方法得到的。没有列出所有化合物的数据，因为在表2中用另一方法列出了所有化合物的数据。各化合物的抑制％是通过定量确定在化合物存在时被感染细胞中荧光素酶表达的水平相当于在化合物不存在时被感染细胞的观测值的百分数，并由100中减去这一测定值而算出的。对于在低于10μm下试验的化合物，利用Microsoft Excel电子数据表软件的XL fit曲线拟合特性，通过外延确定在10μM下的抑制％。使用一个四参数的计算模型(XL fit模型205Y＝A+((B-A)/+1((C/X)D)))由10个数据点(在10个化合物浓度测得的抑制％)得到曲线，其中，A＝最小y值，B＝最大y值，C＝log EC50，D＝斜率因子，X和Y是已知数据值。在A和B参考开启的情况下进行外延。表达成EC50的生物学数据表2表示了根据EC50值分类的化合物数据，它提供了另一种比较本发明化合物的抗病毒效力的方法。这些值是用以下方法计算的。50％抑制的有效浓度(EC50)是用Microsoft Excel XLfit曲线拟合软件计算的。对于各种化合物，利用四参数计算模型(模型205)，由在10个不同浓度下计算出的抑制％形成曲线。
表2用EC50表示的生物学数据

*这些化合物中的一些是在低于其EC50的浓度下试验，但显示出造成抑制的能力，因此应当在更高的浓度下评价，以确定准确的EC50。作了近似尝试，以便排除没有抑制能力的化合物(其EC50可能大于100μM)。化学所有液相色谱(LC)数据均在岛津LC-10AS液相色谱代上记录，该仪器使用SPD-10AV UV-Vis检测器，与用电喷雾方式LC用Mictomass Platform测得的质谱(MS)数据联用。
LC/MS方法(即，化合物鉴定)柱AYMC ODS-A ST 3.0×50mm柱柱BPHX-LUNA C 184.6×30mm柱梯度100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B
梯度时间2分钟停留时间1分钟流速5ml/min检测器波长220nm溶剂A10％MeOH/90％H2O/0.1％三氟乙酸溶剂B10％H2O/90％MeOH/0.1％三氟乙酸将用制备型HPLC纯化的化合物在1.2ml甲醇中稀释，用以下方法在岛津LC-10A自动式制备型HPLC系统中纯化。制备型HPLC方法(即，化合物纯化)纯化方法起始梯度(30％B，70％A)，在20分钟内直线变化至最终梯度(100％B，0％A)，保持3分钟(100％B，0％A)溶剂A10％MeOH/90％H2O/0.1％三氟乙酸溶剂B10％H2O/90％MeOH/0.1％三氟乙酸柱YMC C18 SS 20×100mm柱监测器波长220nm选择的实施例的典型制备步骤与鉴定方案1中化合物的典型制备步骤1)氮杂吲哚1的制备 氮杂吲哚的制备，方法A7-氯-6-氮杂吲哚1e的制备将2-氯-3-硝基吡啶22e(5.0g)溶于无水THF(200ml)中。将溶液冷却到-78℃后，加入过量的乙烯基溴化镁(1.0M THF溶液，100ml)。然后将反应混合物在-20℃放置8小时，随即用20％NH4Cl(150ml)使反应停止。水相用EtOAc(3×150ml)萃取。合并的有机层用MgSO4干燥。经过滤和浓缩后，粗产物用硅胶柱色谱法纯化，得到1.5g 7-氯-6-氮杂吲哚1e，产率31％。
总结在下面的是具有以下结构的化合物1的鉴定 化合物1e，R＝Cl，7-氯-6-氮杂吲哚1H NMR(500MHz，CDOD3)δ7.84(的1H，J＝7.95Hz)，7.76(M，2H)，6.61(d，1H，J＝5.45Hz).MS m/z(M+H)+计算值C7H6ClN2153.02；实验值152.93。HPLC保留时间0.51分(柱A)。
化合物1f，R＝OMe，7-甲氧基-6-氮杂吲哚MS m/z(M+H)+计算值C8H9N2O149.07；实验值149.00.HPLC保留时间0.42分(柱A)。
用以上方法制备的具有以下结构的化合物1的鉴定 化合物1g，R2＝H，R4＝Me，7-甲基-4-氮杂吲哚MS m/z(M+H)+计算值C8H9N2133.08；实验值133.01。HPLC保留时间0.34分(柱A)。
化合物1ak，R2＝Cl，R4＝Me，5-氯-7-甲基-4-氮杂吲哚MS m/z(M+H)+，计算值C8H8ClN2167.04；实验值166.99.HPLC保留时间1.22分(柱B)。 氮杂吲哚的制备，方法A7-苄氧基-4-氮杂吲哚1j的制备向苯甲醇(16.6g)在200ml DMF中的溶液缓慢加入NaH(4.8g)。将混合物在室温下搅拌2小时以得到苯甲醇钠，将其转移到4-氯-3-硝基吡啶盐酸盐22j(20g)在MDF(100ml)中的溶液里。形成的混合物保持搅拌10小时，然后用水停止反应。在减压除去DMF之后，将粗产物悬浮于水中，用ErOAc(3×250ml)萃取。有机相用MgSO4干燥并浓缩，得到的残余物经重结晶纯化，生成6.1g 4-苄氧基(benzoxy)-3-石基吡啶22j。
化合物22j的鉴定4-苄氧基-3-硝基吡啶MS m/z(M+H)+，计算值C12H11N2O3231.08；实验值231.06.。HPLC保留时间1.46分(柱A)。
化合物1j(7-苄氧基-4-氮杂吲哚)的制备按照对于制备1e所用的Bartoli型反应所述的一般步骤和条件。
化合物1j的鉴定化合物1j，7-苄氧基-4-氮杂吲哚1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.64(b，1H)，8.34(d，1H，J＝5.35Hz)，7.40(m，6H)，6.72(d，1H，J＝3.25Hz)，6.67(d，1H，J＝5.45Hz)，5.35(s，2H)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ151.1，147.9，145.2，135.8，128.8，128.6，127.9，126.3，119.6，103.9，99.6，70.2.MSm/z(M+H)+计算值C14H13N2O225.10；实验值225.03。HPLC保留时间1.11分(柱A)氮杂吲哚的制备，方法B典型实例7-氯-4-氮杂吲哚1i的制备 向4-氯-3-硝基吡啶盐酸盐(5g)的浓盐酸溶液中小心地加入过量的SnCl2(25g)，将反应混合物搅拌12小时。在压力下浓缩，得到的混合物用2N NaOH中和至pH6-7。水相用EtOAc(5×100ml)萃取。将有机层合并，用无水MgSO4干燥，减压浓缩，得到粗产物(2.2g)4-氯-3-硝基吡啶，其纯度足以直接用于下一步反应。
将上一步骤的7g粗产物溶在200ml TFA中，然后小心地向此混合溶液中加入10.7g NBS。8小时后减压除去溶剂。将残余物溶在2N NaOH(200ml)中，水层用EtOAc(3×200ml)萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，浓缩，得到的粗产物在己烷中重结晶纯化，得到5g 3-氨基-2-溴-4-氯吡啶。
3-氨基-2-溴-4-氯吡啶的鉴定MS m/z(M+H)+，计算值C5H5BrClN2206.93；实验值206.86。HPLC保留时间1.32分(柱B)。
在0℃下向3-氨基-2-溴-4-氯吡啶在250ml乙醚中的溶液加入8.4g三氟乙酸酐。10分钟后加入5.3g Na2CO3，将反应混合物在室温下搅拌10小时，然后加水(100ml)停止反应。水相用EtOAc(3×150ml)萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，浓缩得到残余物，经硅胶柱色谱法纯化得到3.7g化合物23i。
化合物23i的鉴定2-溴-4-氯-3-三氟乙酰氨基吡啶MS m/z(M+H)+，计算值C7H4BrCIF3N2O302.90；实验值302.91。HPLC保留时间1.48分(柱B)。
将化合物23i(0.9g)、三甲基甲硅烷基乙炔(0.49g)、PdCl2(pph3)2(0.1g)和CuI(0.05g)在三乙胺(1.5ml)中的混合物于封管中在100℃加热10小时。然后减压除去溶剂。将残余物分配在水(10ml)和EtOAc(10ml)之中。水相用EtOAc(2×10ml)萃取。合并的有机层用MaSO4干燥，减压浓缩，得到粗产物24i，它在用于下一反应前不再纯化。
化合物24i的鉴定化合物24i，4-氯-3-三氟乙酰氨基-2-(三甲基甲硅烷基乙炔基)吡啶MS m/z(M+H)+，C7H4BrCIF3N2O计算值321.04；实验值320.99。HPLC保留时间1.79分(柱B)将化合物24i(0.28g)和乙醇钠(0.30ml)在20ml乙醇中的混合物在氮气氛下加热回流10小时。减压除去溶剂后，残余物用岛津自动式制备型HPLC系统纯化，得到化合物1i(0.1g)。
化合物1i的鉴定化合物1i，7-氯-4-氮杂吲哚1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.50(d 1H，J＝6.20Hz)，8.10(d，1H，J＝3.20Hz)，7.71(d，1H，J＝6.30Hz)，6.91(d，1H，J＝3.25Hz)。MS m/z(M+H)+计算值C7H6ClN2153.02；实验值152.90。HPLC保留时间0.45分(柱A)。
1)氮杂吲哚3-乙醛酰甲基酯2的制备 氮杂吲哚的酰化，方法A(7-氮杂吲哚-3-基)氧乙酸甲酯2a的制备在室温下向7-氮杂吲哚1a(20.0g，0.169mol)在无水CH2Cl2(1000ml)中的溶液加入62.1ml MeMgI(3.0M乙醚溶液，0.186mol)。将形成的混合物在室温下搅拌1小时，然后加入ZnCl2(27.7g，0.203mol)。一小时后，向溶液中逐滴注入氯氧乙酸